王玉閣，姚宏波，文麗波，李 雪，趙 堃*

（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院1.生理教研室；2組胚教研室，黑龍江 齊齊哈爾 161042）

多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是婦科較為常見(jiàn)的一種生殖內(nèi)分泌紊亂性疾病，主要特征為卵泡發(fā)育障礙、不排卵或稀發(fā)排卵、高雄激素血癥、胰島素抵抗及卵巢多囊樣改變。隨著對(duì)PCOS機(jī)制深入的研究，發(fā)現(xiàn)PCOS患者還存在慢性炎癥，慢性低度炎癥亦是PCOS的重要特征[1]。有研究發(fā)現(xiàn)[2]，細(xì)胞炎性因子與PCOS的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，因此本研究通過(guò)觀察小檗堿對(duì)PCOS小鼠卵巢組織中TNF-α、IL-1β、IL-6表達(dá)的影響，來(lái)研究小檗堿改善多囊卵巢綜合征的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：30天齡雌性C57BL/6J小鼠48只，購(gòu)于齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 主要試劑

硫酸脫氫表雄酮，浙江仙居君業(yè)藥業(yè)有限公司；注射用大豆油、二甲雙胍

及小檗堿，湖北遠(yuǎn)成藥業(yè)有限公司；兔抗鼠TNF-α多克隆抗體、兔抗鼠IL-1β多克隆抗體及兔抗鼠IL-6多克隆抗體，萬(wàn)類生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 多囊卵巢胰島素抵抗模型的制備

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)分為對(duì)照組和模型制備組，模型制備組小鼠每日頸背部皮下注射脫氫表雄酮7毫克/100克（采用醫(yī)用大豆油配制），對(duì)照組每日注射等量的醫(yī)用大豆油，模型制備組每日給予60%高脂飲食，對(duì)照組給予正常飲食。從給藥后第11天開(kāi)始晨起進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片，連續(xù)10天，觀察動(dòng)情周期，陰道上皮細(xì)胞持續(xù)10天為角化狀態(tài)的小鼠為誘導(dǎo)成功的模型。將造模成功的小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、二甲雙胍組、小檗堿組。

1.3.2 給藥方法

灌胃法給藥21天，給藥劑量按參考文獻(xiàn)方法換算[3]，小檗堿按每天75 mg/kg灌胃，二甲雙胍按每天100 mg/kg進(jìn)行灌胃，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組每天給予同體積蒸餾水灌胃，均為每天1次，連續(xù)灌服21天。

1.3.3 指標(biāo)檢測(cè)

給藥后第22天，將小鼠隔夜禁食，脫頸椎法處死小鼠，取雙側(cè)卵巢，采用免疫組化法測(cè)定卵巢組織局部TNF-α、IL-1β、IL-6表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.00分析軟件進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)均采用（x± s）表示。兩組間結(jié)果比較經(jīng)t檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

免疫組化陽(yáng)性指數(shù)=陽(yáng)性面積×光密度值/總面積[4]，模型組TNF-α、IL-1β、IL-6陽(yáng)性表達(dá)均明顯高于正常組（P＜0.01）；小檗堿組TNF-α、IL-1β、IL-6陽(yáng)性表達(dá)均低于模型組（P＜0.05）；二甲雙胍組TNF-α、IL-6陽(yáng)性表達(dá)亦均低于模型組（P＜0.05）；小檗堿組TNF-α、IL-1β、IL-6陽(yáng)性表達(dá)與二甲雙胍組比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 各組小鼠卵巢組織IL-1β、IL-6及TNF-α表達(dá)情況

3 討 論

小檗堿（berberine），又稱黃連素，是從毛茛科黃連屬植物三角葉黃連、黃連或云連的根莖中提取出的一種異喹啉類生物堿。近年的研究表明，小檗堿具有抗菌消炎的作用，還有降低血糖，增加胰島素敏感性，改善胰島素抵抗，因此應(yīng)用于2型糖尿病的治療，且療效確切[5]。在PCOS治療中，小檗堿在降低空腹胰島素、腰臀比、膽固醇水平、低密度脂蛋白方面優(yōu)于二甲雙胍，在降低空腹血糖、胰島素抵抗指數(shù)、體質(zhì)指數(shù)、總睪酮水平及升高高密度脂蛋白膽固醇水平方面的療效與二甲雙胍相同[6]。

有研究發(fā)現(xiàn)，PCOS患者中某些炎癥因子水平升高，說(shuō)明在PCOS發(fā)生發(fā)展中可能存在低度慢性炎癥。并且這種低度慢性炎癥與PCOS遠(yuǎn)期并發(fā)癥（如糖尿病和心血管疾?。┑陌l(fā)生發(fā)展也有密切聯(lián)系[7-8]。而本研究采用脫氫表雄酮聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)C57BL/6J雌性小鼠建立PCOS動(dòng)物模型，觀察到模型對(duì)照組小鼠TNF-α、IL-1β、IL-6表達(dá)情況明顯高于正常對(duì)照組，而采用小檗堿治療后，TNF-α、IL-1β、IL-6表達(dá)情況有顯著的降低，提示小檗堿可通過(guò)降低卵巢局部炎癥因子，來(lái)改善卵巢炎癥微環(huán)境，進(jìn)而改善多囊卵巢綜合征癥狀，而小檗堿對(duì)炎癥因子影響作用的具體相關(guān)分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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