蔡文超,單春會(huì),李文新,寧 明,楊麗萍,唐鳳仙

(石河子大學(xué) 食品學(xué)院,新疆 石河子 832000)

沙棘(Hippophae rhamnoides)屬于胡頹子科(Elaeagniaceae)沙棘屬(Hippophae)植物,其抗逆性強(qiáng),在鹽堿地也可生存,還具有耐寒、抗風(fēng)沙的特性[1]。沙棘果中維生素的含量豐富,尤其是維生素C(vitamin C,VC)的含量非常高,每克鮮果中含量在10～16 mg,是橘子的35倍,被稱為“VC之王”[2]。此外,沙棘中還含有三萜、脂類、蛋白質(zhì)、亞麻油、酚類、黃酮類等物質(zhì)[3]。研究發(fā)現(xiàn),沙棘具有抗氧化、抗心血管疾病、軟化血管、保持年輕、增強(qiáng)免疫力等多種功能[4]。在國際上,沙棘的價(jià)值也被越來越多的人認(rèn)可,沙棘的種植與開發(fā)也受到研究人員的重視[5]。目前,目前國內(nèi)對(duì)沙棘產(chǎn)品的研究僅有沙棘果汁、沙棘果醋等的報(bào)道,在沙棘酒方面的研究還鮮見文獻(xiàn)報(bào)道[6-7]。

新疆地區(qū)沙棘資源豐富,品種優(yōu)良,開發(fā)生產(chǎn)沙棘系列產(chǎn)品具有較高的經(jīng)濟(jì)效益,新鮮沙棘果每公斤4.50元,而沙棘酒市場(chǎng)價(jià)在100元以上,附加值較高[8]。目前,新疆地區(qū)沙棘酒的研究開發(fā)還處于起步階段,因此沙棘酒的研發(fā)對(duì)新疆沙棘產(chǎn)業(yè)的拓展具有積極的作用。

通過沙棘原料的深加工,開發(fā)研究沙棘酒,延長沙棘產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)鏈,使沙棘原料得到充分利用,擴(kuò)大市場(chǎng)需求,提高種植的積極性,促進(jìn)當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)的發(fā)展[9-10]。本研究在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法優(yōu)化沙棘酒的發(fā)酵工藝參數(shù),確定最佳的沙棘酒加工工藝條件,以期為沙棘酒的開發(fā)提供新的途徑與理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

沙棘原漿:新疆慧華沙棘生物科技有限公司；蔗糖(食品級(jí)):市售；釀酒活性干酵母(食品級(jí)):湖北安琪酵母股份有限公司；果膠酶(30 000 U/g):肇東日成酶制劑有限公司；碳酸氫鈉(食品級(jí)):山東海天生物化工有限公司；偏重亞硫酸鉀(分析純):天津市大茂化學(xué)試劑廠；葡萄糖(食品級(jí)):山東西王糖業(yè)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SPX-250B生化培養(yǎng)箱:常州諾基儀器有限公司；S-3C型pH計(jì):上海精密科學(xué)儀器有限公司；0～10酒精計(jì):河北省滄州地區(qū)醫(yī)藥公司；MC202231型手持糖度計(jì):成都泰光學(xué)有限公司；MULTIFUGEX1R離心機(jī):常州萬合儀器制造有限公司；FA201S電子分析天平:上海天平儀器廠；DK-8D數(shù)顯恒溫水浴鍋:上海予卓儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 沙棘酒工藝流程及操作要點(diǎn)

原料處理:沙棘原漿在貯藏過程中會(huì)出現(xiàn)上層浮油的現(xiàn)象,因此需要用離心機(jī)對(duì)沙棘原漿進(jìn)行去油(5 000 r/min離心15 min),下清液貯存?zhèn)溆谩?/p>

成分調(diào)整:通過料液比預(yù)試驗(yàn),將沙棘原漿與蒸餾水按2∶1(g∶mL)的比例復(fù)合得到沙棘果汁,根據(jù)理論值17 g/L的蔗糖通過發(fā)酵可以產(chǎn)生1%vol的酒精,按照預(yù)計(jì)酒精度并結(jié)合感官評(píng)定,用白砂糖將沙棘果汁的糖度調(diào)整為24%,pH值用碳酸氫鈉調(diào)整為3.8,加入30 mg/L偏重亞硫酸鉀殺菌并提高沙棘酒的穩(wěn)定性[11-12]。將沙棘汁于65℃,恒溫水箱中殺菌20 min,再冷卻至30℃[14]。

酵母的活化:在5%的葡萄糖溶液中加入釀酒活性干酵母,混合均勻,于37℃水浴活化30 min,作為菌種使用[13]。

發(fā)酵:在無菌條件下,接種活化后的酵母菌于沙棘汁中,在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行發(fā)酵,每隔12 h觀察發(fā)酵液殘?zhí)橇康淖兓?當(dāng)殘?zhí)橇烤S持72 h不變時(shí),終止發(fā)酵。

澄清:向發(fā)酵完成的沙棘酒中加入明膠和殼聚糖混合澄清劑,在23℃條件下澄清后過濾[15]。

1.3.2 沙棘酒發(fā)酵條件優(yōu)化的單因素試驗(yàn)

選取料液比(1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1(g∶mL))、初始糖度(22°Bx、24°Bx、26°Bx、28°Bx、30°Bx)、酵母添加量(0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%)、發(fā)酵溫度(20℃、22℃、24℃、26℃、28℃)進(jìn)行單因素發(fā)酵試驗(yàn),以酒精度和感官評(píng)分為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),確定各因素對(duì)沙棘酒發(fā)酵品質(zhì)的影響。

1.3.3 沙棘酒響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上,選取因素料液比(A)、發(fā)酵溫度(B)、初始糖度(C)和酵母添加量(D),并以酒精度(X)和感官評(píng)分(Y)為響應(yīng)值,采用Design-Expert 8.0軟件中心組合試驗(yàn),進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)[16]。響應(yīng)面試驗(yàn)因素與水平見表1。

表1 沙棘酒發(fā)酵條件優(yōu)化響應(yīng)面因素與水平Table 1 Factors and levels of response surface experiments for fermentation conditions optimization of sea-buckthorn wine

1.3.4 感官評(píng)定

選擇有果酒品評(píng)經(jīng)驗(yàn)的人員,組成一個(gè)10人的小組,每人分別對(duì)沙棘酒進(jìn)行品評(píng)后打分,結(jié)果取平均值,主要從外觀色澤、形態(tài)、香氣、口味幾方面進(jìn)行評(píng)定,評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)按表2的評(píng)審標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[17]。

表2 沙棘酒感官評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Sensory evaluation standards of sea-buckthorn wine

1.3.5 理化指標(biāo)檢測(cè)方法

可溶性固形物的測(cè)定:采用糖度計(jì)法；總糖、總酸、酒精度的測(cè)定:參照GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》[18]；二氧化硫含量的測(cè)定:參照GB 5009.34—2016《食品中二氧化硫的測(cè)定》[19]；菌落總數(shù)的測(cè)定:參照GB 4789.2—2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定》[20]；大腸菌群的測(cè)定:參照GB 4789.3—2010《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)》[21]；致病菌的測(cè)定:參照GB 29921—2013《食品中致病菌限量》[22]。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 料液比對(duì)沙棘酒品質(zhì)的影響

圖1 料液比對(duì)沙棘酒酒精度和感官評(píng)分的影響Fig.1 Effect of solid-liquid ratio on alcohol content and sensory score of sea-buckthorn wine

由圖1可知,隨著沙棘果漿比例的增加,沙棘酒酒精度呈下降趨勢(shì),而感官評(píng)分呈先增大后減少的趨勢(shì)。當(dāng)料液比為1∶1(g∶mL)時(shí),沙棘酒酒精度最高,達(dá)到了12.9%vol,但果香味和酒香不夠,沙棘的味道不突出,感官評(píng)分最低,為65分；當(dāng)料液比為3∶1(g∶mL)時(shí),色澤金黃色,口感爽口,感官評(píng)分最高,為88分,且酒精度也相對(duì)較高,為12.6%vol。此后,隨著沙棘和水的比例升高,沙棘本身不愉快的酸味逐漸顯現(xiàn),感官評(píng)分持續(xù)下降。因此,選擇料液比為3∶1(g∶mL)時(shí)為為宜。

2.1.2 酵母添加量對(duì)沙棘酒發(fā)酵的影響

圖2 酵母添加量對(duì)沙棘酒酒精度和感官評(píng)分的影響Fig.2 Effect of yeast addition on alcohol content and sensory score of sea-buckthorn wine

由圖2可知,隨酵母添加量的增加,沙棘酒酒精度先迅速增加后趨于平衡,而而感官評(píng)分呈先增大后減少的趨勢(shì)。當(dāng)酵母添加量為0.01%時(shí),沙棘酒發(fā)酵不完全,酒精度較低(10.2%vol),酒香味也不足,感官評(píng)分為65分；隨著加入的酵母量的增加,酒精度與感官評(píng)分也隨之增加,當(dāng)酵母量在0.03%時(shí),沙棘酒果香和酒香濃郁,無雜味,感官評(píng)分最高,為90分；此后,酵母添加量繼續(xù)增加,而由于酵母自身的消耗作用及發(fā)酵作用,糖的消耗量加快,酒精度變化不大。酵母含量過高導(dǎo)致酒中產(chǎn)生異味,感官評(píng)分反而不高。因此,選擇酵母添加量0.03%為宜。

2.1.3 初始糖度對(duì)沙棘酒發(fā)酵的影響

圖3 初始糖度對(duì)沙棘酒酒精度和感官評(píng)分的影響Fig.3 Effect of initial sugar content on alcohol content and sensory score of sea-buckthorn wine

由圖3可知,隨著初始糖度的增加,沙棘酒酒精度和感官評(píng)分均呈先增加后減少的趨勢(shì)。當(dāng)初始糖度為22°Bx時(shí),沙棘酒的酒精度為10.3%vol,由于初始糖度較低,使沙棘本身的不愉快的酸味突出,感官評(píng)分也較低；隨著初始糖度的增加,沙棘酒的酒精度與感官評(píng)分也隨之增加,當(dāng)初始糖度為26°Bx時(shí),酒精度達(dá)到最高,此時(shí)感官評(píng)分也達(dá)到最高；當(dāng)初始糖度超過26°Bx時(shí),過高的濃度使酵母菌的發(fā)酵速度下降,果酒發(fā)酵不完全,酒精度含量與感官評(píng)分也隨之下降。因此,選擇初始糖度為26°Bx。

2.1.4 發(fā)酵溫度對(duì)沙棘酒發(fā)酵的影響

圖4 發(fā)酵溫度對(duì)沙棘酒酒精度和感官評(píng)分的影響Fig.4 Effect of fermentation temperature on alcohol content and sensory score of sea-buckthorn wine

由圖4可知,當(dāng)發(fā)酵溫度為20℃時(shí),沙棘酒的酒精度為10.2%vol；隨著發(fā)酵溫度的升高,酒精含量隨之升高；當(dāng)發(fā)酵溫度為30℃時(shí),酒精度最高為11.5%vol,此時(shí)發(fā)酵溫度適合酵母菌的生長,繁殖速度快,消耗過多酒液中的營養(yǎng)成分,對(duì)沙棘酒香氣和風(fēng)味產(chǎn)生不良影響,使感官評(píng)分下降；當(dāng)發(fā)酵溫度為24℃時(shí),沙棘酒發(fā)酵速率適中,酒精度相對(duì)較高,且感官評(píng)分達(dá)到最高,因此選擇發(fā)酵溫度24℃為宜。

2.2 響應(yīng)面分析方案與結(jié)果

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,對(duì)4個(gè)因素進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化,試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表3。用Design-Expert 8.0.6的中心組合試驗(yàn),進(jìn)行4因素3水平設(shè)計(jì),總共有29組試驗(yàn),以酒精度(X)和感官評(píng)分(Y)為雙響應(yīng)值,進(jìn)行試驗(yàn),其中有24個(gè)為析因試驗(yàn),有5個(gè)為中心試驗(yàn)。響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果與分析見表3。

表3 沙棘酒發(fā)酵工藝條件優(yōu)化響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 3 Design and results of response surface experiments for fermentation process conditions optimization of sea-buckthorn wine

續(xù)表

2.2.1 回歸模型的建立及方差分析

利用響應(yīng)面設(shè)計(jì)軟件,對(duì)表4試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析,得到多元二次回歸方程:

酒精度的回歸方程:

X=11.54+0.42A+0.23B+0.52C+0.85D+0.075AC+0.18AD+

感官評(píng)分的回歸方程:

酒精度和感官評(píng)分的回歸分析結(jié)果見表4。顯著性檢驗(yàn)結(jié)果(表4)表明,兩種模型回歸均顯著(P＜0.0001),失擬項(xiàng)分別為:酒精度為響應(yīng)值時(shí),P=0.9662＞0.05；感官評(píng)分為響應(yīng)值時(shí):P=0.3821＞0.05,失擬項(xiàng)都不顯著。并且模型決定系數(shù)R2X=0.886 3,R2Y=0.971 5,表明兩種模型均與實(shí)際試驗(yàn)擬合較好,各因素與酒精度和感官評(píng)分之間存在良好的線性關(guān)系,此模型可用作預(yù)測(cè)和分析沙棘酒發(fā)酵工藝參數(shù)。

酒精度的回歸方程中除交互項(xiàng)AB、AC、AD、BC無顯著影響外,其余各項(xiàng)均有顯著性影響(P＜0.05),其中因素A、C、D、A2、C2、D2對(duì)酒精度的影響達(dá)到極顯著(P＜0.01),對(duì)回歸方程優(yōu)化后為:X=11.54+0.42A+0.23B+0.52C+0.85D+0.35BD+0.37CD-0.68A2-0.28B2-0.71C2-0.53D2；感官評(píng)分的回歸方程中除交互項(xiàng)AD、CD無顯著影響外,其余各項(xiàng)均有顯著性影響(P＜0.05),其中因素A、B、C、D、AB、BD、A2、B2、C2、D2對(duì)感官評(píng)分的影響達(dá)到極顯著(P＜0.01),對(duì)回歸方程優(yōu)化后為:Y=94.00+5.25A+3.67B+2.42C+1.67D+1.75AB-1.25AC+1.50BC+2.75BD-7.71A2-3.83B2-6.46C2-5.33D2。

此外,通過F值大小,在選定實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi),推斷各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要性,F值越大,其對(duì)應(yīng)的重要性也越大。由表4可知,各因素的影響因子為(酒精度):D＞C＞A＞B；各因素的影響因子為(感官評(píng)分):A＞B＞C＞D。

表4 回歸模型方差分析Table 4 Variance analysis of regression model

2.2.2 響應(yīng)面分析及優(yōu)化

采用Design-Expert 8.0.6軟件分析回歸模型,料液比、發(fā)酵溫度、初始糖度、酵母添加量4個(gè)因素交互作用對(duì)酒精度和感官評(píng)價(jià)影響的響應(yīng)面和等高線,結(jié)果見圖5。

圖5 料液比、發(fā)酵溫度、初始糖度、酵母添加量交互作用對(duì)沙棘酒酒精度和感官評(píng)分影響的響應(yīng)面和等高線Fig.5 Response surface plots and contour line of effects of interactions between solid-liquid ratio,fermentation temperature,initial sugar content and yeast addition on alcohol content and sensory score of sea-buckthorn wine

由圖5可知,酵母添加量為定值時(shí),發(fā)酵溫度升高對(duì)酒精度沒有明顯變化,當(dāng)加入的酵母量為0.02%時(shí),酒精度開始快速增加；發(fā)酵溫度為定值時(shí),酒精度隨著酵母添加量的增加而升高；酵母添加量為定值時(shí),隨著初始糖度的升高,酒精度先升高后降低；當(dāng)初始糖度保持不變時(shí),酒精度隨著酵母添加量的增加而升高。

發(fā)酵溫度為定值時(shí),隨著料液比的比例增大,感官評(píng)分的變化是先升高后降低,當(dāng)采用22℃以上發(fā)酵時(shí),感官評(píng)分變化趨于平緩；當(dāng)料液比保持不變時(shí),感官評(píng)分隨著發(fā)酵溫度的增加變化平緩。初始糖度為定值時(shí),隨著料液比的升高,感官評(píng)分升高；當(dāng)料液比保持不變時(shí),感官評(píng)分隨著初始糖度的增加先升高后降低。發(fā)酵溫度為定值時(shí),提高初始糖度,感官評(píng)分變化是先升高后降低；當(dāng)初始糖度保持不變時(shí),感官評(píng)分隨著發(fā)酵溫度的提高而升高,當(dāng)初始糖度達(dá)到26°Bx,感官評(píng)分變化趨于平緩。酵母添加量為定值時(shí),提高發(fā)酵溫度,感官評(píng)分升高；當(dāng)發(fā)酵溫度為定值時(shí),感官評(píng)分隨著酵母添加量的增加先升高后降低。

2.2.3 響應(yīng)面驗(yàn)證試驗(yàn)

由DesignExpert8.0.6軟件進(jìn)行優(yōu)化,以酒精度和感官評(píng)分為雙響應(yīng)值,確定最佳發(fā)酵參數(shù)為料液比為3.43∶1(g∶mL)、發(fā)酵溫度26℃、初始糖度26.99°Bx、酵母添加量0.04%,在此發(fā)酵條件下,沙棘酒酒精度為12.57%vol,感官評(píng)分為95.95分?？紤]到實(shí)際生產(chǎn),將最佳工藝參數(shù)調(diào)整為料液比為3.4∶1(g∶mL)、發(fā)酵溫度26 ℃、初始糖度27 °Bx、酵母添加量為0.04%。按照優(yōu)化的發(fā)酵條件進(jìn)行沙棘酒釀造,測(cè)定酒精度,并進(jìn)行感官評(píng)分。實(shí)際測(cè)得的酒精度為12.0%vol,感官評(píng)分為93分,與理論值差異均不顯著(P＞0.05)。

2.3 產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)

在最佳發(fā)酵條件下,所得沙棘酒的各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果為:沙棘酒的總酸含量為7.5 g/L,總糖含量為64 g/L,酒精度為12.0%vol,總二氧化硫含量為52 mg/L。其微生物指標(biāo)中,細(xì)菌總數(shù)≤100 CFU/mL；大腸桿菌≤3 MPN/100 mL；致病菌未檢出。沙棘酒各項(xiàng)指標(biāo)符合國家標(biāo)準(zhǔn)參照GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》。

3 結(jié)論

以沙棘汁為原料,通過單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面分析,考慮料液比、發(fā)酵溫度、初始糖度、酵母添加量對(duì)沙棘酒發(fā)酵的影響。結(jié)果顯示,沙棘酒發(fā)酵優(yōu)化參數(shù)為料液比3.4∶1(g∶mL)、發(fā)酵溫度26 ℃、初始糖度27 °Bx、酵母添加量0.04%,在此工藝條件下,發(fā)酵所得沙棘酒酒的精度為12.0%vol,感官評(píng)分為93分。酒體呈現(xiàn)出金黃色的外觀特征,沙棘果香突出,酒香濃郁,口感甘洌,是一種具有廣闊市場(chǎng)前景的果酒,對(duì)于拓寬沙棘深加工渠道有著深淵的意義。

[1]于 暢,王競(jìng)紅,薛 菲,等.沙棘對(duì)堿性鹽脅迫的形態(tài)和生理響應(yīng)[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào),2014,34(9):70-75.

[2]劉 勇,廉永善,王穎莉,等.沙棘的研究開發(fā)評(píng)述及其重要意義[J].中國中藥雜志,2014,39(9):1547-1552.

[3]程康華,高擁軍.沙棘油的綜合開發(fā)利用[J].生物質(zhì)化學(xué)工程,2004,38(6):42-46.

[4]臧茜茜,鄧乾春,從仁懷,等.沙棘油功效成分及藥理功能研究進(jìn)展[J].中國油脂,2015,40(5):76-81.

[5]賈 玉,劉 偉,王海平.國內(nèi)外沙棘開發(fā)研究進(jìn)展[J].圖書情報(bào)導(dǎo)刊,2005,15(14):127-128.

[6]宋 翔,李 悅,魏文靜.沙棘復(fù)合果蔬汁飲料配方研究[J].食品研究與開發(fā),2015,36(8):43-45.

[7]牛廣財(cái),朱 丹,魏文毅.沙棘果醋飲料的研制[J].食品工業(yè)科技,2012,33(23):226-228.

[8]胡 蘭.新疆產(chǎn)中國沙棘(Hippophae rhamnoidesL.subsp.sinensisRousi)化學(xué)成分基礎(chǔ)研究[D].烏魯木齊:新疆醫(yī)科大學(xué),2007.

[9]陳奇凌,王東健,花東來,等.對(duì)新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)發(fā)展沙棘產(chǎn)業(yè)的思考[J].水資源開發(fā)與管理,2013,11(1):13-15.

[10]陳奇凌,王東健,花東來.新疆沙棘產(chǎn)業(yè)發(fā)展優(yōu)勢(shì)與建議[J].沙棘:教育縱橫,2010(4):223.

[11]李 華.現(xiàn)代葡萄酒工藝學(xué)[M].西安:陜西人民出版社,2000:17-18.

[12]CARRETé R,VIDAL M T,BORDONS A,et al.Inhibitory effect of sulfur dioxide and other stress compounds in wine on the ATPase activity ofOenococcus oeni[J].Fems Microbiol Lett,2002,211(2):155-159.

[13]陳 敏,梁新樂,勵(lì)建榮.葡萄酒活性干酵母復(fù)水活化條件的研究[J].江蘇食品與發(fā)酵,2001(2):6-9.

[14]張 峰,李志斌,劉景蘭,等.殺菌技術(shù)在飲料生產(chǎn)管理中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代營銷:學(xué)苑版,2013(2):125-125.

[15]辛秀蘭,蓋禹含,劉俊英,等.不同澄清劑對(duì)藍(lán)莓發(fā)酵酒澄清效果的影響[J].中國釀造,2010,29(2):119-122.

[16]柳曉晨.藍(lán)莓類冰酒加工關(guān)鍵技術(shù)及其應(yīng)用[D].哈爾濱:東北農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

[17]薛桂新,尚曉敏.2種酵母對(duì)藍(lán)靛果果酒理化特性的影響[J].中國釀造,2011,30(12):134-137.

[18]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).GB/T 15038—2006葡萄酒、果酒通用分析方法[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2016.

[19]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).GB 5009.34—2016食品中二氧化硫的測(cè)定[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2016.

[20]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).GB 4789.2—2016食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2016.

[21]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).GB 4789.3—2010食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010.

[22]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).GB 29921—2013食品中致病菌限量[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2013.