Mfn2在環(huán)孢素A誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)停滯中的作用

朱敏，張?chǎng)?，鮑旭霞，等

摘要：目的：探討組蛋白去乙?；福╤istone deacetylase，HDAC）抑制劑——環(huán)孢素A（trichostatin A，TSA）對(duì)人宮頸癌 HeLa細(xì)胞中線粒體融合蛋白2（mitofusin 2，Mfn2）表達(dá)水平及其下游通路的影響。方法：用不同濃度（0.2、0.4和0.8 μmol/L）的TSA處理HeLa細(xì)胞，采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8（cell counting kit-8，CCK-8）法測(cè)定HeLa細(xì)胞活力；采用5-溴-2'-脫氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2'-deoxyuridine，BrdU）摻入法檢測(cè)HeLa細(xì)胞增殖情況；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HeLa細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的改變；將特異性定位于線粒體的紅色熒光蛋白（red fluorescent protein，RFP）轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，24 h后通過激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞線粒體形態(tài)的變化；采用Western blot檢測(cè)HeLa細(xì)胞中Ras、Raf、磷酸化 Raf（phosphorylated Raf，p-Raf）、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、磷酸化ERK（phosphorylated ERK，p-ERK）、蛋白激酶 B（protein kinase B，PKB/Akt）、磷酸化 Akt（phosphorylated Akt，p-Akt）和Mfn2的蛋白水平；采用real-time PCR檢測(cè)Mfn2 mRNA的表達(dá)水平；采用免疫共沉淀法檢測(cè)Mfn2是否與Ras有相互作用。在HeLa細(xì)胞中過表達(dá)Mfn2后，再次觀察上述指標(biāo)的改變。結(jié)果：TSA對(duì)HeLa細(xì)胞的活力有顯著的抑制作用，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，使處于G2/M期的細(xì)胞比例明顯升高，且該作用呈劑量和時(shí)間依賴性。HeLa細(xì)胞經(jīng)TSA處理后，線粒體形態(tài)明顯變長(zhǎng)，Mfn2的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著增高，Mfn2與Ras的結(jié)合水平升高，Raf和ERK蛋白的磷酸化水平降低。在 HeLa細(xì)胞中過表達(dá) Mfn2，可導(dǎo)致線粒體長(zhǎng)度明顯增加，細(xì)胞活力亦受到明顯抑制，同時(shí)細(xì)胞阻滯于G2/M期，Raf和ERK的磷酸化水平降低，Ras-Raf-ERK通路受到抑制，但細(xì)胞凋亡水平的變化不明顯。結(jié)論：Mfn2參與了HDAC抑制劑TSA誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯，其效應(yīng)可能是通過抑制 Ras-Raf-ERK通路實(shí)現(xiàn)的。

來源出版物：中國(guó)病理生理雜志, 2016, 32(1): 95-100

入選年份：2016