毛國其，蔣文良

(重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院兒童中心，重慶402360)

呼吸道合胞病毒作為臨床上一類及其容易引起嬰幼兒下呼吸道感染的常見病原體，以毛細(xì)支氣管炎的發(fā)生率較高，據(jù)調(diào)查資料顯示，每年有40%～50%的毛細(xì)支氣管炎可由呼吸道合胞病毒所致，臨床上可表現(xiàn)為不同程度的喘息發(fā)作、反復(fù)咳嗽等癥狀，且部分患兒可隨著疾病的不斷進(jìn)展發(fā)展成為哮喘，加重病情，對患兒的生命健康造成進(jìn)一步的影響[1]。目前，關(guān)于呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎的發(fā)病機(jī)制尚未研究清楚，隨著對T淋巴細(xì)胞亞群的研究深入，對血Th17/Treg水平進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)這兩種T細(xì)胞亞群在肺炎發(fā)生發(fā)展過程中具有重要的作用[2]?，F(xiàn)重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院對小兒呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎血Th17/Treg失衡的機(jī)制展開分析，結(jié)果總結(jié)報告如下:

1資料與方法

1.1一般資料

選取重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院2014年9月至2016年9月收治的60例呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎患兒作為觀察組，另選擇我院收治的60例接受同期體檢的健康小兒作為對照組。觀察組患兒入院后均接受了固相酶聯(lián)免疫吸附試驗對呼吸道合胞病毒檢測，均呈現(xiàn)陽性，臨床上表現(xiàn)為不同程度的氣促、喘憋、陣發(fā)性咳嗽、肺部濕羅音等情況，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《諸福棠實用兒科學(xué)》[3]，排除了合并嚴(yán)重心腦血管疾病、肝腎功能障礙、發(fā)病前1個月內(nèi)使用過糖皮質(zhì)激素者、存在自身免疫性疾病者。觀察組中男35例，女25例，年齡2～20月齡，平均(14.9±2.4)月齡，病程在2～5d，平均病程為(3.9±0.5)d；對照組中男36例，女24例，年齡在3～22月齡，平均(15.1±1.9)月齡。兩組患兒一般資料無明顯差異，具有可比性。全部患兒均簽署了關(guān)于本次試驗的知情權(quán)同意書，試驗符合醫(yī)學(xué)倫理會審核批準(zhǔn)。

1.2方法

采用流式細(xì)胞術(shù)對兩組小兒外周血Th17/Treg的百分率進(jìn)行測量與分析，另采用定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)的方法對Th17h和Treg特異性轉(zhuǎn)錄因子Rort及Foxp3 mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行測量。抽取兩組患兒空腹靜脈血5mL，放置在離心機(jī)中給予離心處理，共離心10min左右，將血清分離后放置在-20℃環(huán)境中保存[4]。所采用的流式細(xì)胞分析儀及固定破膜劑均由美國BD公司提供。參考反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書提取外周血淋巴細(xì)胞總RNA，合并第一條cDNA鏈，做基因擴(kuò)增，對轉(zhuǎn)錄因子Rort及Foxp3 mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行測量，利用2-△Ct法進(jìn)行mRNA的相對定量分析[5]。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件對本次研究所取得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料采取t檢驗，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(χ±S)的形式表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組小兒外周血Th17/Treg的百分率對比

觀察組Th17百分率高于對照組，Treg百分率低于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，見表1。

表1兩組小兒外周血Th17/Treg的百分率對比(χ±S)

Table 1 Comparison of percentage of Th17/Treg in peripheral blood between two groups(χ±S)

組別例數(shù)(n)Th17(%)Treg(%)對照組601．63±0．367．40±1．12觀察組603．25±1．023．21±0．85t3．364．12P<0．05<0．05

2.2兩組小兒Th17和Treg特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt及Foxp3 mRNA的表達(dá)水平對比

觀察組Th17特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt表達(dá)水平高于對照組，Treg特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3表達(dá)水平低于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，見表2。

表2兩組小兒Th17和Treg特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt及Foxp3 mRNA的表達(dá)水平對比(χ±S)

Table 2 Comparison of expression levels of Th17 and Treg specific transcription factor RORγt and Foxp3 mRNA between two groups(χ±S)

組別例數(shù)(n)RORγtFoxp3對照組601．89±0．876．23±1．08觀察組605．71±0．892．34±0．61t3．894．09P<0．05<0．05

3討論

3.1毛細(xì)支氣管炎患兒體內(nèi)變態(tài)反應(yīng)變化

毛細(xì)支氣管炎作為臨床上一類較為常見的下呼吸道感染性疾病，以喘息為主要臨床癥狀與表現(xiàn)，呼吸道合胞病毒作為引起嬰幼兒毛細(xì)支氣管炎發(fā)生的病原體，屬于副黏病毒科肺病毒[6]。目前雖然有報道解釋毛細(xì)支氣管炎與哮喘的發(fā)生有明確的相關(guān)性，但具體的發(fā)病機(jī)理仍不清楚，但有研究報道指出，毛細(xì)支氣管炎患兒體內(nèi)存在類似于哮喘患兒的變態(tài)反應(yīng)，例如存在Th1/Th2細(xì)胞因子失衡，通?？杀憩F(xiàn)為Th1細(xì)胞因子受到抑制，Th2細(xì)胞因子亢進(jìn)，但這不能完全解釋毛細(xì)支氣管炎的發(fā)生機(jī)制[7]。近年來，隨著研究的不斷進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞與Th1、Th2的CD4+T細(xì)胞亞群并不相同，發(fā)現(xiàn)Th17可通過不同的途徑引起疾病的發(fā)生，表明Th17在炎癥及自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用。

3.2毛細(xì)支氣管炎患兒體內(nèi)Treg與Th17的失衡表現(xiàn)

在正常情況下，Treg與Th17在功能上呈現(xiàn)出互相拮抗的狀態(tài)，且在分化上互相一致，能夠形成一種平衡的狀態(tài)來維持機(jī)體正常的免疫功能狀態(tài)。Th17細(xì)胞具有較為明確的IL-23依賴性，能夠促進(jìn)分泌出IL-17A、IL-17F、IL-21等多種細(xì)胞因子，其中IL-17能夠參與各類炎癥性疾病、腫瘤性疾病及自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展，而人類的IL-17通常由Th17細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞等細(xì)胞產(chǎn)生。有臨床資料顯示，IL-17能夠?qū)χ行粤＜?xì)胞的發(fā)育成熟產(chǎn)生突出的促進(jìn)作用，能夠招募中性粒細(xì)胞，并有效促進(jìn)了細(xì)胞因子的釋放，加重炎癥反應(yīng)，另外，IL-17還能夠?qū)獾澜M織的纖維化產(chǎn)生促進(jìn)作用，并參與了氣道的重塑[8]。Treg細(xì)胞則能夠?qū)γ庖呒?xì)胞產(chǎn)生突出的負(fù)性調(diào)節(jié)作用，通過促進(jìn)釋放出IL-10等效應(yīng)因子，從而對T細(xì)胞的活性及增殖產(chǎn)生抑制作用，發(fā)揮免疫抑制的功能。而RORγt和Foxp3分別作為Th17和Treg細(xì)胞特異性的轉(zhuǎn)錄因子，參與了兩種細(xì)胞的分化和細(xì)胞因子的分泌，通過對二者表達(dá)水平的檢測，能夠進(jìn)一步分析Th17/Treg的失衡參與了小兒呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎的發(fā)生發(fā)展情況。

本研究結(jié)果顯示，觀察組Th17百分率高于對照組，Treg百分率較低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組Th17特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt表達(dá)水平高于對照組，Treg特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3表達(dá)水平較低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果提示小兒呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎相比于健康小兒在Th17及Treg方面呈現(xiàn)出明顯的表達(dá)差異，當(dāng)Th17/Treg表現(xiàn)出失衡的情況時，則參與了疾病的發(fā)生發(fā)展。綜上所述，Th17/Treg的失衡參與了小兒呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎的發(fā)生發(fā)展，但由于本次研究樣本量有限，在收集數(shù)據(jù)方面可能存在一定的差異，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究，以獲得精確的結(jié)論，從而為呼吸道合胞病毒肺炎患兒的治療提供可靠依據(jù)。

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