侯振平，吳端欽，蔣桂韜,2，王滿(mǎn)生，王郝為，劉延杰，陳寧波，戴求仲,2*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類(lèi)研究所南方飼料作物種子資源與利用研究室，湖南 長(zhǎng)沙 410205；2.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼養(yǎng)技術(shù)研究室，湖南 長(zhǎng)沙410131 ；3.山東濟(jì)南諾能生物工程有限公司，山東 濟(jì)南 250003)

近年來(lái)，畜牧行業(yè)飼料資源缺乏、成本上漲、食品安全問(wèn)題頻發(fā)，環(huán)境污染日益嚴(yán)重，酶制劑作為一種綠色、安全、無(wú)污染的添加劑體現(xiàn)出來(lái)的價(jià)值與作用越來(lái)越明顯。目前，蛋白酶在飼料中廣泛添加，對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能、養(yǎng)分消化率及腸道健康有著積極作用[1-2]。李宗銳[3]研究表明，在不同蛋白質(zhì)飼糧中添加外源蛋白酶可以提高肉雞內(nèi)源胰蛋白酶的活性，改善腸道形態(tài)，提高蛋白質(zhì)的表現(xiàn)消化率。然而，蛋白酶作用效果差異比較大，主要與酶制劑本身的來(lái)源、劑型、酶活、飼糧類(lèi)型以及動(dòng)物種屬、年齡等因素有關(guān)。PT125TM蛋白酶是加拿大某公司生產(chǎn)的復(fù)合蛋白酶制劑，BFB是山東濟(jì)南某公司生產(chǎn)的復(fù)合酶制劑。本試驗(yàn)選用21 d愛(ài)拔益加(AA)肉雞為對(duì)象，通過(guò)在飼糧中添加PT125TM和BFB，研究其對(duì)AA肉雞42 d屠宰性能、器官指數(shù)、腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和養(yǎng)分消化率的影響，比較不同蛋白酶的應(yīng)用效果，為蛋白酶在AA肉雞飼料中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 酶制劑來(lái)源、組成及添加量

PT125TM是一種復(fù)合蛋白酶添加劑，主要含蛋白酶，購(gòu)自于加拿大某公司代理商，添加量為125 g/t。BFB是國(guó)產(chǎn)復(fù)合酶成分為蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、纖維素酶、木聚糖酶等，主要含角蛋白酶，由山東濟(jì)南某公司提供，酶活性為50 000 U/g，添加量為100 g/t。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選擇21 日齡健康、體重相近的愛(ài)拔益加(AA)公母混合雛360只，購(gòu)自湖南某實(shí)業(yè)有限公司。將試驗(yàn)雞隨機(jī)分為對(duì)照組、PT125TM組和BFB組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只，公母各半，各組之間雞的初始體重?zé)o明顯差異(P>0.05)，整個(gè)試驗(yàn)期為21 d。

1.3 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)飼糧參照NRC(1994)、中國(guó)雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(NY/T 33-2004) 及《中國(guó)飼料成分及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值表》(2014)，結(jié)合《AA 肉仔雞飼養(yǎng)管理手冊(cè)》配制玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧(見(jiàn)表1)，蒸汽制粒，制粒溫度為80 ℃。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis)

注：①預(yù)混料可為每千克全價(jià)日糧提供：VA12 000 IU；VD32 500 IU；VE 20 mg；VK33 mg；VB13 mg；VB28 mg；VB67 mg；VB120.03 mg；D-泛酸 20 mg；煙酸 50 mg；生物素 0.1 mg；葉酸 1.5 mg；Cu 9 mg，Zn 110 mg，F(xiàn)e 100 mg，Mn 100 mg，Se 0.16 mg；I 0.6 mg。②營(yíng)養(yǎng)水平為計(jì)算值。

Note:①The premix provides following per kg diet: VA12 000 IU；VD32 500 IU；VE 20 mg；VK33 mg；VB13 mg；VB28 mg；VB67 mg；VB120.03 mg；D-Pantothenic acid 20 mg；niacin 50 mg；biotin 0.1 mg；folic acid 1.5 mg；Cu 9 mg，Zn 110 mg，F(xiàn)e 100 mg，Mn 100 mg，Se 0.16 mg；I 0.6 mg.②Nutrient levels were calculated values.

1.4 飼養(yǎng)管理

各組AA肉雞的飼養(yǎng)條件完全相同。試驗(yàn)雞采取地面平養(yǎng)，按照正常免疫程序進(jìn)行免疫，舍內(nèi)溫度保持在22～24 ℃。采用連續(xù)光照、自然通風(fēng)、自由采食和自由飲水的管理方式。定期清理打掃雞舍衛(wèi)生并消毒，每天沖洗飲水器。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 屠宰性能及器官指數(shù) 于飼養(yǎng)試驗(yàn)第21天早晨(提前空腹12 h)，從每個(gè)處理隨機(jī)選取6只(每重復(fù)1只)接近該處理平均體重的肉雞，稱(chēng)活重后頸靜脈放血致死，按照曹贊等[4]的方法進(jìn)行屠宰測(cè)定，在活重的基礎(chǔ)上計(jì)算屠宰率、半凈膛率、全凈膛率、腹脂率、胸肌率、腿肌率六項(xiàng)屠宰性能指標(biāo)及胰腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、心臟指數(shù)和肌胃指數(shù)。

1.5.2 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu) 在步驟 1.5.1剔出腸道后，立即分離十二指腸、空腸、回腸，剪取肉雞十二指腸、空腸和回腸中段2 cm左右，用玻璃棒輕輕挑去其中內(nèi)容物，并用生理鹽水輕輕沖洗干凈，再用濾紙吸干殘余水分之后，置于10%甲醛磷酸緩沖液中固定，4 ℃保存，常規(guī)石蠟切片制作[5]。接電鏡觀測(cè)小腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度并計(jì)算絨毛長(zhǎng)度/隱窩深度值。

1.5.3 飼料養(yǎng)分消化率 42日齡時(shí)隨機(jī)從每個(gè)重復(fù)中選取公、母各一只，頸靜脈放血致死，取回腸內(nèi)容物，冷凍干燥，研磨，4 ℃保存。參照張麗英[6]的方法測(cè)定飼料及糞便中DM、CP、CF、EE、GE及AA含量。DM用烘箱法65 ℃測(cè)定；CP采用凱氏定氮法測(cè)定；CF用酸堿洗滌法(參照國(guó)標(biāo)GB/T 6434-2006/ISO 6865：2000)；EE采用乙醚浸提法測(cè)定采用乙醚浸提法測(cè)定；總能(GE)采用全自動(dòng)氧彈測(cè)熱儀測(cè)定；氨基酸采用高效液相色譜法(HPLC)使用Pico-Tag氨基酸分析儀(美國(guó)，Waters公司)測(cè)定。測(cè)定飼料及糞便中的酸不溶灰分作為指示劑。養(yǎng)分表觀消化率計(jì)算公式如下：

養(yǎng)分表觀消化率/%=100-

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并對(duì)差異顯著者作Duncan 氏法多重比較，P<0.05為顯著水平。結(jié)果采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同蛋白酶對(duì)肉雞屠宰性能及器官指數(shù)的影響

由表2可知，飼糧中添加不同蛋白酶對(duì)肉雞42 d屠宰性能指標(biāo)無(wú)顯著影響(P>0.05)。表3結(jié)果表明，飼糧中添加酶后，肉雞胰腺指數(shù)BFB組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，肌胃指數(shù)BFB組分別顯著性高于對(duì)照組和PT125TM組(P<0.05)，對(duì)其他器官指數(shù)無(wú)顯著性影響(P>0.05)。

2.2 不同蛋白酶對(duì)肉雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表4可知，飼糧添加不同蛋白酶對(duì)肉雞42 d十二指腸和空腸的形態(tài)結(jié)構(gòu)無(wú)顯著影響(P>0.05)；回腸隱窩深度BFB組分別顯著性低于對(duì)照組和PT125TM組(P<0.05)。各組組織切片見(jiàn)圖1。

表2 不同蛋白酶對(duì)肉雞屠宰性能的影響Table 2 Effect of different protease on the slaughter performance of broilers %

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

Note: In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference(P<0.05).The same below.

表3 不同蛋白酶對(duì)肉雞器官指數(shù)的影響Table 3 Effect of different protease on the organ index of broilers g/kg

表4 不同蛋白酶對(duì)肉雞腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響Table 4 Effect of different protease on the intestinal villi structure of broilers μm

2.3 不同蛋白酶對(duì)肉雞養(yǎng)分消化率的影響

由表5可知，不同蛋白酶對(duì)42 d肉雞養(yǎng)分消化率影響差異不顯著(P>0.05)，除粗纖維消化率外，添加蛋白酶組養(yǎng)分消化率略?xún)?yōu)于對(duì)照組，BFB組養(yǎng)分消化率優(yōu)于PT125TM組，但差異不顯著(P>0.05)。

由表6可知，飼糧添加不同蛋白酶對(duì)42 d肉雞部分氨基酸的消化率有顯著性影響(P<0.05)，Ile消化率BFB組顯著性高于PT125TM組(P<0.05)，Gly消化率BFB組分別顯著性高于對(duì)照組和PT125TM組(P<0.05)，TAA消化率BFB組顯著性高于對(duì)照組(P<0.05)。

圖1 肉雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)(,×100)Fig.1 Intestinal morphology of broilers in control

項(xiàng)目Items對(duì)照組ControlgroupPT125TM組PT125TMgroupBFB組BFBgroup干物質(zhì)代謝率DMmetabolizability/%82．37±8．2287．78±6．3487．66±5．87粗蛋白代謝率CPmetabolizability/%75．10±1．2078．09±2．1479．89±2．65粗脂肪代謝率EEmetabolizability/%78．88±4．3882．95±5．7883．78±4．73粗纖維代謝率CFmetabolizability/%55．60±6．0155．02±10．2656．98±11．59總能代謝率GEmetabolizability/%79．98±0．8580．23±0．6580．25±0．98表觀代謝能AME/(MJ/kg)13．30±0．1913．40±0．3513．34±0．20

表6 不同蛋白酶對(duì)肉雞氨基酸表觀消化率的影響Table 6 Effect of different protease on the amino acid digestibility of broilers %

3 討 論

3.1 不同蛋白酶對(duì)肉雞屠宰性能及器官指數(shù)的影響

李宗銳[3]研究表明，添加蛋白酶對(duì)肉雞屠宰性能及免疫器官指數(shù)無(wú)顯著影響。潘珂等[7]研究發(fā)現(xiàn)，添加蛋白酶能顯著提高42 d肉雞腺胃的相對(duì)質(zhì)量。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加不同來(lái)源蛋白酶對(duì)42 d肉雞屠宰性能無(wú)顯著影響(P>0.05)，肉雞胰腺指數(shù)BFB組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，肌胃指數(shù)BFB組顯著高于對(duì)照組和PT125TM組(P<0.05)，對(duì)其他器官指數(shù)無(wú)顯著影響(P>0.05)，與前人研究結(jié)果基本一致。

3.2 不同蛋白酶對(duì)肉雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

小腸腸絨毛越高，與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)相對(duì)接觸面積越大，越利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收[8]。腸隱窩變淺則表明腸上皮細(xì)胞增值率和成熟率上升，分泌功能增強(qiáng)，腸道黏膜上皮絨毛吸收能力增強(qiáng)[8-9]。V/C 值可綜合反映小腸的功能狀況，V/C 值下降，表示消化吸收功能降低；V/C值上升，則表示黏膜得到改善，消化吸收功能增強(qiáng)，生長(zhǎng)發(fā)育加快。蛋白酶能夠增加腸道食糜黏度，從而增加消化器官的相對(duì)重量。李慧[10]研究表明，在肉雞日糧中適量添加蛋白酶會(huì)促進(jìn)內(nèi)源酶分泌，利于消化器官發(fā)育；過(guò)量會(huì)抑制內(nèi)源酶分泌，損害消化器官發(fā)育。周梁[1]發(fā)現(xiàn)，添加200 mg /kg蛋白酶顯著降低肉仔雞22～42 d 空腸和回腸的隱窩深度。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加不同蛋白酶對(duì)42 d肉雞十二指腸和空腸的形態(tài)結(jié)構(gòu)無(wú)顯著影響(P>0.05)，回腸隱窩深度BFB組顯著低于對(duì)照組和PT125TM組(P<0.05)，這與周梁[1]的研究結(jié)果稍有不同，可能是試驗(yàn)用的酶、試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼料原料不同所致。

3.3 不同蛋白酶對(duì)肉雞養(yǎng)分消化率的影響

研究表明，添加蛋白酶可以提高肉仔雞干物質(zhì)[11]、粗蛋白[12]、能量[13]、氮[14]、淀粉[14]和脂肪酸[15]的表觀消化率和真代謝能的利用率[13]。李宗銳[3]發(fā)現(xiàn)，添加300 mg/kg蛋白酶比不加酶組顯著提高了蛋白質(zhì)的表觀利用率(P<0.05)，添加150 mg/kg蛋白酶肉雞Arg表觀利用率顯著提高(P<0.05)。周梁等[16]研究表明，飼糧中添加200 mg/kg蛋白酶，肉雞生長(zhǎng)前期粗蛋白和氨基酸表觀消化率顯著提高(P<0.05)，并發(fā)現(xiàn)肉仔雞生長(zhǎng)前期生產(chǎn)性能、粗蛋白和氨基酸表觀消化率與蛋白酶量呈二次曲線關(guān)系。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，添加不同蛋白酶對(duì)42 d肉雞DM、CP、EE、CF、GE和AME表觀消化率無(wú)顯著影響(P>0.05)，BFB組顯著提高了肉雞Ile、Gly和TAA的表觀消化率(P<0.05)；PT125TM組提高了部分氨基酸的表觀消化率，但與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。本研究結(jié)果與李宗銳[3]、周梁等[16]不一致，可能是試驗(yàn)過(guò)程中采用的酶和飼料原料不同造成的。

4 結(jié) 論

飼糧添加不同蛋白酶對(duì)42 d肉雞屠宰性能無(wú)顯著影響，添加BFB顯著提高了肉雞胰腺和肌胃指數(shù)，降低了回腸隱窩深度，提升了Ile、Gly和TAA的表觀消化率。

[1] 周梁.外源蛋白酶(ProAct)對(duì)肉雞生產(chǎn)性能及氨基酸消化率影響的研究[D]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2014.

[2] KACZMARED S A, ROGIEWICZ A, MOGIELNICKA M, et al．蛋白酶、淀粉酶和非淀粉多糖降解酶的添加對(duì)以玉米豆粕為基礎(chǔ)日糧的肉雞養(yǎng)分利用率和生長(zhǎng)性能的影響[J]．國(guó)外畜牧學(xué)-豬與禽，2015，35(10)：39-44．

[3] 李宗銳．不同蛋白質(zhì)水平飼糧添加蛋白酶對(duì)肉雞生產(chǎn)性能和消化生理的影響[D]．四川雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2015．

[4] 曹贊，高振華，陳廣信，等．代謝能和粗蛋白質(zhì)水平對(duì)科寶肉雞生產(chǎn)性能、屠宰性能及血清生化指標(biāo)的影響[J]．動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2014，26(9)：2 553-2 564．

[5] 王亞鳴．動(dòng)物組織學(xué)技術(shù)[M]．南昌：江西科學(xué)技術(shù)出版社，1994：17．

[6] 張麗英．飼料分析及飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)[M]．3版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科技出版社，2007．

[7] 潘珂，游金明，黎觀紅，等．復(fù)合蛋白酶和甘露寡糖對(duì)肉雞消化道的影響及其互作效應(yīng)研究[J]．江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34(3)：567-571．

[8] 李德雪，欒維民，岳占碰．動(dòng)物組織學(xué)與胚胎學(xué)[M]．長(zhǎng)春：吉林人民出版社，2003：135．

[9] 馬玉龍，許梓榮．金霉素對(duì)肉雞生長(zhǎng)、腸道菌群和細(xì)菌酶、腸組織形態(tài)的影響[J]．浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版)，2005，31(4)：507-512．

[10] 李慧．蛋白酶和木聚糖酶對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能,消化機(jī)能及血液指標(biāo)的影響[D]．陜西楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2010．

[11] 王琤韋華，瞿明仁，蔣顯仁，等．Poultrygrow250TM對(duì)寧都三黃雞消化酶活性、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率、抗熱應(yīng)激、免疫機(jī)能及生產(chǎn)性能的影響研究[J]．江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，30(4)：302-310．

[12] ANGEL C R, SAYLOR W, VIEIRA S L, et al. Effects of a monocomponent protease on performance and protein utilization in 7- to 22-day-old broiler chickens[J]. Poultry Science, 2011, 90(10): 2 281-2 286.

[13] GHAZI S, ROOKE J A, GALBRAITH H. Improvement of the nutritive value of soybean meal by protease and alpha-galactosidase treatment in broiler cockerels and broiler chicks[J]. British Poultry Science, 2003, 44(3): 410-418.

[14] SELLE P H, LIU S-y, CAI J, et al. Steam-pelleting temperatures and grain variety of finely ground,sorghum-based broiler diets.I.Influence on growth performance,relative gizzard weights,nutrient utilisation,starch and Nitrogen digestibility[J]. Animal Production Science, 2013, 53(3): 339-346.

[15] AURELIR, KLUENTER A M, FRU F, et al. Efficacy of protease supplementation on apparent ileal digestibility of nitrogen and amino acid of broiler chicken fed a diet based on 40% triticale[C]/ /Actes des 9èmes journées de la recherche avicole. Paris: Institut Technique de l'Aviculture, 2011: 384-387.

[16] 周梁，張海軍，王晶，等．蛋白酶對(duì)8-21日齡肉仔雞生長(zhǎng)性能,氨基酸表觀消化率及腸道組織形態(tài)的影響[J]．動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2014，26(5)：1 362-1 369．