孟思妤 孟長(zhǎng)明 陳昌福

（1.河南省新鄉(xiāng)市康大消毒劑有限公司，453700；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，430070）

2 致病菌藥物敏感性測(cè)定

抗菌藥物敏感性試驗(yàn)（AST）簡(jiǎn)稱藥敏試驗(yàn)（或耐藥試驗(yàn)），旨在了解病原菌對(duì)各種抗生素的敏感（或耐受）程度，以指導(dǎo)藥物治療中合理選用抗生素藥物的微生物學(xué)試驗(yàn)。某種抗生素如果能以很小的劑量抑制、殺滅致病菌，則稱該種致病菌對(duì)該抗生素“敏感”。反之，則稱為“不敏感”或“耐藥”。為了解致病菌對(duì)哪種抗生素敏感，以合理用藥，減少盲目性，就應(yīng)該進(jìn)行對(duì)致病生物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。致病菌的藥敏試驗(yàn)大致過(guò)程是：從患者的感染部位（病灶）采取含致病菌的標(biāo)本，接種在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上，于一定條件下純化培養(yǎng)菌株。如果采用紙片瓊脂擴(kuò)散法（K-B法）完成藥敏試驗(yàn)，就可將分別沾有一定量各種抗生素的紙片貼在培養(yǎng)基表面（或用不銹鋼圈，內(nèi)放定量抗生素溶液），培養(yǎng)一定時(shí)間后觀察抑、殺菌結(jié)果。由于致病菌對(duì)各種抗生素的敏感程度不同，在藥物紙片周圍便出現(xiàn)不同大小的抑制致病菌生長(zhǎng)而形成的“空圈”，稱為抑菌圈。抑菌圈大小與致病菌對(duì)各種抗生素的敏感程度成正比關(guān)系。因此，可以根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果有針對(duì)性地選用抗生素。最近已有自動(dòng)化的藥敏試驗(yàn)儀器問(wèn)世，可以使藥敏試驗(yàn)更加迅速、準(zhǔn)確。

對(duì)水生動(dòng)物致病菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果不僅可為科學(xué)地選擇治療藥物提供重要參考，避免漁用藥物的濫用或者誤用，而且通過(guò)監(jiān)控病原菌的耐藥性變遷，還可用于評(píng)價(jià)研制漁用藥物中新藥的抗菌譜和抗菌活性等藥效學(xué)特征。目前，在水生動(dòng)物疾病防控中濫用抗生素的現(xiàn)象比較普遍，致使抗藥致病菌急劇增加，甚至因長(zhǎng)期大量使用廣譜抗生素，大量殺傷了水生動(dòng)物體內(nèi)正常微生物，失去微生物的相互制約作用，從而使一些少見(jiàn)的或一般情況下的非致病菌大量繁殖，引起所謂“二次感染”的情況屢有發(fā)生，給藥物治療水生動(dòng)物感染性疾病造成人為的困難。因此，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中提倡對(duì)水生動(dòng)物致病菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，對(duì)于做到精準(zhǔn)用藥和堅(jiān)持合理用藥是十分重要的。

目前常用的藥敏試驗(yàn)方法有：紙片瓊脂擴(kuò)散法（K-B法）、稀釋法、E試驗(yàn)、檢測(cè)細(xì)菌耐藥性的方法。稀釋法又可分為液體稀釋法和瓊脂稀釋法。在人醫(yī)和獸醫(yī)方面，檢測(cè)細(xì)菌耐藥性的方法還包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的檢測(cè)、耐萬(wàn)古霉素腸球菌（VER）的檢測(cè)、耐青霉素肺炎鏈球菌（PRP）的檢測(cè)、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL）的檢測(cè)和β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)。

對(duì)于水生動(dòng)物致病菌藥敏試驗(yàn)主要采用紙片瓊脂擴(kuò)散法（K-B法）和稀釋法進(jìn)行。

1）紙片瓊脂擴(kuò)散法（K-B法）

該方法是將含有定量抗菌藥物的藥敏片（藥敏片），貼在已接種了待測(cè)試致病菌的瓊脂培養(yǎng)基表面上，藥敏片中所含的藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴(kuò)散，隨著擴(kuò)散距離的增加，抗菌藥物的濃度呈對(duì)數(shù)減少，在紙片的周圍形成藥物濃度梯度。導(dǎo)致藥敏片周圍能抑菌的藥物濃度范圍內(nèi)的致病菌不能生長(zhǎng)，而處于藥物抑菌濃度范圍外的致病菌則可以生長(zhǎng)。因此，在藥敏片周圍形成透明的抑菌圈。不同抑菌藥物的抑菌圈直徑因受藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴(kuò)散速度的影響而可能不同，抑菌圈的大小即可以反映測(cè)試致病菌對(duì)藥物的敏感程度，并與該藥物對(duì)測(cè)試致病菌的MIC相關(guān)。

藥敏片可以購(gòu)買或者自制。自制藥敏片時(shí)，取新華1號(hào)定性濾紙，用打孔機(jī)將其打成6.0毫米直徑的圓形紙片。取圓形紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)15磅15～20分鐘高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數(shù)天，使其完全干燥。

接著，向上述含有50片濾紙片的青霉素瓶?jī)?nèi)加入藥液0.25mL，并翻動(dòng)濾紙片，使各濾紙片充分浸透藥液，翻動(dòng)濾紙片時(shí)不能將其搗爛。同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內(nèi)過(guò)夜，待其干燥后即密封，如有條件可真空干燥。切勿讓藥敏片受潮，置陰暗干燥處保存，制作好的藥敏片的有效期一般為3～6個(gè)月。

需要注意的是藥敏片的質(zhì)量一定要標(biāo)準(zhǔn)，這是做好藥敏試驗(yàn)的關(guān)鍵。如果藥敏片質(zhì)量參差不齊（制作藥物紙片時(shí)，如果選擇的濾紙厚薄不一致，或者有缺損，就會(huì)導(dǎo)制備的藥敏片中藥物含量不均勻），常常引起抑制菌環(huán)不規(guī)則，使藥敏結(jié)果判斷不準(zhǔn)確。因此，藥敏片間差和準(zhǔn)確度都一定要達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，為了保持藥敏片中的藥物活性，藥敏片的pH一般要求為中性；同時(shí)將其置放低溫條件（-10℃）下保存，避免潮濕。盛裝藥敏片的容器自低溫處取出時(shí)，應(yīng)放置在室溫條件下平衡至少10分鐘后再打開(kāi)包裝容器，避免冷凝水影響到藥效。

（未完待續(xù)）