辛華，江源銘,馬雷，任秀英，王莉，劉金鳳，江清林*

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯大學(xué)，黑龍江 佳木斯 154007)

姜黃素是姜黃根莖提取物，是姜黃發(fā)揮作用的主要成分。姜黃素具有抗腫瘤、抗炎的作用，被列為第三代癌化療預(yù)防藥[1-2]。目前，關(guān)于姜黃素影響前列腺癌細胞基因表達的相關(guān)研究和報道較少[3]。本研究借助SP免疫組織化學(xué)及細胞培養(yǎng)技術(shù)，對姜黃素影響前列腺癌DU145細胞株Survivin、Bax以及C-erbB-2表達的情況進行了研究，旨在為臨床治療前列腺癌提供有利依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

人前列腺癌DU145細胞株(上海信裕生物科技有限公司)；cellgro 1640培養(yǎng)基(北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司)；C-erbB-2、Bax、Survivin兔抗人多克隆抗體(上海武昊經(jīng)貿(mào)有限公司)；DAB顯色劑、SP免疫組化試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)。

姜黃素(上海源葉生物科技有限公司)用三蒸水配制成姜黃素溶液，濃度為100 μmol/L，采用培養(yǎng)瓶控制姜黃素溶液總濃度為50 μmol/L。

1.2 方法

呈對數(shù)生長的前列腺癌細胞加入消毒蓋玻片，加藥前和加藥后6 h、12 h及24 h取出癌細胞爬片，利用4%多聚甲醛液進行固定，PBS緩沖液進行清洗，一抗后，室溫過夜。清洗后加入二抗體，溫度為37℃，時間為40 min；PBS緩沖液清洗后加入三抗體，溫度為37℃，時間為40 min；DAB顯色，時間為5～10 min，清洗，晾干，封片。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用彩色分析軟件，取灰度均值，均數(shù)±標準差表示計量資料，進行t檢驗，P<0.05說明對比具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示,分布于癌細胞質(zhì)中的Bax、C-erbB-2以及Survivin陽性物質(zhì)呈棕黃色，采用姜黃素干預(yù)后，Bax、C-erbB-2以及Survivin含量發(fā)生一定變化，Bax含量出現(xiàn)增加趨勢，C-erbB-2和Survivin含量出現(xiàn)減少趨勢。其中，未加藥與加藥后6 h、加藥后12 h、加藥后24 h相比，Bax的t值分別為5.753 8、12.056 4、12.729 3，P均<0.05；C-erbB-2的t值為17.963 7、35.961 0、43.201 1，P均<0.05；Survivin的t值分別為12.509 7、19.928 3、26.259 6，P均<0.05。姜黃素對前列腺癌細胞C-erbB-2,Bax和Survivin表達的影響具體情況見表1。

表1 姜黃素對前列腺癌細胞C-erbB-2,Bax和Survivin表達的影響

注：與未加藥組比較，*P<0.05。

3 討論

姜黃素具有地域分布廣、無毒副作用、價格低廉等優(yōu)勢，目前是中草藥抗癌的首選藥物之一。在抗癌機制中，姜黃素對多種基因表達的調(diào)控作用最為明顯，如姜黃素對C-jura、Survivin、Cox-2、SP、C-mye等基因表達均有一定的干預(yù)作用。姜黃素作為脂溶性酚類色素，目前被證實具有多種藥理作用，其中姜黃素的抗腫瘤、抗炎作用備受關(guān)注。大量研究表明，姜黃素抗腫瘤機制主要如下[4]：姜黃素對多種基因表達具有一定的促進或抑制作用；姜黃素對瘤內(nèi)血管形成、金屬蛋白酶活性具有抑制作用；姜黃素具有抑制一氧化氮合酶、激酶活性的作用；姜黃素對調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子、核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子活性具有抑制作用；姜黃素可促使機體免疫功能增強。本結(jié)果表明,姜黃素具有調(diào)控前列腺癌細胞基因表達的作用，有研究認為姜黃素拮抗腫瘤細胞DNA氧化、改變線粒體膜電位、降低多種酶活性造成癌細胞代謝類型發(fā)生變化是姜黃素調(diào)控前列腺癌細胞基因表達的主要機制。線粒體功能異?；駾NA損傷的情況下，基因表達必然會出現(xiàn)上調(diào)或下調(diào)的異常狀況。有研究對肝細胞的黏附因子進行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)姜黃素對肝細胞黏附因子具有侵襲和干預(yù)的雙重作用[5]。

Bax是人體細胞中發(fā)現(xiàn)的一種蛋白質(zhì)[6]，與Bcl-2共同沉淀，其分子量為21KD，分布在胞質(zhì)中。細胞受到外界因素的刺激后，Bax經(jīng)轉(zhuǎn)移在線粒體外膜上與Bcl-xl、Bcl-2等結(jié)合，產(chǎn)生異源二聚體，并對Bax產(chǎn)生抑制作用[7]。當形成同源二聚體時，線粒體中細胞色素C溢出，可啟動線粒體介導(dǎo)的細胞出現(xiàn)凋亡。Bax表達與瘤細胞凋亡指數(shù)密切相關(guān)，本結(jié)果顯示人前列腺癌DU145細胞中Bax的表達不明顯，加藥后6 h、12 h及24 h，Bax表達逐漸增強，提示姜黃素具有上調(diào)Bax表達的作用；同時有研究認為姜黃素上調(diào)Bax表達的這種干預(yù)作用具有一定的時相限制[8]。

Survivin是凋亡抑制蛋白的成分之一，其分子量很小，可見于細胞周期的G2/M期，具有抵御細胞凋亡的作用。研究證明[9],Survivin表達可促使癌細胞跳過凋亡點，細胞分裂逐漸加速，導(dǎo)致癌細胞持續(xù)增殖；有關(guān)學(xué)者對人前列腺癌Survivin的陽性率進行檢測，結(jié)果顯示Survivin陽性率為80.3%[10]。本結(jié)果顯示,Survivin呈高表達狀態(tài)，加藥后6 h、12 h及24 h，Survivin的表達強度有所減少，表明姜黃素具有下調(diào)Survivin表達的作用。

C-erbB-2癌基因編碼的蛋白質(zhì)C-erbB-2是跨膜磷酸黏蛋白，其分子量為185 KD，C-erbB-2的特異性配體尚不明確，研究證實[11]其具有一定的膜受體作用，是細胞生長的刺激因素之一，具有潛在性。染色體異位、基因擴增的情況下，C-erbB-2基因被激活，導(dǎo)致P185含量逐漸升高。利用免疫組織化學(xué)方法進行檢測，可以發(fā)現(xiàn)宮頸癌、大腸癌、胃癌、膀胱癌及乳腺癌中均有C-erbB-2過表達現(xiàn)象。近有研究表明[12]，C-erbB-2陽性患者激素治療的敏感性較差，同時預(yù)后差、生存期短，故將C-erbB-2作為預(yù)測預(yù)后不良的指標之一。本結(jié)果顯示,前列腺癌細胞株中C-erbB-2呈高表達，加藥后6 h、12 h及24 h，C-erbB-2表達有所減少，胞質(zhì)著色逐漸變淺，提示姜黃素具有下調(diào)C-erbB-2表達的作用。

可見，姜黃素主要通過上調(diào)前列腺癌細胞Bax基因表達、下調(diào)前列腺癌細胞C-erbB-2和Survivin基因表達對前列腺癌起到殺傷或抑制的作用，由此說明姜黃素具有抑制癌細胞生長、增殖的明顯效果，與此同時，Bax基因表達的上調(diào)可促使前列腺癌細胞凋亡。相關(guān)研究提示[13],姜黃素通過下調(diào)血管生成促進因子也可起到抑制血管生成、腫瘤細胞生長的作用。綜上所述，姜黃素具有上調(diào)Bax表達、下調(diào)C-erbB-2和Survivin表達的作用，可抑制前列腺癌細胞生長，促進其凋亡。

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