練青平，張任馳，宓國強，姚子亮，劉士力，黃富有，陸 君，吳燕琴

(1.農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)健康養(yǎng)殖重點實驗室,浙江省淡水水產(chǎn)遺傳育種重點實驗室,

浙江省淡水水產(chǎn)研究所,浙江湖州 313001;2.浙江省麗水市水產(chǎn)技術(shù)推廣站,浙江麗水 323000)

馬口魚Opsariichthys bidens,俗稱馬口,隸屬鯉形目,鯉科, 鯸亞科,馬口魚屬[1],在我國除青藏高原、新疆和臺灣等地外,南自海南島、北至黑龍江的東部江河中均有分布,其中浙江省內(nèi)各水系中上游大小支流都有分布[2-3]。馬口魚不僅繁殖力強、生長速度快,而且其肉味鮮美,深受廣大消費者喜愛,但由于近年來捕撈強度過大和生態(tài)環(huán)境改變,甌江流域的馬口魚野生資源已十分稀缺。為了盡早恢復(fù)甌江馬口魚資源,發(fā)展馬口魚養(yǎng)殖業(yè),本課題組于2016年起在浙江麗水進行了馬口魚規(guī)?；斯し敝吃囼?實現(xiàn)了馬口魚苗種的規(guī)?；a(chǎn)。迄今為止,國內(nèi)學(xué)者已在馬口魚的生物學(xué)特性、養(yǎng)殖技術(shù)等方面進行了廣泛研究[4-15],但尚未見有關(guān)馬口魚規(guī)?；斯し敝臣夹g(shù)的報道。本研究旨在通過突破馬口魚的規(guī)?；斯し敝?為該魚的人工養(yǎng)殖和人工增殖放流提供優(yōu)良苗種,也為其它溪流性魚類規(guī)?；斯し敝臣夹g(shù)的突破提供借鑒。

1 材料和方法

1.1 親魚

馬口魚親魚培育在浙江省麗水市蓮都區(qū)某養(yǎng)殖場進行,前期在池塘養(yǎng)殖,試驗前一年冬季將親魚放入室內(nèi)水泥池(長×寬×高=6 m×3 m×1.2 m)強化培育。養(yǎng)殖水為地下水,水源水溫18～20℃,養(yǎng)殖池水溫15～25℃,水深1m,養(yǎng)殖密度控制在5 kg/m3以內(nèi),培育期間以投喂粗蛋白為45%左右的人工配合飼料為主,適當(dāng)投喂小蝦等動物性餌料。持續(xù)曝氣增氧,定期沖水。馬口魚1齡性成熟,試驗用親魚為1齡和2齡魚,1齡親魚雌雄個體規(guī)格分別為11.8～22.4 g和15.1～45.5 g,2齡親魚雌雄個體規(guī)格分別為22～65 g和35～75.2 g。試驗時直接從養(yǎng)殖水泥池中挑選親魚。挑選親魚要求魚體無傷、無殘、活力強健。雌性個體腹部膨大柔軟,有明顯的卵巢輪廓,生殖孔發(fā)紅。雄魚輕壓腹部能有乳白色精液流出,且乳白色精液能在水中快速分散。挑選適合雌、雄親魚比按4：1挑選。

1.2 人工繁殖與孵化

當(dāng)水溫穩(wěn)定在16℃以上時,可進行馬口魚人工繁殖。催產(chǎn)劑選用寧波第一激素制品廠生產(chǎn)的地歐酮(DOM)、促黃體素釋放激素類似物(LHRH-A2)和絨毛膜促性腺激素(HCG)。每千克雌魚劑量為2.5 mg DOM+5 μg LHRH-A2+1 000 IU HCG,雄魚減半。采用1次性腹鰭基部注射,注射后將雌雄魚親本放在6 m×3 m的長方形水泥池中,水深0.8 m,用流水剌激。

采用常規(guī)人工干法授精獲得馬口魚受精卵,受精卵在水泥池中靜水孵化。催產(chǎn)率計算公式如下：

1.3 受精率、孵化率的計算及胚胎發(fā)育觀察觀察方法

受精率、孵化率計算參照練青平等[16]計算要求進行計算。計算公式如下：

利用尼康SMZ745T體視顯微鏡對馬口魚胚胎發(fā)育過程進行觀察并攝像。取30粒卵以上用于觀察和記錄胚胎發(fā)育的每個發(fā)育階段的特征和發(fā)育時序。后期用Photoshop軟件對圖片進行后期處理。

1.4 魚苗“開口”和培育

魚苗出膜3 d左右,能平游、腰點(鰾)出齊后,即開始“開口”?！伴_口”在水泥池中進行,前2 d投喂熟蛋黃,第3 d開始投喂粗蛋白48%的粉狀飼料,連喂4 d?！伴_口”一周后,下塘進行夏花魚種培育,池塘要求和培育方法可參照“四大家魚”夏花魚種培育。

2 結(jié)果

2.1 馬口魚規(guī)?；敝承Ч?/h3>

2016-2017年,我們用水泥池養(yǎng)殖的1齡和2齡馬口魚進行了人工繁殖試驗,共產(chǎn)卵44萬粒,獲得初孵仔魚29萬尾,催產(chǎn)率、受精率和孵化率平均為83.13%,80.23%和80.95%(表1、表2)。

表1 馬口魚人工繁殖催產(chǎn)情況Tab.1 Artificially induced spawning of O.bidens

表2 馬口魚人工繁殖過程中的催產(chǎn)率、受精率和孵化率Tab.2 Induced spawning rate,fertilization rate,hatching rate under artificial propagation condition of O.bidens

2.2 受精卵胚胎發(fā)育和初孵仔魚特點

馬口魚的卵為圓形,呈桔黃色或淺黃色,遇水后無粘性,為沉性卵,卵徑(2.06±0.05)mm。馬口魚胚胎發(fā)育過程可以分為卵裂-原腸、器官形成和出苗期。卵裂-原腸期的孵化積溫需要205.88 h·℃,這一時期卵的原生質(zhì)向動物極聚集,形成胚盤,隨后胚盤開始分裂,并逐漸形成多細(xì)胞體和囊胚,然后胚層繼續(xù)向下包裹,形成胚環(huán)、胚盾等。在孵化水溫(23±1)℃條件下,受精后17 h,進入器官形成期,器官形成期的孵化積溫需要564.75 h·℃,這一時期有肌節(jié)、腦、眼器官、耳囊、尾芽等器官形成,胚體先間隙性擺動,然后扭動頻率逐漸增高,心臟出現(xiàn),到達(dá)后期,胚體準(zhǔn)備出膜。受精后52.17 h,進入出膜期,孵化積溫需要429.28 h·℃,此時仔魚出膜,這一時期為仔魚開始出膜的時期(表3)。

初孵仔魚全身透明且無黑色素;卵黃囊整體呈棒狀,前部分大,后部分小,大小占整個魚體的3/4;全長為6.0～6.8 mm,肌節(jié)為38～43對。耳囊中可見左右各有耳石1個,未見黑色眼色素,眼囊中晶體明顯(圖1)。初孵仔魚活動能力較弱,需側(cè)臥在水底或者貼壁休息。

圖1 馬口魚初孵仔魚Fig.1 Newly hatched larvae of O.bidens

2.3 夏花魚苗培育結(jié)果

2017年4月25日在1.5畝池塘中開始培育的20萬尾馬口魚魚苗,至2017年5月26日,平均體長(4.4±0.7)cm,共捕獲夏花魚種13.2萬尾,培育成活率為66.0%。

表3 馬口魚胚胎發(fā)育（2017）Tab.3 Embryo development of O.bidens（2017）

3 討論

3.1 馬口魚性成熟時間

本研究認(rèn)為,浙江地區(qū)進行馬口魚人工繁殖的適宜時間為4月中旬至7月底,2齡魚的性成熟時間較1齡魚早,2齡魚在5月前催產(chǎn)較為適宜,而1齡魚最好在6月后進行。陳乘等[13]認(rèn)為馬口魚繁殖期為每年的6-8月。姜景田[8]在2008年6月17日-6月18日對丹東市寬甸縣水豐水庫養(yǎng)殖的馬口魚進行了人工繁殖實驗,共計獲得14.9萬尾魚苗。謝建洋[10]對湖南省安化縣東坪鎮(zhèn)紅巖水庫的馬口魚人工繁殖時間也是在6月9日-6月25日。本研究能在4月份進行馬口魚人工繁殖并獲成功,可能與親魚在水泥池中培育,冬季水溫保持在15℃以上有關(guān),因養(yǎng)殖水溫提高,使其性腺提早發(fā)育成熟。亦表明,馬口魚與其它魚類一樣,性成熟時間與培育期的積溫有關(guān)。

浙江地區(qū)的馬口魚人工繁殖時間如果排除強化培育的因素,與全國各地區(qū)馬口魚人工繁殖時間相近都為6-8月,這個時間繁殖的魚類都屬于比較晚繁殖的魚類,基本與光唇魚Acrossocheilus fasciatus[17]和翹嘴紅鲌Erythroculter ilishaeformis[18-19]相近,但是比同是溪流性魚類的唇 Hemibarbus labeo[20]稍晚。

3.2 馬口魚胚胎發(fā)育的特點

本研究認(rèn)為在孵化水溫(23±1)℃條件下,馬口魚胚胎發(fā)育需要52.17 h,孵化積溫需要1 199.91 h·℃,馬口魚胚胎發(fā)育可以分為卵裂-原腸、器官形成和出苗期。陳乘等[13]研究認(rèn)為湖南安化地區(qū)馬口魚胚胎在水溫20～23.5℃條件下,從受精卵發(fā)育開始至胚胎孵化出膜為止,需要39 h 45 min。姜景田[7]在孵化水溫23～25℃條件下,需要經(jīng)過80 h的孵化才能出膜。通過以上比較可以發(fā)現(xiàn),丹東市寬甸縣水豐水庫養(yǎng)殖的馬口魚孵化需要消耗的時間較長,比浙江地區(qū)要長27.83 h,比湖南地區(qū)的馬口魚要長40.25 h,這有可能是不同地理種群所產(chǎn)生的變化。本研究基本和徐偉等[21-22]研究的烏蘇里江唇 和哲羅魚Hucho taimen的胚胎發(fā)育發(fā)育過程相近,都可以分為卵裂-原腸、器官形成和出苗期,只是具體各個階段的孵化積溫有所不同。

3.3 不同年齡馬口魚親魚的差異

本研究雖然催產(chǎn)1齡和2齡馬口魚都獲得成功,但我們認(rèn)為不同年齡的馬口魚的繁殖特性有所差異,一是繁殖時間和水溫要求不同,2齡親魚在4月、水溫在16℃以上時即可進行催產(chǎn),而1齡親魚應(yīng)在6月下旬才能催產(chǎn);二是1齡親魚的催產(chǎn)率和受精率不如2齡;三是1齡親魚個體小,絕對懷卵量明顯少于2齡魚。所以,我們認(rèn)為在生產(chǎn)中應(yīng)用2齡馬口魚作為親魚,這樣可取得較好的效果。另外,有文獻(xiàn)報道[3],南方馬口魚性成熟年齡為2齡,本試驗中取得繁殖成功的1齡親魚的冬天培育是在溫室中進行的,如在室外池塘培育,1齡親魚能否性成熟,有待進一步研究。

3.4 馬口魚苗種的“開口”方式

本研究中考慮到剛出膜的仔魚個體較“四大家魚”小,沒有采用將魚苗直接下塘培育的傳統(tǒng)方式,而是先在水泥池“開口”,即在水泥池中用熟蛋黃和粉狀飼料培育一周,待魚苗長到1 cm左右后再下塘,按傳統(tǒng)技術(shù)培育夏花魚種。我們認(rèn)為,先在水泥池小水體中投喂飼料有利于魚苗“開口”,能使魚苗的體質(zhì)得到加強,提高游動、攝食能力,時間過長又會引起水質(zhì)變壞,影響成活率,所以,控制在一周時間是合理的。分段培育馬口魚夏花魚種應(yīng)是魚種培育的一個創(chuàng)新,但該培育方式對提高苗種培育成活率的作用有待進一步探索。

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