蔡海濱 涂敏 胡彥師 方家林 程漢 安澤偉 李維國

摘要：選取來自巴西3個(gè)州的48份橡膠樹（Hevea brasiliensis）野生種質(zhì)，將膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）活化后進(jìn)行大田接種鑒定及自然條件評(píng)價(jià)，以篩選抗性種質(zhì)。橡膠樹種質(zhì)人工接種大田鑒定結(jié)果表明，抗病種質(zhì)3份，中感種質(zhì)14份，感病種質(zhì)25份，高感種質(zhì)6份;自然評(píng)價(jià)的結(jié)果與大田接種鑒定結(jié)果顯著相關(guān)。3份抗性種質(zhì)均來自于巴西Rondonia州。

關(guān)鍵詞：橡膠樹（Hevea brasiliensis）;野生種質(zhì);膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）;抗性評(píng)價(jià)

中圖分類號(hào)：S435.76? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2018）21-0065-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.21.015? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Resistance Evaluation to Colletotrichum gloeosporioides of 48

Wild Rubber Tree Clones from Brazil

CAI Hai-bin，TU Min，HU Yan-shi，F(xiàn)ANG Jia-lin，CHENG Han，AN Ze-wei，LI Wei-guo

（Ministry of Agriculture Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Rubber Tree/State Center for Rubber Tree Breeding/Rubber Research Institute，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Danzhou 571737，Hainan，China）

Abstract： A total of 48 rubber tree（Hevea brasiliensis） clones from three states in Brazil were chosen，which field inoculation and natural conditions evaluation inoculated by purified anthracnose（Colletotrichum gloeosporioides） to evaluate the clones resistance level. The result showed that the resistance-susceptibility difference of rubber tree clones was distinct：resistance（3 clones）， mid-susceptibility（14 clones）， susceptibility（25 clones）， and high susceptibility（6 clones）. The results of natural evaluation were significantly related to field inoculation. All the three resistant germplasm came from Rondonia state of Brazil.

Key words： Hevea brasiliensis; wild germplasm; Colletotrichum gloeosporioides; resistance evaluation

炭疽病是巴西橡膠樹的一種重要葉部病害，近年來危害程度逐年加重，造成橡膠產(chǎn)量損失不斷增加[1]。其致病菌有膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）和尖孢炭疽菌（Colletotrichum acutatum）兩種;在中國植膠區(qū)，膠孢炭疽菌是主要的致病菌，占3/4左右[2，3]。國內(nèi)外對(duì)橡膠樹炭疽病抗性進(jìn)行過一系列評(píng)價(jià)[4，5]，但主要針對(duì)目前大面積種植的選育品種，鮮少涉及野生種質(zhì)。為了發(fā)掘野生資源中抗炭疽病資源，本研究對(duì)48份來自巴西3個(gè)州的橡膠樹種質(zhì)進(jìn)行膠孢炭疽菌大田接種鑒定和自然條件評(píng)價(jià)，研究結(jié)果將為選育高產(chǎn)抗病的橡膠樹品種提供育種材料，并為炭疽病的防控提供理論依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 供試材料

試驗(yàn)所用橡膠樹無性系共50份，48份是從國外引進(jìn)的巴西橡膠樹野生種質(zhì)（表1），2份為鑒定對(duì)照品系，皆為中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所育種研究室收集后培育的芽接苗。膠孢炭疽菌株由育種研究室分離保存。

1.2? 接種體準(zhǔn)備

將保存的供試菌接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）平板上，28 ℃自然光照培養(yǎng)48 h，用滅菌的棉簽將菌落充分打斷成菌絲小片段，加入3 mL滅菌水混勻菌絲片段， 取200 μL均勻涂布到新配制的PDA培養(yǎng)基平板上，28 ℃光照培養(yǎng)24 h，當(dāng)肉眼可見新生菌絲長(zhǎng)出培養(yǎng)基表面時(shí)，再用滅菌的棉簽輕輕將菌絲打斷，并用滅菌水沖洗干凈，晾干后蓋上4層紗布，28 ℃光照培養(yǎng)36 h，當(dāng)培養(yǎng)基表面產(chǎn)生大量的炭疽菌分生孢子時(shí)，用滅菌水洗下孢子，加入0.02%吐溫-20備用。

1.3? 炭疽病大田接種鑒定

每份種質(zhì)20株，完全隨機(jī)排列，種植規(guī)格75 cm×75 cm。種苗質(zhì)量符合GB/T 17822.2-1999的要求，栽培技術(shù)按照NY/T 221-2006進(jìn)行。以橡膠樹熱研879為抗病對(duì)照品種，化59-2為感病對(duì)照品種。2017年12月種入中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠所苗圃，2018年2月在接穗上方約40 cm處鋸干，待整齊抽出大量古銅期葉片時(shí)進(jìn)行接種試驗(yàn)，期間未使用殺菌劑。

鑒定方法按照NY/T 3197-2018進(jìn)行。等各種質(zhì)抽出嫩葉期間，接種于芽接苗新抽出的第二蓬古銅期葉片上。調(diào)節(jié)孢子濃度為106個(gè)孢子/mL。接種采用噴霧接種法。用小型手持噴霧器將接種懸浮液均勻噴灑于鑒定品種幼苗的健康古銅期葉片正、反兩面，至葉片掛滿水滴。每份種質(zhì)接種5株，重復(fù)3次，以噴施滅菌水作對(duì)照，塑料袋套袋保濕24 h。在接種后第7天進(jìn)行病害調(diào)查，每株隨機(jī)調(diào)查4片復(fù)葉，共12片小葉。每個(gè)種質(zhì)共調(diào)查180片小葉。調(diào)查記載每份種質(zhì)葉片的病情，按如下公式計(jì)算病情指數(shù)。

式中，Di為病情指數(shù);Ri為病級(jí)代表值;Ti為各級(jí)病葉數(shù);S為調(diào)查總?cè)~片數(shù)。

病情級(jí)別及相對(duì)應(yīng)的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見表2。根據(jù)鑒定材料3次重復(fù)的病情指數(shù)Di的平均值確定其抗病性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表3。

1.4? 田間自然條件下抗病性評(píng)價(jià)

參照田間接種鑒定的方法準(zhǔn)備種苗，調(diào)查時(shí)間在新抽第一蓬葉時(shí)，分別調(diào)查古銅期和淡綠期葉片各1次。調(diào)查方法為每份種質(zhì)五點(diǎn)取樣調(diào)查15株，每株隨機(jī)調(diào)查上部12片新抽的橡膠樹嫩葉。具體調(diào)查操作和抗性評(píng)價(jià)與接種鑒定一致。

1.5? 數(shù)據(jù)分析

用Excel記錄試驗(yàn)數(shù)據(jù)，并使用SAS System（9.0）進(jìn)行相關(guān)性分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 橡膠樹抗炭疽病大田鑒定結(jié)果

感病對(duì)照品系化59-2的接種病情指數(shù)為46.06，大于30，鑒定結(jié)果有效。膠孢炭疽菌對(duì)48份橡膠樹野生種質(zhì)人工接種鑒定結(jié)果為：抗病種質(zhì)3份，中感種質(zhì)14份，感病種質(zhì)25份，高感種質(zhì)6份（表4）;其中，表現(xiàn)感病種質(zhì)占全部評(píng)價(jià)種質(zhì)的比例最大，達(dá)到52%。按照NY/T 3197-2018，鑒定結(jié)果不一致時(shí)，以較低的抗性水平為準(zhǔn)。分析巴西不同州的橡膠樹野生種質(zhì)的綜合抗性發(fā)現(xiàn)，3份抗性種質(zhì)均來自于Rondonia州;Acre州16份種質(zhì)中有4份中感，10份感病，2份高感，75%的種質(zhì)為感病及以上級(jí)別;Mato Grosso州5份種質(zhì)中有2份中感，1份感病，2份高感。

2.2? 橡膠樹抗炭疽病自然評(píng)價(jià)結(jié)果

自然條件下48份橡膠樹野生種質(zhì)評(píng)價(jià)結(jié)果為：抗病種質(zhì)7份，中感種質(zhì)21份，感病種質(zhì)19份，高感種質(zhì)1份（表4）;其中，表現(xiàn)中感種質(zhì)占全部評(píng)價(jià)種質(zhì)的比例最大，達(dá)到43.8%。將接種鑒定病情指數(shù)與自然調(diào)查病情指數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果表明兩者高度相關(guān)（相關(guān)系數(shù)r=0.727）（表5）。

3? 小結(jié)

在巴西橡膠樹野生種質(zhì)中存在抗性資源。在本研究中人工接種膠孢炭疽菌后篩選出3份抗病種質(zhì)，其中種質(zhì)XJA03670在人工接種和自然條件的病情指數(shù)均低于抗病對(duì)照熱研879，表現(xiàn)出良好的抗性潛力，是值得進(jìn)一步重復(fù)鑒定并保存待用的抗性資源。自然評(píng)價(jià)的結(jié)果與接種鑒定結(jié)果顯著相關(guān)。其中，4份種質(zhì)自然條件下表現(xiàn)為抗病，但人工接種鑒定后為中感，存在誤判。但就整體48份種質(zhì)而言，兩者顯著相關(guān)，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.727。表明在實(shí)際生產(chǎn)中，自然條件下抗性評(píng)價(jià)可以作為初篩手段運(yùn)用于大范圍抗性資源篩選。本研究篩選出的3份抗性種質(zhì)均來自于巴西Rondonia州，該結(jié)果表現(xiàn)出一定的抗性資源來源區(qū)域性，但可能與各州選擇的種質(zhì)數(shù)量有關(guān)。Rondonia州27份種質(zhì)，Acre州16份種質(zhì)，Mato Grosso州5份種質(zhì)，需要對(duì)其他州更多數(shù)量的種質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)比較。

參考文獻(xiàn)：

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[2] 林春花，孫董董，韓? 丹，等.中國橡膠樹苗圃2種炭疽病菌分子鑒定及分布分析[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，2014，35（9）：1802-1808.

[3] 劉秀娟，楊業(yè)銅，冷懷瓊.我國植膠墾區(qū)橡膠樹炭疽病菌的種型鑒定[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，1987，8（1）：93-101.

[4] 蔡志英，林春花，翟李剛，等.橡膠樹重要品系對(duì)膠孢炭疽菌抗性評(píng)價(jià)[J].植物保護(hù)，2013，39（6）：110-115.

[5] 李文楊，鄭春耀，李超萍，等.中國橡膠樹主栽品系和部分種質(zhì)對(duì)尖孢炭疽病的室內(nèi)抗性評(píng)價(jià)[J].熱帶農(nóng)業(yè)工程，2009，5（3）：31-36.