黃杰，曾成林，陳博智

（廣東省化州市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 茂名525100）

肺結(jié)核是臨床具有高傳染性、高發(fā)病率的肺疾病，主要通過(guò)呼吸道傳播，致病菌為結(jié)核分枝桿菌，體征、癥狀表現(xiàn)以咳嗽、咳血、消瘦等為主。有統(tǒng)計(jì)顯示我國(guó)肺結(jié)核發(fā)病率位居世界第二位，男性發(fā)病率略高于女性［1］。肺結(jié)核發(fā)病隱匿、病程長(zhǎng)，且無(wú)特效藥物可治療，若診治不及時(shí)不僅對(duì)患者身心健康造成影響，嚴(yán)重者還可危及生命，故早期有效診斷疾病對(duì)臨床治療有重要意義［2］。目前臨床較為常見(jiàn)的檢驗(yàn)方法包括抗原膠體金法、皮膚結(jié)核菌素純蛋白衍生物 （PPD）檢驗(yàn)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （PCR）檢驗(yàn)以及痰涂片結(jié)核菌檢測(cè)法等。本研究對(duì)我院收治的54例肺結(jié)核早期患者以及57例健康體檢者進(jìn)行PPD、PCR檢驗(yàn)，觀察兩種方法對(duì)肺結(jié)核的診斷效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以我院2015年6月至2017年3月期間收治的54例肺結(jié)核早期患者為觀察組，患者因出現(xiàn)不同程度咳嗽、倦怠、咳血癥狀入院檢查，經(jīng)胸部CT、胸膜活檢確診為肺結(jié)核；其中男性34例，女性20例；年齡32～68歲，平均年齡（48.0 ± 3.5） 歲； 病程 2 ～ 10 個(gè)月， 平均病程 （6.4 ± 1.8） 個(gè)月。同時(shí)隨機(jī)選取57例同期入院進(jìn)行健康體檢、所有指標(biāo)均正常者為對(duì)照組，其中男性35例，女性22例；年齡30～67歲，平均年齡 （48.3±3.6）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，所有對(duì)象均自愿參與并簽署知情同意書(shū)。兩組對(duì)象的一般資料 （年齡、性別）比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。

1.2 檢驗(yàn)方法 ①PCR檢驗(yàn)：取受檢者晨起深咳后痰液0.5 mL加入1 mol／L的氫氧化鈉溶液5 μL，混合后在37℃的環(huán)境下放置40分鐘，后使用離心機(jī)以10 000 r／min速度對(duì)混合液進(jìn)行離心處理，離心時(shí)間5分鐘，吸除上清液并以生理鹽水對(duì)剩下液體進(jìn)行洗脫至中性。同時(shí)取患者胸水、血清各1 mL進(jìn)行離心沉淀處理，再加入50 μL裂解液行沸水浴，水浴時(shí)間控制在10分鐘左右，水浴后行離心處理，以10 000 r／min速度離心5分鐘，將15 μL反應(yīng)液加入0.2 μL Taq酶中混合均勻，再加入石蠟油 20 μL封頂，最后加入 5 μL上清液形成 TB－DNA模板。行離心處理，參數(shù)為10 000 r／min速度、離心時(shí)間5分鐘，后在不同溫度90℃、55℃、72℃下擴(kuò)增30 s、30 s、60 s，循環(huán)35次后取PCR擴(kuò)增液20 mL進(jìn)行電泳。②PPD檢驗(yàn)：將PPD（北京華怡生物技術(shù)公司）以生理鹽水稀釋成不同濃度，取0.1 mL注射于患者左前臂掌側(cè)前1／3處，48～96 h觀察患者皮膚局部反應(yīng)。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察PPD、PCR檢驗(yàn)用于肺結(jié)核診斷的陽(yáng)性率，比較兩種檢驗(yàn)方法的診斷價(jià)值。其中PCR陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)［3］：紫外線下有160 bp橙黃色熒光帶。PPD陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：患者注射部位出現(xiàn)紅腫、硬節(jié)且硬節(jié)直徑0.5 cm以上、1.5 cm以下為陽(yáng)性，患者局部反應(yīng)強(qiáng)烈、硬節(jié)直徑1.5 cm以上為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)；以ROC分析兩種檢驗(yàn)方法的診斷價(jià)值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組的PCR、PPD檢驗(yàn)結(jié)果比較 PCR檢驗(yàn)中，觀察組陰性率為31.5%，對(duì)照組陰性率為94.7%；PPD檢驗(yàn)中，觀察組陰性率為59.3%，對(duì)照組陰性率為78.9%。見(jiàn)表1。

表1 兩組的PCR、PPD檢驗(yàn)結(jié)果比較 ［n（%）］

2.2 觀察組兩種檢驗(yàn)方法的陽(yáng)性率比較 PCR檢驗(yàn)的陽(yáng)性率為68.5%， 顯著高于 PPD 的檢驗(yàn)陽(yáng)性率 40.7% （P ＜0.05）， 見(jiàn)表 2。

表2 觀察組兩種檢驗(yàn)方法的陽(yáng)性率比較 （n＝54）

2.3 兩種檢驗(yàn)方法診斷肺結(jié)核早期的價(jià)值分析 經(jīng)ROC分析，PCR、PPD均對(duì)肺結(jié)核早期患者具有一定的診斷價(jià)值 （P<0.05），且PCR的診斷價(jià)值顯著高于PPD，見(jiàn)表3。

表3 兩種檢驗(yàn)方法診斷肺結(jié)核早期的價(jià)值分析

3 討論

近年來(lái)臨床肺結(jié)核發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，此病不僅對(duì)患者肺臟有影響，同時(shí)其還可侵害人體其他多個(gè)器官，對(duì)患者的生命安全造成威脅，目前已成為我國(guó)公共衛(wèi)生防治的主要疾病之一［4］。但由于疾病發(fā)病隱匿，肺結(jié)核早期癥狀不典型且表現(xiàn)多樣，造成臨床診斷難度加大，易出現(xiàn)誤診、漏診，故臨床一直在尋求一種檢驗(yàn)手段能有效診斷早期肺結(jié)核，從而確保患者能得到及時(shí)有效的治療。

目前臨床肺結(jié)核檢驗(yàn)手段較多，常見(jiàn)方法有抗原膠體金法、PPD檢驗(yàn)、PCR檢驗(yàn)以及痰涂片結(jié)核菌檢測(cè)法等，臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)痰涂片檢驗(yàn)用于肺結(jié)核診斷的準(zhǔn)確性高，但在早期肺結(jié)核中檢出率較低，而抗原膠體金法受患者血液中免疫抑制因子、結(jié)核抗體等影響，檢驗(yàn)時(shí)易出現(xiàn)誤診、漏診情況［5］。PPD是臨床篩選結(jié)核感染的重要指標(biāo)，操作簡(jiǎn)便，本研究結(jié)果顯示，PPD用于診斷時(shí)，觀察組陽(yáng)性率為40.7%，對(duì)照組陽(yáng)性率為21.1%，表明PPD檢驗(yàn)?zāi)苡行袛嗷颊呤欠裼蟹谓Y(jié)核感染，用于肺結(jié)核早期診斷具有一定臨床意義。PPD檢驗(yàn)機(jī)理為人體在感染結(jié)核桿菌后會(huì)促使機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生相應(yīng)致敏淋巴細(xì)胞，該細(xì)胞對(duì)結(jié)核桿菌有識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到少量結(jié)核菌素時(shí)，此細(xì)胞會(huì)刺激機(jī)體釋放淋巴因子，使血管通透性增加，局部出現(xiàn)皮膚反應(yīng)［6］。但觀察組的檢驗(yàn)結(jié)果顯示，PCR檢驗(yàn)的陽(yáng)性率為68.5%， 顯著高于 PPD 檢驗(yàn)的 40.7% （P ＜0.05）， 表明 PCR 檢驗(yàn)方法用于早期肺結(jié)核診斷的準(zhǔn)確性高于PPD檢驗(yàn)，造成PPD出現(xiàn)假陰性與部分患者雖然已感染但尚未產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)或檢驗(yàn)使用的PPD液純度不夠等有關(guān)。

PCR檢驗(yàn)是對(duì)患者結(jié)核菌基因片段進(jìn)行檢測(cè)，不僅靈敏度高、特異性高，且準(zhǔn)確度高，將其用于早期肺結(jié)核診斷，能有效避免體內(nèi)因子、未產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)、抗體等影響，從而有效提高診斷陽(yáng)性率［7］。本研究結(jié)果顯示，PCR檢驗(yàn)中，觀察組陽(yáng)性率為68.5%，對(duì)照組陽(yáng)性率為5.3%，表明PCR檢驗(yàn)?zāi)苡行袛嗷颊呤欠裼薪Y(jié)核桿菌感染，有效診斷早期肺結(jié)核患者。PCR檢驗(yàn)通過(guò)將結(jié)核菌特異性熒光探針與結(jié)核菌特異性引物經(jīng)過(guò)PCR反應(yīng)液、Taq酶等成分處理后，以體外擴(kuò)增法檢測(cè)結(jié)核菌DNA，根據(jù)DNA結(jié)果來(lái)判斷患者是否被感染。ROC分析結(jié)果顯示，PCR、PPD檢驗(yàn)均對(duì)肺結(jié)核早期患者具有一定的診斷價(jià)值，且PCR的診斷價(jià)值顯著高于PPD。PCR擴(kuò)增時(shí)在密閉環(huán)境下進(jìn)行，能有效避免擴(kuò)增物被污染，從而提高疾病診斷準(zhǔn)確度，避免假陰性情況出現(xiàn)。

綜上所述，采用PCR檢驗(yàn)診斷早期肺結(jié)核，準(zhǔn)確性高，具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

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