趙有績

（青島萊西市店埠鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)與科技服務(wù)中心，山東萊西266607）

目前，我國的農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留污染問題普遍存在，已成為影響水果和蔬菜安全的主要危害因素。對市場蔬菜農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，有利于控制蔬菜的安全性，確保人們能夠吃到安全放心的蔬菜。一般而言，蔬菜農(nóng)藥殘留常規(guī)檢測方法需要較長的時間，而運用農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)則可以在較短時間內(nèi)得到檢測結(jié)果。這就為加強(qiáng)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測，對蔬菜的安全性監(jiān)管，保障人民群眾的飲食安全，推動農(nóng)業(yè)生產(chǎn)綠色高效發(fā)展具有重要意義?？梢?，要全面保證上市蔬菜的安全就必需要通過快速檢測方法，檢測、分析蔬菜中的農(nóng)藥殘留情況，對蔬菜的安全性進(jìn)行監(jiān)管，本文闡述了速測儀法的檢測原理、檢測步驟及使用時的注意事項。

1 速測儀原理及使用方法

1.1 檢測原理

農(nóng)藥殘留速測儀是根據(jù)國標(biāo)GB/T 5009.199-2003采用酶抑制原理和光電比色法原理研制而成的一種快速檢測儀器，是通過乙酰膽堿酶受到抑制的程度，判斷蔬菜中有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留情況。蔬菜中常見的有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥對昆蟲的中樞起到一定的抑制作用，當(dāng)昆蟲的神經(jīng)系統(tǒng)中存在乙酰膽堿酶時，其活性會受到這兩類農(nóng)藥的影響，從而使乙酰膽堿不能正常的傳導(dǎo)，導(dǎo)致昆蟲中毒死亡。所以，當(dāng)蔬菜中不含有這些類別的農(nóng)藥時，乙酰膽堿酶的活性不會受到抑制。在試驗過程中添加的底物會被乙酰膽堿酶水解得到相應(yīng)的產(chǎn)物，與顯色劑反應(yīng)顯現(xiàn)出特定的顏色。當(dāng)蔬菜中含有這些類別的農(nóng)藥時，底物就不會被水解，不會產(chǎn)生顯色反應(yīng)。然后，利用分光光度計，在412 nm處對吸光值隨時間的變化值進(jìn)行測定，可以得到相應(yīng)的抑制率，從而判斷出蔬菜中的農(nóng)藥殘留情況。當(dāng)抑制率低于50%時，說明蔬菜中的農(nóng)藥殘留含量超標(biāo)，當(dāng)抑制率低于50%時，說明蔬菜中農(nóng)藥殘留含量在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。

1.2 檢測步驟

首先，做好檢測前的準(zhǔn)備工作。先提取緩沖溶液，用1000 mL蒸餾水將每個小袋中的緩沖溶液進(jìn)行溶解。準(zhǔn)備乙酰膽堿酶，用10 mL的緩沖溶液溶解將乙酰膽堿酶溶解，并儲存在0～5℃的環(huán)境中。準(zhǔn)備碘化乙酰硫代膽堿作為底物，利用10 mL的蒸餾水將其溶解，在相同的溫度下儲存。準(zhǔn)備二硝基苯甲酸作為顯色劑，用10 mL的緩沖溶液將其溶解，同樣儲存在0～5℃的環(huán)境中。

其次，處理空白樣。取一個平底的小試管，在其中加入50 μL的酶、3 mL的緩沖溶液和50 μL的顯色劑。在常溫下放置15 min后，再向試管中加入50 μL底物，然后將試管中的溶液倒入比色皿中，再放進(jìn)儀器比色池中，按下“空白”鍵，經(jīng)過3 min，可以測得空白吸光度值。

再次，處理樣品。選取2～2.5 kg的蔬菜，將其分成3份，分別用于備案、復(fù)檢、檢測。選取表面比較干凈的2 g葉菜、4 g非葉菜，以及1片果菜。然后，將所選擇的蔬菜，切成小丁，放在小玻璃瓶中，向其中加入20 mL緩沖溶液，連續(xù)震蕩1～2 min后，將上清液倒入大試管中，放置3～5 min。向平底小試管中加入 50 μL 的酶、50 μL 的顯色劑和3 mL的樣本提取液，在常溫環(huán)境下放置15 min。向待測的平底小試管中加入50 μL底物，分別倒進(jìn)比色皿中，再將其放入儀器比色池中，按下“樣品”鍵。等待3 min，可測得樣品吸光度值和樣品抑制率。

最后，分析檢測結(jié)果，檢測結(jié)果用抑制率來表示的。

2 注意事項

2.1 檢查檢測儀器

在對樣品進(jìn)行檢測前，要仔細(xì)的檢查儀器，檢查內(nèi)容如下：第一，儀器的光源是否正常；第二，在儀器中是否有遺留的樣品比色皿存在；第三，儀器是否能正常工作。在使用儀器的時候，要先開機(jī)預(yù)熱10 min，預(yù)熱直接按下空白鍵或者樣品鍵，過3 min后觀察結(jié)果，然后再進(jìn)行空白對照檢測和樣本檢測。

2.2 試劑的保存和使用

在試驗過程中，酶試劑是最重要的，酶的活性影響測試結(jié)果決定著試驗是否能成功。為確保檢測的準(zhǔn)確性，必須要做好試劑的保存工作。所以，顯色劑、酶試劑等，都要放置在0～5℃的環(huán)境中。配置好的酶液、底物等，要在1周內(nèi)用完，顯色劑要在1個月內(nèi)用完，溶液的反復(fù)解凍次數(shù)不能超過2次，緩沖溶液可在常溫下保存。檢測室的溫度最好控制在20～30℃，經(jīng)過改進(jìn)后的酶，不需要放在37～38℃的保溫箱中培養(yǎng)，室溫培養(yǎng)即可。在22℃時，需要培養(yǎng)20 min，25℃以上時需要培養(yǎng)15 min。當(dāng)室溫低于20℃時，就需要將其放在37～38℃的保溫箱中培養(yǎng)。

2.3 取樣的正確性

在取樣時，要將抽樣工具和需要的容器清潔干凈，不能存在異味，否則會污染樣品，將樣品準(zhǔn)備好等待檢測。選擇均勻、可食用、具有代表性的部位取樣。在選取果菜類樣品時，要利用取樣器或者小刀，沿著果菜的表面，取1 cm厚的樣本。菠菜、甘藍(lán)等蔬菜的葉綠素含量比較高，在提取樣本時，可將整株蔬菜進(jìn)行浸提，以免樣本受到色素的干擾。茄子在切開后容易氧化，浸提時可直接用整個茄子或者切下一大塊，以免樣本被干擾。韭菜、香菜等蔬菜產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物，會產(chǎn)生假陽性。所以，在提取這些類型的蔬菜樣本時，也需要整株浸提。

3 實例

取大白菜、青菜等大葉蔬菜8～10片葉子，將每片葉子從中對分，一半棄掉，一半從中攔腰截斷，取每片葉子的部分制樣。取豌豆尖這一小葉蔬菜，整株作為取樣單元，總共取100～150 g制樣。同時，取蘿卜、茄子、蔥頭等各100～150 g制樣。將每份樣品葉都貼上標(biāo)簽和編號，每瓶取2 g，放入500 mL的三角瓶中，制取浸提液。利用酶液和顯色液對其進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果的抑制率如果低于50%，說明農(nóng)產(chǎn)品中的蔬菜殘留不超標(biāo)；如果抑制率超過50%，說明農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留量超標(biāo)。當(dāng)抑制率超過40%時，應(yīng)進(jìn)行2次以上的重復(fù)檢測，保證重復(fù)檢測的重現(xiàn)性不低于80%。

4 小結(jié)

在蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測中，要先準(zhǔn)備好檢測所需的各種試劑和容器，準(zhǔn)備好檢測儀。選好樣品，再用乙酰膽堿酶對其進(jìn)行檢測，通過檢測儀器獲取檢測結(jié)果。

速測儀法在蔬菜農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用，簡單方便，只需30 min左右的時間就能完成，能夠彌補傳統(tǒng)檢測儀器分析方法的不足，實現(xiàn)對市場上的蔬菜、農(nóng)場中的蔬菜農(nóng)藥殘留情況進(jìn)行快速檢測，分析出蔬菜中的農(nóng)藥殘留量，使人們能夠食用到安全、放心的蔬菜。

速測儀法在檢測過程中同時也存在一定缺點，還需要進(jìn)一步對其進(jìn)行改進(jìn)。例如，酶試劑容易失去活性，一旦其活性不存在，就會影響檢測過程反應(yīng)的穩(wěn)定性，使檢測結(jié)果出現(xiàn)很大的誤差，從而降低其重復(fù)性檢測效果。此檢測方法的實際應(yīng)用過程中，確認(rèn)率通常只能達(dá)到60%～70%。并且，在檢測過程中還存在盲區(qū)，只能對兩類農(nóng)藥進(jìn)行檢測，一類是有機(jī)磷，一類是氨基甲酸酯，無法檢測出有機(jī)氯類農(nóng)藥、菊酯類農(nóng)藥和其他類農(nóng)藥。此外，速測儀法也不適合對蔥、蒜、番茄、胡蘿卜等14類農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行檢測，因為這些農(nóng)產(chǎn)品容易出現(xiàn)假陽性。速測儀對檢測人員的要求比較高，這些人員必須要經(jīng)過專業(yè)的培訓(xùn)，才能對檢測過程中出現(xiàn)的問題進(jìn)行專業(yè)的判斷和處理，否則很容易得出錯誤的檢測結(jié)果。