田運佳，楊鳳巧，曹 旭，劉 濤，王群葆，李 斌

(邢臺市食品藥品檢驗所 化學(xué)室，邢臺 054000)

小兒氨酚烷胺顆粒是兒童常用感冒藥，處方主要由對乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺、人工牛黃、咖啡因、馬來酸氯苯那敏及輔料組成。其中人工牛黃由膽紅素、膽酸、豬去氧膽酸、膽固醇、無機(jī)鹽等配制而成[1]。膽紅素作為人工牛黃主要有效成分之一，是評價人工牛黃質(zhì)量的重要指標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定含膽紅素不得少于0. 63%[1]。全國現(xiàn)有15家生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)該藥，主要質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[2]未對藥品中人工牛黃的含量加以檢測。

本文參考文獻(xiàn)報道的膽紅素含量測定方法[3-5]，并經(jīng)方法學(xué)驗證后對來自流通領(lǐng)域的共11個生產(chǎn)企業(yè)的26批小兒氨酚烷胺顆粒的人工牛黃膽紅素含量進(jìn)行檢測，進(jìn)而評價該品種中人工牛黃膽紅素的質(zhì)量現(xiàn)狀。

1 儀器與試藥

儀器： Waters e2695高效液相色譜儀。

膽紅素對照品(來源：中國藥品生物制品檢定所，批號：100077-200805)，甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性

色譜柱為Waters C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為甲醇-三氯甲烷-0.1%磷酸(88:6:6)；柱溫為30℃；檢測波長為449 nm；流速為0.8mL/min；進(jìn)樣量：10μl。在上述條件下膽紅素能與樣品中其他成分達(dá)到基線分離，分離度大于1.5，結(jié)果見圖1。

A. 對照品溶液；B. 供試品溶液圖1 HPLC色譜圖

2.2 溶液的制備

(1)供試品溶液：取本品5袋內(nèi)容物，置100mL錐形瓶中，精密加三氯甲烷-甲醇-水-鹽酸(90:10:0.3:0.03)混合液25mL，稱定重量，振搖使充分溶出，補足重量，濾過待測。

(2)對照品溶液：稱取膽紅素對照品11.98mg，置100mL棕色量瓶中，加三氯甲烷適量，振搖溶解并稀釋至刻度，搖勻，再量取5mL，置100mL棕色量瓶中，用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻。

2.3 線性關(guān)系

稱取膽紅素對照品，按“2.2(2)項下方法”配制成每1mL含膽紅素0.6～24μg的溶液，依法測定。以峰面積(Y)與進(jìn)樣濃度(X)計算回歸方程，結(jié)果表明膽紅素在此范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=50776X-7032.1 R=0.9997 (n=6)。

2.4 穩(wěn)定性試驗

取“2.3”項下6μg/mL的對照溶液分別室溫下避光放置1～8h，依法測定。計算峰面積的RSD為0.8%(n=5)，表明膽紅素對照品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 精密度試驗

按“2.2(2)”項下方法配制每1ml約含膽紅素5μg的對照品溶液，依法測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，計算峰面積的RSD為0.3%(n=6)，結(jié)果見表3.。

2.6 重復(fù)性試驗

取某批藥品按“2.2(1)”項下的方法制備供試品溶液，獨立測定6份。結(jié)果膽紅素含量的RSD為1.8%，表明方法具有良好的重復(fù)性。

2.7 回收率試驗

稱取9份空白輔料，分別向輔料中加入三個不同濃度的膽紅素對照品溶液，每個濃度做3份，照“2.2(1)”項下的方法制備溶液，依法測定，結(jié)果見表1。

表1 回收率實驗(n=9)

2.8 樣品測定結(jié)果

小兒氨酚烷胺顆粒中人工牛黃為4mg/袋[2]，若參考其它有效成分含量限度下限90%，并且人工牛黃中膽紅素含量應(yīng)不低于0.63%[1]，即膽紅素理論標(biāo)示量應(yīng)不低于4×0.9×0.63%=0.0227mg/袋，參考膽紅素應(yīng)不得少于標(biāo)示量的90%要求[1]，即膽紅素理論值應(yīng)不小于0.020mg/袋。本文對11個廠家26批樣品進(jìn)行測定。統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，26批樣品中有3批次樣品中膽紅素含量略低于理論下限值，總數(shù)約12%的產(chǎn)品中膽紅素含量低于理論下限值。

3 討論

(1)膽紅素作為人工牛黃的主要有效成分[1]，含量過高或過低直接影響藥效甚至人體健康，膽紅素能清除超氧陰離子自由基，在防御氧化毒性方面起著重要作用，同時它也有一定的毒性，可對大腦和神經(jīng)系統(tǒng)引起不可逆的損害[6-7]，因此增加對小兒氨酚烷胺顆粒中人工牛黃膽紅素的考察很有意義。人工牛黃成分多[1]，難以全面測定其成分含量，本文通過方法學(xué)驗證，能準(zhǔn)確的檢測小兒氨酚烷胺顆粒中膽紅素的含量，進(jìn)而可以衡量藥品中人工牛黃的含量。

(2)在“2.8”中，3批次藥品膽紅素含量略低于理論下限值可能是以下幾點原因。

膽紅素是一個直鏈的四吡咯化合物，遇熱不穩(wěn)定易分解，在加工、運輸、儲藏等過程中，可受熱或光照等因素發(fā)生分解[6-7]；因標(biāo)準(zhǔn)中未要求對人工牛黃含量測定，可能會導(dǎo)致企業(yè)投料隨意性大，按下限投料導(dǎo)致含量偏低；因人工牛黃原料來源、生產(chǎn)工藝不同，所含的膽紅素也不盡相同，原料人工牛黃中膽紅素偏低，也會造成藥品企業(yè)成品藥膽紅素偏低。

綜上所述, 現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中沒有對小兒氨酚烷胺顆粒中人工牛黃的檢測，而實際復(fù)方制劑藥品中的人工牛黃確有低于理論最小值的情況存在，因此建議加入對人工牛黃中膽紅素的測定來更好的控制藥品的質(zhì)量。

[1] 中國藥典[S].2015年版.一部.5-6.

[2] 國家藥典委員會.化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)：第十二冊 WS-10001-(HD-1115)-2002[S].北京:國家藥典委員會，2002:54

[3] 黃海萍，譚桂山，人工牛黃中膽紅素研究進(jìn)展[J]. 中國藥事，2005，19(2)：114-116.

[4] 陳劍，劉頻健，王曉一，HPLC法測定復(fù)方制劑中人工牛黃的膽紅素含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009，37(21) ：9839 -9840.

[5] 曹流，孫冶，曹瀾，人工牛黃中膽紅素含量測定的影響因素[J]. 中國衛(wèi)生工程學(xué),2005，4(2)：91-92.

[6] 黃海萍,譚桂山，人工牛黃中膽紅素研究進(jìn)展[J].中國藥事,2005，19 (2):114-115.

[7] 范麗艷，徐酉華，新生兒膽紅素腦病的研究進(jìn)展[J]. 兒科藥學(xué)雜志,2016，22(9)：50-54.