王志勇+胡俊+潘小平+黃大勇+曹鐵松

摘要：安陸金葉銀杏原始繁殖材料選自大樹(shù)芽變側(cè)枝。通過(guò)嫁接擴(kuò)繁后定植觀察，無(wú)性繁殖的幼樹(shù)，在6年生長(zhǎng)過(guò)程中葉片的黃色性狀表現(xiàn)穩(wěn)定，保持了母本葉片色變的特性，其觀葉時(shí)間長(zhǎng)，觀賞價(jià)值高，可廣泛用于景觀栽培，且葉片總黃酮（白果雙黃酮、異白果雙黃酮等）含量顯著高于對(duì)照，是理想的采葉原料品種。

關(guān)鍵詞：安陸金葉銀杏；色度；總黃酮含量

中圖分類(lèi)號(hào)：S79295文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1004-3020（2017）06-0031-05PreliminaryReportofGinkgobiloba‘AnluJinyeCharacteristicsWangZhiyong（1）HuJun（1）PanXiaoping（2）HuangDayong（3）CaoTiesong（4）

（1.CityForestryScienceAndTechnologyExtensionCenterXiaogan432000；

2.ForestryBureauofAnluCityAnlu432600；

3.AnluCityWildAnimalAndForestPlanConservationStationAnlu432600；

4.ForestryBureauofYunmengCounty432500）

Abstract：Ginkgobiloba‘AnluJinyematerialswereselectedfromthebudmutationbranchofbigtree.Engraftmentafterobservationbygraftingpropagation，asexualreproductionofyoungtrees，leavesyellowcharactersinthesixyearsofgrowthprocessperformanceisstableandkeepthecharacteristicsofthefemaleparentleafcolorchange，itsfoliagetimeislong，andhadahighornamentalvalue，canbewidelyusedinthecultivation.ThecontentofFlavonoidsinleaves（Ginkgeting，isoginkgetin，etc.）issignificantlyhigherthanthatofcontrol，istheidealrawmaterialforleafpickingvarieties.In2014，itwasapprovedthroughprovinciallevelvarietiesandshouldbepromotedvigorously.

Keywords：Ginkgobiloba‘AnluJinye；chromaticity；totalflavonoidcontent

銀杏科（Ginkgoaceae）植物僅一屬一種，為第四紀(jì)冰川期遺留下來(lái)的孑遺植物[1]，為我國(guó)特產(chǎn)，被稱為植物“活化石”。具有食用、藥用、材用及觀賞等多種用途，是特種經(jīng)濟(jì)林生產(chǎn)、園林栽培觀賞的重要落葉喬木樹(shù)種。安陸市位于湖北省東北部，地處大洪山余脈與江漢平原北緣交匯地帶。境內(nèi)既有天然分布的銀杏（GinkgobilobaLinn）群落，又有豐富的次生銀杏林地，現(xiàn)存銀杏大樹(shù)29萬(wàn)株，千年以上的古銀杏59株，500年以上的古銀杏1468株，百年以上的古銀杏4683株，素有“銀杏之鄉(xiāng)”的美譽(yù)。2009年11月，全國(guó)首家以單一樹(shù)種命名的國(guó)家森林公園在安陸市設(shè)立。1987年在該市王義貞鎮(zhèn)，發(fā)現(xiàn)一株銀杏有根大枝的葉片在生長(zhǎng)期表現(xiàn)為淡黃-黃色-淡綠-黃色，其它枝條的葉子葉片均為淡綠-綠色-黃色。遂多年連續(xù)跟蹤調(diào)查，發(fā)現(xiàn)該枝從萌芽展葉開(kāi)始，一直到5月底葉均為黃色，6月份后，新萌發(fā)的葉為淡黃色，成熟的葉片逐漸轉(zhuǎn)為淡綠色，10月中旬后轉(zhuǎn)黃色。該性狀表現(xiàn)穩(wěn)定，可利用其春秋季葉金黃、夏季淡黃、淡綠，且總黃酮含量高的特性，在生產(chǎn)上作為園林綠化觀葉品種和采葉原料品種繁殖、推廣利用。

1材料與方法

1.1繁殖方法

母樹(shù)高16m，胸徑110cm，冠幅13m，黃葉變異枝長(zhǎng)7m，基部直徑195cm。經(jīng)過(guò)連續(xù)6年從該枝條采芽、1～2年生枝條，用于擴(kuò)繁。用于嫁接的砧木為1～4年生銀杏實(shí)生苗，種子育苗時(shí)采用條播，行距25cm，嫁接操作人員較固定，春季采用劈接、插皮接，秋季為芽接，圃地為老苗圃地，嫁接后常規(guī)化管理，無(wú)其他特殊管護(hù)措施。

1.2葉片色度比較

春季至初夏，對(duì)無(wú)性繁殖的3年生幼樹(shù)與同年生的砧木苗，每周進(jìn)行一次葉片色素?cái)z影采樣，攝影時(shí)間為上午10時(shí)，用SONYP100數(shù)碼相機(jī)像距60cm、定焦35mm（相當(dāng)于135全幅相機(jī)60mm焦段）拍照，依據(jù)天氣程控曝光，兩種采樣曝光參數(shù)一致，記錄銀杏葉片的顏色影像。用PhotoshopCS軟件按524色RGB值數(shù)據(jù)，把黃葉銀杏和普通銀杏葉片顏色轉(zhuǎn)化成RGB值繪出葉片顏色圖值，描述銀杏葉片發(fā)育過(guò)程中不同時(shí)間的葉片顏色，比較兩者差異。

1.3生化分析比較

（1）黃酮含量測(cè)定。委托南京林業(yè)大學(xué)采集下屬林場(chǎng)定植的金葉銀杏葉片，由南林大林學(xué)院實(shí)驗(yàn)室采用液相色譜法（HPLC）檢測(cè)葉片總黃酮含量，所得數(shù)據(jù)與采用HPLC檢測(cè)方法的本地區(qū)普通銀杏[2-3]以及廣東、江西、甘肅等外地銀杏總黃酮含量[4-7]進(jìn)行比較，分析金葉銀杏作為采葉原料培育的經(jīng)濟(jì)性。

（2）葉片色素因子。委托南京林業(yè)大學(xué)采集下屬林場(chǎng)定植的金葉銀杏、普通銀杏葉片，由南林大林學(xué)院實(shí)驗(yàn)室做金葉銀杏與普通銀杏的類(lèi)胡蘿卜素、葉綠素含量分析。測(cè)定采用丙酮-乙醇混合液分光光度法，比較黃化因子在金葉銀杏葉中與普通銀杏的差別。endprint

（3）DNA檢測(cè)。委托南京林業(yè)大學(xué)采集下屬林場(chǎng)定植的金葉銀杏、普通銀杏葉片，由南林大林學(xué)院實(shí)驗(yàn)室用bioer生命快車(chē)梯度PCR儀，TOMYMX-160冷凍離心機(jī)，DYY-6C電泳儀、DYC-34A電泳槽，TAKARAtaq酶，TAKATADNA提取試劑盒，SYNGENEGENEGenios成像系統(tǒng)。檢測(cè)方法為SSR基因分析、8%PAGE膠檢測(cè)。反應(yīng)體系見(jiàn)表1，上樣順序?yàn)閺膍arker開(kāi)始，普通銀杏、金色銀杏、普通銀杏、金色銀杏、比較金葉銀杏與普通銀杏的基因差異。

（4）黃葉表型觀察。將無(wú)性繁殖的幼苗在安陸市王義貞鎮(zhèn)建試驗(yàn)基地2hm24980株、巡店鎮(zhèn)建試驗(yàn)基地04hm2996株、孝南區(qū)西河鎮(zhèn)1hm22490株、云夢(mèng)縣隔蒲潭鎮(zhèn)033hm2822株，共計(jì)9288株。定植后，自春季萌發(fā)展葉至深秋落葉連續(xù)4年，每月定期做黃葉表型穩(wěn)定性觀察。

2結(jié)果與分析

2.1嫁接繁殖

經(jīng)過(guò)連續(xù)7年，用芽接方法繁殖的苗木，當(dāng)年生枝梢生長(zhǎng)量30～50cm。用枝接方法繁殖的苗木，當(dāng)年生枝梢生長(zhǎng)量20～40cm。嫁接苗葉片較普通銀杏苗為厚，葉寬7～9cm，葉長(zhǎng)5～7cm，葉柄長(zhǎng)4～6cm。最大的一片葉片，葉寬可達(dá)13～15cm，葉長(zhǎng)10cm左右，葉柄長(zhǎng)5cm左右。嫁接繁殖黃葉銀杏效果見(jiàn)表2，以插皮接、芽接成活的苗木為多。嫁接苗葉片全展葉后保持黃色、夏季保持淡黃特征見(jiàn)圖1、2。在后續(xù)的推廣生產(chǎn)中，全部采用嫁接無(wú)性繁殖的苗木，以保持黃葉的特性。

2.2色度比較

經(jīng)過(guò)連續(xù)4年對(duì)1～4年生幼樹(shù)定點(diǎn)觀測(cè)，可見(jiàn)黃葉銀杏每年的新生芽為淺黃色，葉片在4月為橙黃色至金黃色，5月份逐漸轉(zhuǎn)為淺黃綠色，6～10月為黃綠色，其中綠色成分加重，10月中旬后逐漸轉(zhuǎn)為黃色。3月至6月的色譜值比較見(jiàn)圖3。

2.3生化分析

（1）葉主要成分。葉色素樣品分析結(jié)果見(jiàn)表3。從表中可見(jiàn)，黃葉植株的總?cè)~綠素明顯低于綠色葉植株，其中葉綠素α低65倍、葉綠素β63倍，但類(lèi)胡蘿卜素只低24倍，而黃色葉植株的類(lèi)胡蘿卜素/葉綠素之比是綠色葉植株的26倍，即黃色葉植株的類(lèi)胡蘿卜素相對(duì)含量占比高于綠色葉植株。同時(shí)，黃葉型植株總黃酮含量也高于綠葉型植株17倍。

（2）總黃酮含量。銀杏因生長(zhǎng)地域，樹(shù)齡大小、品種、采摘測(cè)定年度的差別，黃酮含量波動(dòng)較大，見(jiàn)表4。但黃葉銀杏與同年度普通銀杏對(duì)照相比，總黃酮含量高1.77倍。銀杏葉作為黃酮的藥用原料，國(guó)際市場(chǎng)對(duì)其含量的經(jīng)濟(jì)回收指標(biāo)為≥24%。如將黃葉銀杏用于采葉原料生產(chǎn)，經(jīng)濟(jì)效益優(yōu)勢(shì)顯著。

（3）8%PAGE檢測(cè)結(jié)果。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的DNA序列分析見(jiàn)表5、圖4。測(cè)試中10對(duì)引物8對(duì)有效擴(kuò)增，54號(hào)引物和64號(hào)引物無(wú)法擴(kuò)增，從該次檢測(cè)結(jié)果看，金色銀杏的多態(tài)性與普通銀杏存在一定區(qū)別。

（4）子代黃色葉穩(wěn)定性比較。綜合各定植基地觀察的結(jié)果，黃葉銀杏于3月下旬到4月初萌芽，4月中旬抽梢，1年只抽1次春梢。從萌芽開(kāi)始一直到5月底，其葉片和葉柄的顏色均為黃色，6月份以后，新發(fā)的嫩葉為嫩黃色，成熟的葉片逐漸轉(zhuǎn)為淡綠色，10月中旬后又變?yōu)辄S色，10月下旬至11月中旬落葉進(jìn)入休眠，符合黃葉銀杏（Ginkgobilobavar.aureaBeiss）[8]特征。各點(diǎn)物候變化時(shí)段見(jiàn)表6。經(jīng)過(guò)連續(xù)觀察4年與親本植株葉色變化一致，物候表現(xiàn)亦與對(duì)照的普通銀杏同步。嫁接繁殖的銀杏幼樹(shù)葉色與母樹(shù)葉色澤、物候表現(xiàn)一致，說(shuō)明采取無(wú)性繁殖的子代很好地保持了遺傳的穩(wěn)定性。

3結(jié)論

（1）品種性狀穩(wěn)定、特性優(yōu)良。幾年觀察的結(jié)果顯示，采用無(wú)性繁殖的黃葉銀杏小樹(shù)生長(zhǎng)旺盛，一年生枝梢生長(zhǎng)量約80cm，新梢棕灰色，多年生枝灰色，枝條皮較光滑，皮孔不明顯。南京林業(yè)大學(xué)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)葉（短枝第四片葉）為扇形，角度在105°左右，葉片大、肥厚，葉色黃色或淡黃色，葉裂深淺不規(guī)則。葉寬904cm，葉長(zhǎng)583cm，葉柄較短，只有451cm。綜合考慮葉片功能、大小、性狀在4月中旬時(shí)基本定型，金葉銀杏的最佳觀賞期在4～5月份的春末夏初，加之黃酮含量高，是觀賞價(jià)值較高及葉用原料兼用型優(yōu)良綠化栽培品種。

（2）通過(guò)省級(jí)品種審定。經(jīng)過(guò)11年系統(tǒng)觀察和試驗(yàn)栽培的結(jié)果表明，變異后的黃葉銀杏具有遺傳性狀穩(wěn)定、易嫁接繁殖、總黃酮含量較高等優(yōu)點(diǎn)，向主管部門(mén)申報(bào)后，2014年4月順利通過(guò)湖北省林木品種審定委員會(huì)審定，定名為安陸金葉銀杏Ginkgobiloba‘AnluJinye'。

（3）加大推廣利用力度。為了有效利用本地優(yōu)良銀杏品種資源，2017年10月，孝感市林業(yè)科技推廣中心爭(zhēng)取到中央財(cái)政林業(yè)科技推廣示范項(xiàng)目扶持資金100萬(wàn)元，在安陸市、大悟縣推廣種植該品種，該項(xiàng)目規(guī)劃到2019年?duì)I建示范推廣基地300畝，輻射周?chē)茝V1000畝。項(xiàng)目實(shí)施將嚴(yán)格按照造林項(xiàng)目設(shè)計(jì)，進(jìn)一步加快苗木繁育和定植，部署管理力量，落實(shí)技術(shù)方案，使安陸金葉銀杏的品種優(yōu)勢(shì)盡快轉(zhuǎn)化成資源優(yōu)勢(shì)，為林農(nóng)創(chuàng)收，給生態(tài)環(huán)境添彩。

參考文獻(xiàn)

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