侯占英，李華明

(1.深圳市龍華新區(qū)中心醫(yī)院，深圳 518110；2.廣東中醫(yī)藥大學(xué)臨床學(xué)院，廣東 廣州 510000)

斑禿發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與免疫系統(tǒng)、炎癥反應(yīng)和微血管循環(huán)等多種因素有關(guān)，西醫(yī)治療主要以激素和免疫抑制劑為主，但由于毒副作用和不良反應(yīng)，停藥后容易復(fù)發(fā)，臨床治療效果不盡滿意[1-3]。近年來中醫(yī)藥治療斑禿取得了較好的臨床療效，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，斑禿與肝、腎、氣、血功能失調(diào)，風(fēng)邪入侵有關(guān)，滋補(bǔ)肝腎、養(yǎng)血益精、祛風(fēng)生發(fā)可標(biāo)本兼治，促進(jìn)毛發(fā)生長[4-6]。本研究選取70例斑禿患者，觀察自擬補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯治療斑禿的臨床療效，體外建立游離毛囊培養(yǎng)模型，探討補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯含藥血清對血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和毛囊中相關(guān)分子表達(dá)的影響，為斑禿的中醫(yī)藥治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年1月—2015年12月我院收拾的70例斑禿患者為研究對象，所有患者均為首診，符合斑禿的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，且證屬肝腎不足型患者，近期未接受激素或免疫抑制劑治療。排除血熱生風(fēng)、血瘀毛竅等其他證型患者，久治不愈者，近期接受激素或免疫抑制劑治療，急慢性感染者，合并血液病、惡性腫瘤、全身及免疫性疾病患者。按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組(35例)和觀察組(35例)，兩組患者性別、年齡、病程及斑禿皮損評分等資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比較性，具體情況見表1。并收集同期20例健康志愿者血清進(jìn)行體外游離毛囊研究。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2 治療方法

對照組患者給予50 mg醋酸曲安奈德(上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號20131024)和1.0 ml 2%利多卡因(黑龍江哈爾濱醫(yī)大藥業(yè)有限公司，批號20131102)混合液皮損局部注射，0.1 ml/處，局部按摩促進(jìn)藥物吸收，1次/周，共4周。觀察組在對照組患者的基礎(chǔ)上給予自擬補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯口服治療。組方：黨參12 g，生地黃15 g，熟地黃15 g，天門冬9 g，麥門冬9 g，黃精6 g，制何首烏12 g，茯苓12 g，墨旱蓮15 g，女貞子18 g，枸杞子12 g，桑葚子9 g，甘草9 g。取上述配方顆粒加入200 ml溫水，每日早晚分2次使用，1劑/d，連續(xù)治療4周。

1.3 體外游離毛囊培養(yǎng)

取整形外手術(shù)患者新鮮頭皮標(biāo)本，生理鹽水漂洗，剪除多余毛發(fā)和脂肪組織，將頭皮標(biāo)本剪成0.3 cm×0.5 cm皮條，眼科手術(shù)剪分離真皮與皮下組織，棄去真皮和表皮部分。顯微外科鑷夾緊毛根遠(yuǎn)端，拔出完整毛囊，置無菌培養(yǎng)液中。選取結(jié)構(gòu)完整的生長期毛囊，小心轉(zhuǎn)移至24孔板內(nèi)，1根毛囊/孔，再加入0.5 ml毛囊培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。將培養(yǎng)的游離毛囊分為4組，分別為空白血清組、健康血清組、觀察組患者治療前血清組和治療后血清組，空白血清組加入不含任何血清的培養(yǎng)基，健康血清組加入含健康志愿者血清的培養(yǎng)基，治療前血清組加入含觀察組患者治療前血清培養(yǎng)基,治療后血清組加入含治療后觀察組患者血清的培養(yǎng)基，培養(yǎng)3 d后進(jìn)行觀察檢測。

1.4 觀察指標(biāo)

治療后觀察患者的臨床療效，1個月內(nèi)開始生發(fā)，3個月內(nèi)恢復(fù)正常為痊愈；1個月內(nèi)開始生發(fā)，3個月內(nèi)尚有小范圍禿發(fā)或頭發(fā)稀疏為顯效；2個月內(nèi)有生發(fā)反應(yīng)，且長期停留為有效；3個月無生發(fā)反應(yīng)為無效。

總有效率=(痊愈+顯效+有效)/總例數(shù)×100%

采用ELISA法檢測血清和毛囊中干擾素(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、白細(xì)胞介素4(IL-4)和白細(xì)胞介素10(IL-10)含量，試劑盒購于南京建成生物科技有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。采用RT-PCR法檢測毛囊血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)、Fas和FasL mRNA表達(dá)，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、提取試劑盒、引物等均購于上海生工技術(shù)有限公司。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床療效比較

治療14 d后觀察組的總有效率97.15%，明顯高于對照組74.29%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.467，P=0.006)。結(jié)果見表2。

表2 兩組患者臨床療效比較[n(%)]

2.2 兩組患者治療前后炎癥因子比較

治療前兩組患者血清IFN-γ、TNF-α、TGF-β、IL-4和IL-10含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療后觀察組患者血清IFN-γ、TNF-α、TGF-β含量低于對照組，而IL-4和IL-10含量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表3。

表3 兩組患者治療前后血清炎癥因子比較

注：與本組治療前比較，aP<0.05；與對照組治療后比較，bP<0.05

2.3 毛囊中VEGF、Fas和FasL表達(dá)比較

空白血清組、健康血清組、治療前血清組VEGF、Fas和FasL比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療后血清組游離毛囊的VEGF表達(dá)低于其他三組，而Fas和FasL表達(dá)高于其他三組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表4。

表4 血清毛囊VEGF、Fas和FasL表達(dá)

注：與治療后血清組比較，aP<0.05

2.4 患者毛囊炎癥因子比較

空白血清組、健康血清組、治療前血清組的IFN-γ、TNF-α、TGF-β、IL-4和IL-10含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療后血清組游離毛囊的IFN-γ、TNF-α、TGF-β含量低于其他三組，而IL-4和IL-10含量高于其他三組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表5。

表5 患者毛囊中炎癥因子比較

注：與治療后血清組比較，aP<0.05

3 討論

斑禿是一種累及頭皮的慢性炎癥性皮膚疾病，以毛發(fā)脫落為特征，給患者帶來心理和精神壓力，嚴(yán)重者影響患者的工作和生活。目前斑禿的病因病機(jī)尚不完全清楚，可能與自身免疫反應(yīng)、細(xì)胞因子和微血管循環(huán)等有關(guān)，毛囊微循環(huán)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，血清炎癥因子等在斑禿的發(fā)病過程中起著關(guān)鍵作用[8-9]。臨床治療主要以全身或局部使用皮質(zhì)類固醇激素、毛囊刺激劑米諾地爾等，可抑制免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)，有臨床療效，但副作用大，依賴性強(qiáng)、減藥或停藥后容易復(fù)發(fā)。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,斑禿為肝、腎、氣血功能失調(diào)，風(fēng)邪入侵致經(jīng)脈不暢，發(fā)根失養(yǎng)而致病，斑禿應(yīng)以滋補(bǔ)肝腎、養(yǎng)血益精、祛風(fēng)生發(fā)等為治療原則[10-11]。補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯為我院治療斑禿的臨床經(jīng)驗方，具有良好的臨床療效，但其作用機(jī)制不明[12]。本研究旨在通過觀察自擬補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯治療斑禿的效果和補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯血清對游離毛囊培養(yǎng)模型的作用，探討自擬補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯治療斑禿的療效及對血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和毛囊中相關(guān)分子表達(dá)的影響，為臨床有效治療斑禿提供理論依據(jù)。

斑禿的發(fā)病機(jī)制尚不明確，與T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫細(xì)胞大量分泌炎癥因子，導(dǎo)致外周血IFN-γ、TNF-α、TGF-β含量升高，IL-4和IL-10含量降低，毛囊角質(zhì)細(xì)胞分化異常，F(xiàn)as/FasL 低表達(dá)誘導(dǎo)角質(zhì)細(xì)胞發(fā)生凋亡，造成局部毛囊發(fā)生損傷，誘發(fā)毛囊周圍毛細(xì)血管增生，VEGF過表達(dá)等因素密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，治療14 d后觀察組的總有效率97.15%，明顯高于對照組74.29%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義,說明自擬補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯治療斑禿的臨床療效確切?？赡苁怯捎谘a(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯滋補(bǔ)肝腎、養(yǎng)血活血、益氣化濕功效，可標(biāo)本兼顧，促進(jìn)毛發(fā)生長。觀察組患者IFN-γ、TNF-α、TGF-β含量低于對照組，而IL-4和IL-10含量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義,說明自擬補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯可減輕患者的炎癥反應(yīng)。補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯方中黨參補(bǔ)中益氣、生津、養(yǎng)血，生地黃清熱涼血、養(yǎng)陰生津，熟地黃補(bǔ)血滋陰、益精填髓，天門冬養(yǎng)陰潤燥、清火生津，麥門冬養(yǎng)陰潤肺、益胃生津、清心除煩，黃精滋腎潤肺、補(bǔ)脾益氣，制何首烏補(bǔ)益精血、固腎烏須，抑制皮脂溢出，茯苓利水滲濕、健脾安神，墨旱蓮和女貞子補(bǔ)肝腎陰、涼血止血，調(diào)理內(nèi)分泌，枸杞子補(bǔ)肝腎，菟絲子補(bǔ)腎固經(jīng)、養(yǎng)肝明目，桑椹子滋陰補(bǔ)血、生津潤腸,甘草調(diào)和諸藥藥性。全方用藥精當(dāng)，配伍合理，可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能,改善微循環(huán)，減輕局部炎癥反應(yīng)[13]。治療后血清組游離毛囊的VEGF表達(dá)低于其他三組，而Fas和FasL高于其他三組，治療后血清組游離毛囊的IFN-γ、TNF-α、TGF-β含量低于其他三組，而IL-4和IL-10含量高于其他三組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。說明補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯含藥血清可減輕體外游離毛囊的炎癥因子水平和改善微循環(huán)?？赡苁怯捎诜街心瞪徍团懽咏档腿ざ龋纳蒲旱母唣顟B(tài)，調(diào)節(jié)免疫功能，桑葚促進(jìn)造血細(xì)胞生長，甘草促進(jìn)IL-4釋放，抑制T細(xì)胞活性，具抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)等作用有關(guān)[14-15]。

綜上所述，自擬補(bǔ)腎養(yǎng)血益精湯治療斑禿具有較好的臨床療效，可降低血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子表達(dá)，改善毛囊中相關(guān)分子表達(dá)，值得臨床推廣應(yīng)用。

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