包書茵，韓淑英，朝日雅，澈力格爾，奧·烏力吉

(內(nèi)蒙古民族大學1. 醫(yī)學院藥理教研室、2. 蒙醫(yī)藥學院制劑實驗室、3. 蒙醫(yī)藥學院蒙醫(yī)內(nèi)科教研室，內(nèi)蒙古 通遼 028000；4. 華北理工大學基礎醫(yī)學院藥理學系，河北 唐山 063000)

2型糖尿病(T2DM)導致的肝、腎損傷是糖尿病常見并發(fā)癥，也是糖尿病死亡的主要原因之一[1-2]，因此，預防及延緩T2DM并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的研究及藥物的開發(fā)備受人們關(guān)注。GK大鼠是自發(fā)性非肥胖型糖尿病動物模型[3]，與人類T2DM病程特點尤為相似[4]。本實驗應用沙蓬粗寡糖(AOS)對GK大鼠進行干預，觀察其對肝、腎的保護作用，為沙蓬進一步開發(fā)應用提供研究基礎。

1 材料

1.1實驗動物SPF級♂GK大鼠(上海斯萊克斯實驗動物責任有限公司)；SPF級♂Wistar大鼠(北京華阜康生物科技股份有限公司)，均飼養(yǎng)于華北理工大學動物實驗中心屏障實驗室。

1.2藥物與試劑AOS由內(nèi)蒙古蒙醫(yī)藥工程技術(shù)研究院提供；NF-κB多克隆抗體(Santa Cruz公司)。

2 方法

2.1動物分組及給藥65只GK大鼠，給予高脂飼料誘導5周后，挑選符合成模標準(隨機血糖及糖耐量2 h血糖均高于11.1 mmol·L-1)的50只，隨機分為5組，另設正常對照組(NC)，共6組，每組10只。二甲雙胍組(ME)給藥劑量為100 mg·kg-1；AOS高(AOS-H)、中(AOS-M)、低(AOS-L)劑量組給藥劑量分別為960、480、240 mg·kg-1；模型對照組(MC)與NC每天灌胃同容積蒸餾水5 mL·kg-1，各組每天給藥1次，連續(xù)8周。

2.2觀察指標

2.2.1隨機血糖(RBG) 分別于給藥第0、2、4、6、8周用羅氏血糖儀測定非禁食血糖(上午8 ∶00給藥后30 min)。

2.2.2血生化指標檢測 給藥8周后，禁食12 h，大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，經(jīng)腹主動脈取血并分離血清，用全自動生化分析儀測定血清中尿酸(UA)、尿素(Urea)、肌酐(Cre)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)。

2.2.3大鼠肝、腎組織HE染色病理觀察 大鼠取血后，立即剖腹取肝、腎固定于4%多聚甲醛中，常規(guī)石蠟包埋，HE染色，于高倍顯微鏡下觀察病理學改變。

2.2.4大鼠肝、腎組織免疫組化染色觀察NF-κB蛋白表達 上述肝、腎石蠟包埋組織，切成3 μm防脫薄片，60℃烤箱過夜，常規(guī)免疫組化染色，顯微鏡下觀察NF-κB蛋白表達情況。

3 結(jié)果

3.1AOS對GK大鼠RBG的影響MC大鼠RBG隨著周齡增加逐漸升高；與MC比較，AOS各劑量組大鼠RBG明顯降低(P<0.01)，但有波動現(xiàn)象，給藥4周降低效果最好，以AOS-M效果更好，其降糖效應與ME相近。

3.2AOS對GK大鼠肝、腎功能的影響MC大鼠血清ALT、AST活性和Urea、Cre、UA含量明顯高于NC(P<0.01，P<0.05)；與MC比較，AOS-H、AOS-M、AOS-L和ME的ALT活性明顯降低(P<0.01)，AOS-L能明顯降低血清AST活性，與ME一致。AOS能明顯降低血清Cre和UA含量(P<0.01，P<0.05)；ME血清Urea含量明顯低于MC(P<0.05)，各劑量AOS大鼠血清Urea含量與MC無顯著性差異(Tab 1)。

Tab 1 Effect of AOS on ALT, AST, TBIL, Urea, Cre and UA of serum of GK rats(±s，n=10)

#P<0.05，##P<0.01vsnormal group;*P<0.05，**P<0.01vsmodel group

3.3AOS對GK大鼠肝、腎組織病理改變的影響肝臟HE染色結(jié)果顯示，與NC相比，MC大鼠肝細胞索、肝竇結(jié)構(gòu)紊亂，細胞脂肪變性，有炎癥細胞浸潤和出血點；ME與AOS各劑量組大鼠肝組織病理改變明顯減輕，幾乎接近正常。腎組織HE染色結(jié)果顯示，與NC相比，MC大鼠腎小球基底膜彌漫性增厚，腎小球系膜增厚，動脈壁增厚，動脈、腎小球及間質(zhì)周圍出現(xiàn)淀粉樣沉積，腎小管間質(zhì)炎細胞浸潤；AOS-H和AOS-L與MC相比明顯減輕，但有少量炎細胞浸潤，腎小球基底膜輕度增厚；AOS-M和ME趨于正常。

3.4AOS對GK大鼠肝、腎組織NF-κB蛋白表達的影響NC肝、腎組織只有少量散在的黃染顆粒，表明只有少量NF-κB蛋白表達，而MC肝、腎組織可見大量黃染顆粒，表明NF-κB蛋白表達明顯增強，多為細胞質(zhì)均勻表達，少量細胞核著色。AOS各劑量組NF-κB蛋白表達明顯少于MC，AOS-H的NF-κB蛋白表達與ME相當。AOS對肝和腎組織NF-κB蛋白表達具有抑制作用。

4. 討論

長期患有T2DM可導致肝、腎損傷等多種并發(fā)癥。大量研究顯示，炎癥和免疫是糖尿病肝、腎損傷的重要發(fā)病機制之一，也是觸發(fā)胰島素抵抗和代謝疾病的相關(guān)因子。近年發(fā)現(xiàn)，應用炎癥抑制劑或(和)NF-κB抑制劑能夠明顯改善胰島素抵抗及其糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展[5]。沙蓬是中國蒙醫(yī)常用藥材，具有清熱、解毒、利尿等功能[6]。前期研究發(fā)現(xiàn)，AOS能改善胰島素抵抗[7]。本研究也發(fā)現(xiàn)，在糖尿病MC組大鼠肝、腎組織NF-κB蛋白表達明顯上調(diào)，AOS干預組能明顯下調(diào)自發(fā)性T2DM GK大鼠肝、腎組織NF-κB蛋白表達，有劑量效應關(guān)系；同時，AOS能降低RBG，對糖尿病肝、腎損傷有良好抑制作用或延緩其病情進展作用。其作用機制可能是AOS抑制NF-κB蛋白表達，減少炎性細胞因子的生成，達到一定的抗炎作用[8]，從而發(fā)揮對肝、腎組織的保護作用，確切機制有待深入研究。

(致謝：本實驗是在華北理工大學基礎醫(yī)學院、河北省慢性疾病重點實驗室、唐山市慢性病臨床基礎研究重點實驗室完成的，感謝課題組成員的支持與幫助!)

[1] Harrison S A, Brunt E M, Coodman Z D, et al. Diabetic hepatosclerosis: diabetic microangiopathy of the liver[J].ArchPatholLabMed, 2006,130(1):27-32.

[2] Atkins R C, Zimmet P. Diabetic kidney disease: act now or pay later[J].ArchIranMed, 2010,13(1):77-80.

[3] Janssen U, Phillips A O, Floege J. Rodent models of nephropathy associated with typeⅡdiabetes[J].JNephrol,1999,12(3):159-72.

[4] Partha B. Programmed disorders of beta-cell development and function as one cause for type 2 diabetes the GK rat paradigm[J].DiabetesMetabResRev,2005,21(6):495-504.

[5] Fleischman A, Shoelson S E, Bernier R, Goldfine A B. Salsalate improves glycemia and inflammatory parameters in obese young adults[J].DiabetesCare, 2008,31(2):289-94.

[6] 國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會. 中華本草, 蒙藥分卷[M].上海：上?？茖W技術(shù)出版社, 2000:236.

[6] The state administration of traditional Chinese medicine of Chinese materia medica editorial board. Chinese Materia Medica, Mongolian part [M]. Shanghai: Shanghai Scientific and Technical Publishers, 2000:236.

[7] 包書茵，韓淑英，澈力格爾，等. 沙蓬粗寡糖對糖尿病GK大鼠胰島素抵抗的影響[J].中國藥理學通報,2016,32(3):403-9.

[7] Bao S Y, Han S Y, Cheli G, et al. Effects of Agiophyllum oligo saccharides on insulin resistance of Goto-Kakizaki rats[J].ChinPharmacolBull,2016,32(3):403-9.

[8] 李迎春,高澤立,張 成,等.中藥沙棘治療非酒精性脂肪肝的臨床研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012,21(14):1485-6，1494.

[8] Li Y C, Gao Z L, Zhang C, et al. Clinical study on the treatment with chinese medicine sea backthorn on non-alcoholic fatty liver [J].ModJIntegrTraditChinWestMed, 2012,21(14):1485-6,1494.