王自強(qiáng)，梁 勇，余潤(rùn)熹，莫鉆蘭，郭楚儀

（廣東省東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 523086)

開(kāi)展動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)是防控重大動(dòng)物疫病的基礎(chǔ)工作，對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)安全、百姓的肉食品安全和公共衛(wèi)生具有重要的意義。通過(guò)長(zhǎng)期、連續(xù)的動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)可以掌握動(dòng)物疫病的分布、流行情況和免疫的效果，為制定科學(xué)、有效的防控措施提供依據(jù)。在動(dòng)物疫病的監(jiān)測(cè)，樣品的質(zhì)量和代表性具有很重要的作業(yè)，直接影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，影響到監(jiān)測(cè)結(jié)果的分析，因此做好動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)樣品的采集是一項(xiàng)很重要的前提工作。

1 采樣人員

動(dòng)物監(jiān)測(cè)樣品的采集對(duì)采樣人員有特定的要求，采樣人員必須有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度、良好的專業(yè)知識(shí)、熟悉采樣器具的使用、嫻熟的采集技術(shù)及高度的責(zé)任心。

2 采樣前的準(zhǔn)備工作

2.1 采樣器具

2.1.1 樣品箱、保溫箱、注射器、剪刀、鑷子、解剖刀、酒精棉、碘酒棉和酒精燈等。

2.1.2 裝樣品的容器包括樣品袋、平皿、離心管和小瓶等，根據(jù)采集不同的樣品選擇不同的容器，需要確保容器的密封，不會(huì)滲漏。

2.1.3 鋁盒、已滅菌棉拭子、試管架、玻片、封口膜、瓶塞、冰袋、膠布、封條等。

2.2 記錄采樣樣品的用品

簽字筆、記號(hào)筆、樣品標(biāo)識(shí)簽、采樣登記表、畜禽耳標(biāo)識(shí)別讀器等。

2.3 樣品保存液

根據(jù)采集不同的樣品選擇相應(yīng)的樣品保存液，如：PBS液、雙抗、30%甘油鹽水緩沖液、阿氏液(A1severs)、肉湯等。

2.4 個(gè)人防護(hù)用品

手套、口罩、護(hù)目鏡、防護(hù)服、防護(hù)帽、水鞋等。

3 采樣過(guò)程中的人員防護(hù)工作

3.1 采樣過(guò)程中存在的安全隱患

3.1.1 動(dòng)物保定過(guò)程中產(chǎn)生的危害，如咬傷、抓傷、踢傷等。

3.1.2 動(dòng)物中存在病原體，在解剖或采樣過(guò)程中，對(duì)采樣人員造成感染，也可造成環(huán)境的污染和周圍動(dòng)物的威脅。

3.2 采樣人員防護(hù)

采樣人員根據(jù)采樣的類型配備相應(yīng)的防護(hù)服、護(hù)目鏡、N95口罩或標(biāo)準(zhǔn)手術(shù)用口罩、可消毒的橡膠手套和可消毒的膠靴。

4 樣品采集的原則

4.1 懷疑炭疽感染或病死動(dòng)物應(yīng)嚴(yán)禁解剖，如血液凝固不良、尸僵不全、天然孔流血的病、死動(dòng)物，應(yīng)耳尖采血涂片，首先排除炭疽。

4.2 采樣人員進(jìn)入養(yǎng)殖場(chǎng)時(shí)應(yīng)該嚴(yán)格遵守養(yǎng)殖場(chǎng)消毒措施規(guī)定，防止通過(guò)采樣將病原體帶入養(yǎng)殖場(chǎng)，引起動(dòng)物的感染和發(fā)病。采樣完畢，離場(chǎng)必須更換隔離服和手套，并做好膠靴的消毒。發(fā)生疫情的養(yǎng)殖場(chǎng)必須更加嚴(yán)格做好生物安全防護(hù)措施。

4.3 根據(jù)不同的采樣動(dòng)物，選擇適合的動(dòng)物保定方法，既要保證采樣人員的人身安全，又要保證采集樣品的質(zhì)量。

4.4 采樣過(guò)程中要避免采集樣品的交叉污染，盡量使用一次性采樣器具，如果不能做好每份一個(gè)采樣器具，要做好器具的消毒。

4.5 銳器物的處理。針頭、注射器和刀片等銳器使用完畢后投入專用的銳器盒中進(jìn)行高壓滅菌處理，使用后的剪刀、解剖刀等放入專用的容器盒消毒滅菌。

4.6 病死動(dòng)物要在隔離區(qū)或?qū)嶒?yàn)室解剖室解剖，解剖前在底下鋪上塑料布，解剖或采樣后動(dòng)物尸體和廢棄物必須通過(guò)深埋或焚燒等無(wú)害化處理，防止病原微生物的擴(kuò)散。

4.7 采樣完畢后，采樣人員必須更衣消毒，將防護(hù)服、手套、口罩等放入專用的廢棄物收集袋，進(jìn)行消毒滅菌，并對(duì)采樣的環(huán)境進(jìn)行清潔消毒。

5 采樣

樣品采集要有代表性、合理性。根據(jù)地區(qū)實(shí)際情況，對(duì)采樣點(diǎn)的布局、監(jiān)測(cè)項(xiàng)目的制定、監(jiān)測(cè)環(huán)節(jié)的選擇進(jìn)行調(diào)整，科學(xué)制定監(jiān)測(cè)采樣方案，根據(jù)監(jiān)測(cè)內(nèi)容需要采集樣品。通過(guò)科學(xué)制定采樣方案，才能獲得有效的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，才能綜合評(píng)估動(dòng)物疫病的分布和流行情況。

5.1 樣品采集時(shí)間

對(duì)免疫效果評(píng)價(jià)的監(jiān)測(cè)，正確采樣時(shí)間評(píng)價(jià)疫苗的免疫效果具有很重要的意義。動(dòng)物免疫疫苗后，需要一定的時(shí)間才能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體，并到達(dá)穩(wěn)定的水平。一般情況下，高致病性禽流感、新城疫免疫21d后；豬O型口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病免疫28d后，才能采血進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)。在開(kāi)展病原學(xué)監(jiān)測(cè)時(shí)，要根據(jù)不同病種，選擇不同時(shí)期，采集不同部位的組織樣品進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)病死的動(dòng)物要盡快采樣，一般不能超過(guò)6h，時(shí)間越久，則組織變性、腐敗，影響檢測(cè)結(jié)果。

5.2 血清樣品的采集

5.2.1 采血過(guò)程中要做到無(wú)菌操作。采血前，在采血部位進(jìn)行剪毛，用酒精棉球從里到外消毒采血部位。采血完畢后，用干棉球按壓采血部位止血。采血應(yīng)用一次性滅菌的注射器。在分離血清的過(guò)程中可以采用自然析出血清的方式，也可以采用離心分離出血清，在分離出血清之前要避免振蕩造成的溶血。

5.2.2 采集的全血可以在室溫下斜放2～4h，不能暴曬，等血液凝固自然析出血清后，倒出血清或用無(wú)菌剝離針剝離血凝塊。全血也可以通過(guò)離心分離出血清，1500～2000轉(zhuǎn)/min，離心5min，分離血清。將分離出的血清，裝入滅菌離心管中，蓋好蓋子，封口，做好標(biāo)記，4℃保存，長(zhǎng)時(shí)間保存需放置-20℃保存。

5.3 拭子樣品的采集

5.3.1 家禽/野禽咽喉拭子的采集將棉簽插入家禽喉頭口及上顎裂處來(lái)回刮3～5次取咽喉分泌液，將樣品端放入盛有1.5～2mL加有抗生素的PBS的EP管中剪下或折斷，加上管蓋，檢查EP管的密封性，確定不滲漏后用防水記號(hào)筆做好標(biāo)記編號(hào)。

5.3.2 家禽/野禽泄殖腔拭子的采集將棉簽插入泄殖腔轉(zhuǎn)2～3圈并沾取少量糞便，將樣品端放入盛有1.5～2mL加有抗生素的PBS的EP管中剪下或折斷，加上管蓋，檢查EP管的密封性，確定不滲漏后用防水記號(hào)筆做好標(biāo)記編號(hào)。

5.3.3 豬/馬鼻拭子的采集

將棉簽一端插入豬鼻腔內(nèi)2～3cm旋轉(zhuǎn)2～3圈沾上分泌液，將樣品端放入盛有1.5～2mL加有抗生素的PBS的EP管中剪下或折斷，加上管蓋，檢查EP管的密封性，確定不滲漏后用防水記號(hào)筆做好標(biāo)記編號(hào)。

5.4 組織樣品的采集

扁桃體、肝臟、脾臟、淋巴結(jié)等組織的采集，應(yīng)采用一次性的采樣器具或新消毒的器具，每份組織應(yīng)單獨(dú)放入密封袋內(nèi)，密封袋上需注明采樣編號(hào)、樣品名稱、采樣人和采樣日期等信息。采樣過(guò)程中要防止每份樣品的交叉污染，每采集一份樣品更換一副采樣工具與手套。

6 樣品的記錄

6.1 每份樣品應(yīng)單獨(dú)包裝，包裝好后，在密封袋上注明樣品名、樣品編號(hào)、采樣日期等。同一只家禽/畜血清、拭子樣品應(yīng)一一對(duì)應(yīng)，血清、泄殖腔拭子和喉拭子應(yīng)單獨(dú)用EP管裝，例如樣品編號(hào)分別為：血清樣品A1、A2、A3……;喉拭子對(duì)應(yīng)編號(hào) B1、B2、B3……;泄殖腔拭子編號(hào)為 C1、C2、C3……。

6.2 采樣過(guò)程中同時(shí)要做好采樣的登記，不同監(jiān)測(cè)項(xiàng)目制定不同的采樣記錄表，記錄表的信息包括養(yǎng)殖場(chǎng)的名稱、動(dòng)物種類、日齡、聯(lián)系人、聯(lián)系電話、存欄量、樣品數(shù)量、樣品名稱、動(dòng)物免疫情況等。采樣記錄表應(yīng)用鋼筆或簽字筆填寫(xiě)，裝樣品的離心管上可用記號(hào)筆做標(biāo)記。

[1] 張健.淺談做好動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)樣品采集工作[J].中國(guó)畜禽種業(yè)，2017，13(05)：46.

[2] 呂趙芳，等.動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)采樣工作的幾點(diǎn)體會(huì)[J].農(nóng)業(yè)技術(shù)與裝備，2013，15：53-54.

[3] 羅青，等.春秋季節(jié)集中監(jiān)測(cè)樣品的采集[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘，2017，33，11：54.