劉春龍

（山西省飼料獸藥監(jiān)察所 030027）

獸藥殘留檢測是保障動物性食品質(zhì)量安全的重要手段，然而畜禽樣品組成復(fù)雜、藥物殘留濃度極低、操作步驟繁瑣，普遍存在前處理對檢測結(jié)果影響程度高、儀器性能要求高、檢測技能要求高、回收率低的 “三高一低”特點。認真研究標準，把握好檢測中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，處理好標準中的每個細節(jié)問題，才能取得滿意的檢測結(jié)果。

1 準確理解和運用標準

獸藥殘留檢測按分析步驟劃分，可分為試料制備、提取、凈化、濃縮、衍生化、酶解、儀器測定等步驟。但由于畜禽藥物的多樣性，各種藥物在不同動物、不同組織內(nèi)代謝與分布的復(fù)雜性，不同檢測樣品的基質(zhì)效應(yīng)和干擾成分存在顯著差異，應(yīng)分別采取不同方法檢測，這樣造成殘留檢測標準多種多樣、名目繁多。不同標準涉及的檢測原理和反應(yīng)類型不同，所采用的試劑耗材、操作步驟、檢測細節(jié)存在差異，在檢測時一定要認真分析標準，準確理解和運用標準。

首先要準確理解檢測原理，弄清楚每一步驟涉及的反應(yīng)類型。畜禽樣品組成復(fù)雜，基質(zhì)干擾嚴重，檢測時需進行除雜凈化；有的藥物還要通過衍生化、酶解等過程才能轉(zhuǎn)化為可檢測的形式，這些都要涉及物理、化學(xué)反應(yīng)及生化反應(yīng)。對于只涉及物理變化的步驟，如去除脂肪用途的正乙烷和異辛烷、起脫水作用的無水硫酸鈉等，對檢測結(jié)果影響不大，用量不必要精確控制，可根據(jù)樣品中的脂肪含量和含水量而定，離心時的離心力、離心時間設(shè)置也是如此，能達到溶液澄清即可；但對于一些能影響化學(xué)反應(yīng)的試劑則要嚴格控制，如鹽酸、乙酸、碳酸鈉等酸堿性物質(zhì)，及許多化學(xué)反應(yīng)物，其濃度和用量不準會改變?nèi)芤后w系的pH，影響藥物定量反應(yīng)的形成及提取、凈化、酶解效果；生化反應(yīng)還對溫度等因素敏感，應(yīng)予準確控制。

其次在標準的應(yīng)用中，不僅要嚴格執(zhí)行操作規(guī)程，還要熟悉相關(guān)技術(shù)規(guī)程中的一些具體要求。如試料制備、溶液配制、數(shù)據(jù)處理和質(zhì)量控制等過程應(yīng)遵照《獸藥殘留實驗室質(zhì)量控制規(guī)范》、《數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示與判定》、《常用玻璃量器檢定規(guī)程》等規(guī)程。如果不了解這些 “共同規(guī)程”中的細節(jié)內(nèi)容，照本宣科，勢必造成標準執(zhí)行上的偏差。

2 避免損失與防止污染

畜禽產(chǎn)品的獸藥最高殘留限量基本都在1mg/kg以下，即百萬分之一（ppm）級別，許多禁用藥要求十億分之一（ppb）或更低，無疑屬于痕量分析范疇。痕量分析對外部環(huán)境敏感，檢測時最基本的一個要求就是要避免損失和防止污染，它們對檢測的 “特異性、靈敏度、準確度和精密度”具有很大影響。

這是因為在痕量檢測中，為了除去共存雜質(zhì)的干擾，提高檢測靈敏度和保護儀器都要進行復(fù)雜的凈化萃取、富集濃縮等步驟，進行繁瑣的液體轉(zhuǎn)移、溶劑移取和蒸干氮吹處理，處理液一般只有幾毫升，甚至1～2ml或更少。對于這么少的液體，如不認真操作，小心移取，很可能會引起液體的噴、濺、灑、漏現(xiàn)象；即使只有幾滴，也足以引起寶貴的痕量組分損失，對檢測結(jié)果造成較大影響。樣品或試液粘壁，提取不完全，也能引起檢測成分損失。

痕量組分遭受污染的后果更嚴重。它與常量成分相比實在是太渺小了，即使被污染一小滴，也足以對痕量檢測結(jié)果造成巨大影響。污染待測藥物會使檢測結(jié)果成倍提高或呈幾何級變化；污染其他化學(xué)藥物會引入不明雜峰，影響分離度，干擾檢測主峰；誤加或污染了檢測中的其他溶液，會破壞藥物定量反應(yīng)，使痕量組分得不到有效萃取，使雜質(zhì)成分得不到良好分離，甚至還會掩蔽痕量組分，使之不能轉(zhuǎn)化為所需要的檢測形式；操作不當(dāng)還容易引起樣品間的交叉污染。

殘留檢測操作繁瑣、步驟冗長，從樣品制備、器皿洗洗，到整個前處理與儀器檢測過程都容易發(fā)生污染、誤操作。這就要求我們在檢測時不僅要認真謹慎、精耕細作，還要遵守痕量分析的有關(guān)規(guī)則和程序。首先要嚴格遵守樣品制備程序、器具洗滌程序，避免所制樣品和所用器具本身就存在污染；配制溶液時都要粘貼標簽，使用時仔細查驗，避免誤用；試液轉(zhuǎn)移中所用的離心管、試管等器具必須貼寫一致性編號，號對號操作，以免誤操作；樣液移取中所用的槍頭、吸管、滴管、量器也要專用，避免發(fā)生交叉污染；各種標準溶液對痕量檢測具有高污染風(fēng)險，凡接觸過對照溶液、標準工作液、陽性質(zhì)控樣品的檢測器具器皿都要嚴格區(qū)分；試液的均質(zhì)、轉(zhuǎn)移、濃縮等過程應(yīng)動作輕緩、謹慎操作，避免因噴濺與暴沸引起損失或污染；對于檢測儀器除了要保持良好的性能狀態(tài)，同樣要避免發(fā)生污染（如pH計電極、色譜儀器的進樣針），應(yīng)執(zhí)行《獸藥殘留實驗室質(zhì)量控制規(guī)范》規(guī)定的 “儀器進樣程序”。還要特別注意，痕量檢測要與獸藥、飼料等常量檢測區(qū)域嚴格隔離，更不能儀器共用。

3 對試劑與耗材進行篩選

3.1 化學(xué)試劑

由于試劑級別不同、提純和精制工藝差異，化學(xué)試劑中常含有不同種類、不同含量的雜質(zhì)存在。這些雜質(zhì)對常量檢測也許影響不大，但對痕量檢測會產(chǎn)生很大影響；尤其是試劑級別低的試劑，雜質(zhì)含量多、紫外吸收強，不僅提高基線噪聲降低檢測靈敏度，還會干擾檢測主峰。含有強極性物質(zhì)或固體微粒時，能吸附、締合色譜柱填料，引起柱分離性能變異，造成色譜峰峰形擴展、拖尾或雙峰等，甚至?xí)枞^、柱篩板和色譜系統(tǒng)設(shè)計很細的管路系統(tǒng)，引起柱壓升高或儀器損壞。

3.2 檢測耗材

隨著藥物殘留檢測工作的普遍開展，商品化的塑料離心管、滴管、槍頭、濾膜等耗材得到大量運用。然而，這類耗材品種繁多、性質(zhì)各異，穩(wěn)定性不強，并在檢測中還要時常遭受甲醇、丙酮、烷烴等多種有機溶劑的浸泡，酸堿作用、含鹽流動相的腐蝕，及光照、溫度、高速離心力的影響，難免會產(chǎn)生對檢測有干擾的物質(zhì)；許多增塑劑、抗氧化劑在高溫或酸性條件下釋放有機質(zhì)，在甲醇、乙醇等試劑中溶解，影響檢測結(jié)果；尼龍、橡膠等高分子材料化學(xué)還原改性后具有靜電作用，可對某些檢測成分產(chǎn)生吸附。

因此，在檢驗時要對所用試劑和耗材仔細篩選、驗證，保證每次檢測使用合格的材料。對于對檢測結(jié)果有顯著影響的試劑耗材、標準物質(zhì)、固相萃取柱等關(guān)鍵材料，要通過反復(fù)實驗固定品牌、來源渠道和供應(yīng)商，變更時需重新驗證。

4 固相萃取柱

陽性添加回收率用來衡量殘留檢測的準確度，并常用于實驗室質(zhì)控?；厥章室话阋?guī)定應(yīng)為80%～110%或60%～120%，其結(jié)果受多種因素影響，其中影響最大的是固相萃取柱。

畜禽樣品的固相萃取過程較為復(fù)雜，萃取效率取決于藥物性質(zhì)、樣品基質(zhì)和固相萃取柱填料3者之間的相互作用。在給定檢測標準前兩者確定的情況下，固相萃取柱的優(yōu)選很關(guān)鍵，關(guān)系著萃取效率的優(yōu)劣，關(guān)系回收率的好壞。通過重新調(diào)整方法、優(yōu)化萃取液比例，也可以得到較好的回收率結(jié)果，但這樣做起來往往很麻煩。

目前市售固相萃取柱的公司很多，各種小柱的填料成分、理化性質(zhì)、加工工藝存在很大差異，同一品牌批次之間也會有差別，如果不加篩選、驗證，隨意買上就用，回收率肯定不佳。

驗證方法是每批購買回來后，要先測試3～6支的柱回收率：以一定量的標準工作液代替試樣溶液測定回收率，柱回收率達到約90%時符合要求。如果柱回收率本身不高，再扣除其他步驟的損失，檢測樣品的回收率很難達到標準要求。

5 標準物質(zhì)要進行純度折算

獸藥殘留檢測涉及的藥物多種多樣，包括常用獸藥，也包括不常用獸藥、淘汰獸藥和違禁藥物，還包括一些農(nóng)藥、人用藥和非藥物成分（如三聚氰胺），有時還需檢測藥物代謝產(chǎn)物、同系物和同分異構(gòu)體等[1]，這給標準物質(zhì)的獲得帶來困難。有的藥物結(jié)構(gòu)復(fù)雜，量產(chǎn)困難，很難購得；有的藥物不穩(wěn)定，只能以鹽的形式存在；還有的藥物含結(jié)晶水或其他成分，與要求的檢測形式不一致，要想得到像普通化學(xué)檢驗?zāi)菢拥幕鶞饰镔|(zhì)很不現(xiàn)實。好在獸藥殘留屬于限量判定，實驗精密度要求不太高，在保證量值溯源、實驗室驗證的前提下，可以使用純度較高、主藥成分相同的同類標準物質(zhì)代替[2]。但要注意，應(yīng)根據(jù)檢測成分來選擇適合的標準物質(zhì)，化學(xué)成分應(yīng)與檢測藥物相同，不一致時必須進行純度折算，否則會造成標準溶液濃度偏高。

多數(shù)對照品標明化學(xué)純度，可以直接代入計算；有的含有少量水分和雜質(zhì)，要根據(jù)有證標準物質(zhì)信息或說明書規(guī)定的方法扣除；含結(jié)晶水、鹽基或特殊基團時，應(yīng)查閱分子量信息和分子結(jié)構(gòu)式，將其換算為檢測成分的純度。如檢測環(huán)丙沙星（分子式C17H18FN3O3，分子量331.34），若使用對照品鹽酸環(huán)丙沙星（分子式C17H18FN3O3·HCl，分子量367.80，純度94.0%），其純度應(yīng)折算為復(fù)雜一點的還要考慮藥物的分子結(jié)構(gòu)，如測定內(nèi)酰胺類中的青霉素G（分子式C16H18N2O4S，分子量334.39），而可得到的對照品是芐星青霉素G4水合物（分子式C48H56N6O8S2·4H2O，分子量981.18，純度97.2%）； 分析C48H56N6O8S2·4H2O的結(jié)構(gòu)式應(yīng)為 (C16H18N2O4S)2·C16H20N2·4H2O，含兩分子的青霉素G、一分子的N，N-二鄰甲苯基乙二胺和四分子結(jié)晶水，則對照品實際純度應(yīng)為97.2%×