周迎春，姜太玲，熊賢坤，劉光華

（云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶亞熱帶經(jīng)濟(jì)作物研究所，云南保山 678000）

0 引言

高效液相色譜法（High pressure liquid chromatography，HPLC） 是在原有的液相柱層析基礎(chǔ)上，引入氣相色譜理論，并加以改進(jìn)和發(fā)展起來(lái)的。該方法不僅分離速度快、檢測(cè)效率高，而且自動(dòng)化程度達(dá)到了氣相色譜法的水平，同時(shí)又保持了液相色譜法對(duì)試樣適用范圍廣、流動(dòng)相改變靈活性大和便于大量制備的優(yōu)點(diǎn)。高效液相色譜法由于兼?zhèn)湟合嗪蜌庀?種色譜分析方法的優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)在食品檢測(cè)上得以應(yīng)用并飛速發(fā)展。

農(nóng)藥殘留（Pesticide residue）是指在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中施用農(nóng)藥后一部分農(nóng)藥直接或間接殘存于谷物、蔬菜、果品、畜產(chǎn)品、水產(chǎn)品，以及土壤和水體中的現(xiàn)象。近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高，蔬菜消費(fèi)量逐年增加，已成為一個(gè)潛在的巨大商業(yè)市場(chǎng)，菜農(nóng)為了追求經(jīng)濟(jì)利益，大量使用高毒、高殘留的農(nóng)藥等，這就造成了蔬菜中普遍存在農(nóng)藥殘留超標(biāo)的現(xiàn)象。目前，有機(jī)磷、有機(jī)氯農(nóng)藥在我國(guó)的研究已經(jīng)有了很大進(jìn)展，這2類(lèi)農(nóng)藥在蔬菜中已經(jīng)受到了很大程度的限制。但在蔬菜中仍然有其他農(nóng)藥的存在，如氨基甲酸酯類(lèi)、煙堿類(lèi)、氟蟲(chóng)腈等農(nóng)藥。綜述了HPLC對(duì)蔬菜中以上幾類(lèi)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，以期能為以后的研究提供技術(shù)指導(dǎo)。

1 氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥

氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥自20世紀(jì)60年代以來(lái)進(jìn)入高速發(fā)展時(shí)期，屬于植物源殺蟲(chóng)劑。該類(lèi)農(nóng)藥是以甲酸酯為前體化合物發(fā)展而來(lái)的農(nóng)藥，具有分解快、殘留期短、低毒、高效和選擇性強(qiáng)的特點(diǎn)，主要用于糧食、蔬菜和水果等農(nóng)產(chǎn)品。近年來(lái)，隨著氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥在蔬菜栽培中的大量使用，容易導(dǎo)致在蔬菜中的殘留，給蔬菜生產(chǎn)帶來(lái)了新的質(zhì)量問(wèn)題。關(guān)于食品中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的分析國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道，檢測(cè)方法主要有氣相色譜法（GC）[1]、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）[2]、高效液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）[3]等。這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，由于氨基甲酸酯類(lèi)化合物極性強(qiáng)、熱穩(wěn)定性較差，使用GC或GC-MS檢測(cè)時(shí)常需采用特殊的技術(shù)或手段以達(dá)到準(zhǔn)確測(cè)定的目的，方法復(fù)雜[4]。HPLC檢測(cè)氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留具有選擇性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。

龔久平等人[5]在現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，改變定容溶液和流動(dòng)相溶劑梯度的時(shí)間和比例，采用帶熒光檢測(cè)器（FLD）和柱后衍生系統(tǒng)的高效液相色譜儀對(duì)蔬菜中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥進(jìn)行測(cè)定，用外標(biāo)法定量分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)為0.998 5～0.999 4，平均回收率為93.6%～100.9%，保留時(shí)間提前8.5 min。該方法分析快速、分離效果好、回收率與靈敏度高，是一種理想的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法。邵金良等人[6]建立了固相萃取-高效液相色譜柱后衍生熒光檢測(cè)蔬菜中8種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的分析方法。8種農(nóng)藥在0.1～1.0 mg/L的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 43～0.999 92，檢出限為 0.008～0.010 mg/kg。此方法適用于大白菜、辣椒、茄子中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。胡建英等人[7]用高效液相色譜-柱后衍生、熒光光度法，采用柱溫42℃，氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥分析專(zhuān)用柱，以梯度淋洗流動(dòng)相分離，最終得出了7種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥方法的定量限為0.003 mg/kg，線性范圍0.005～1.000 mg/L，相關(guān)系數(shù)均在0.999以上，回收率67%～95%。該方法靈敏度高、重現(xiàn)性好、檢測(cè)限低，完全能夠滿(mǎn)足不同品種蔬菜中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)。

2 煙堿類(lèi)農(nóng)藥

煙堿類(lèi)農(nóng)藥是一類(lèi)新型高效、低毒、內(nèi)吸性強(qiáng)、殘效期長(zhǎng)、殘留量低的廣譜性殺蟲(chóng)劑，在市場(chǎng)上占有很高的份額，年銷(xiāo)售額達(dá)到60億歐元，居于所有殺蟲(chóng)劑首位，目前在世界農(nóng)藥市場(chǎng)的銷(xiāo)售量超過(guò)了氨基甲酸酯類(lèi)。煙堿類(lèi)農(nóng)藥包括吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)脒、噻蟲(chóng)啉、噻蟲(chóng)嗪、噻蟲(chóng)胺、呋蟲(chóng)胺及烯啶蟲(chóng)胺等,其中吡蟲(chóng)啉具有高效、低毒、廣譜、內(nèi)吸性強(qiáng)、持效期長(zhǎng)等特點(diǎn)，是世界上銷(xiāo)售量最大的殺蟲(chóng)劑品種。啶蟲(chóng)脒（Ac-etamipyrid）則是煙堿類(lèi)廣譜殺蟲(chóng)劑的代表。多種農(nóng)藥殘留的同時(shí)測(cè)定多采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MC） 法和高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLCMC）法。而熱不穩(wěn)定、強(qiáng)極性和難揮發(fā)的農(nóng)藥（如吡蟲(chóng)啉）則不適宜用GC-MC分析。

侯如燕等人[8]將樣品采用乙腈提取，經(jīng)固相萃取柱凈化，使用反相高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)。在黃瓜空白基質(zhì)中0.1～1.0 mg/kg的加標(biāo)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)脒2種農(nóng)藥的回收率為50.8%～108.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） 小于15%，該方法可滿(mǎn)足蔬菜中煙堿類(lèi)農(nóng)藥多殘留分析的要求。蘭珊珊等人[9]通過(guò)乙腈提取，LC-NH2柱凈化，C18柱分離，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm，吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)脒2種農(nóng)藥的線性關(guān)系在0.2～10.0 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)良好，檢出限在0.01～0.04 mg/kg，平均加標(biāo)回收率在80.1%～103.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） 在0.17%～7.80%。該方法具有快速、靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性較好的特點(diǎn)，適合于日常大批量樣品的測(cè)定。張雪輝等人[10]建立了一種氨基小柱固相萃取，高效液相色譜-紫外檢測(cè)器檢測(cè)蔬菜中吡蟲(chóng)啉農(nóng)藥殘留的方法，柱溫30.0℃，檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm，流動(dòng)相：甲醇∶水∶乙腈=55∶25∶20（體積比），流速0.8 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。吡蟲(chóng)啉在0.1～1.0 mg/L的添加范圍內(nèi)線性良好，線性關(guān)系系數(shù)（R2）為0.992 5。

3 氟蟲(chóng)腈農(nóng)藥

氟蟲(chóng)腈（又名氟草煙）是一種新型苯基吡唑類(lèi)高效、廣譜殺蟲(chóng)劑，具有胃毒、觸殺和一定的內(nèi)吸作用，用于防治蔬菜等多種作物害蟲(chóng)。近年來(lái)，歐盟、日本等國(guó)家和地區(qū)對(duì)氟蟲(chóng)腈提出了殘留檢測(cè)要求，多采用GC和GC-MS法對(duì)氟蟲(chóng)腈進(jìn)行分析。這些方法需要進(jìn)行甲酯化衍生，需嚴(yán)格控制酯化時(shí)間和酯化溫度；而采用高效液相色譜法則有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。

房超等人[11]使樣品以丙酮振蕩提取，通過(guò)調(diào)節(jié)試液至不同pH值對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行凈化和分離，以石油醚去除雜質(zhì)，二氯甲烷萃取濃縮后用HPLC測(cè)定。試驗(yàn)表明，在蔬菜樣品中添加0.05～0.20 mg/kg氟蟲(chóng)腈回收率分別在73.8%～89.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.57%～14.4%（n=5），氟蟲(chóng)腈在樣品中的定量限為0.045 mg/kg。張?jiān)粕热薣12]使用紫外檢測(cè)器、Hypersil ODS2柱，以乙腈+甲醇+水為流動(dòng)相（體積比為30∶40∶30），對(duì)氟蟲(chóng)腈的分析可取得滿(mǎn)意的效果。該法線性范圍是0.02～0.60 mg/mL，最低檢測(cè)限為8.0×10-8mg/mL。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，HPLC是吸納了經(jīng)典液相色譜法和氣相色譜法的優(yōu)點(diǎn)進(jìn)行改進(jìn)和發(fā)展起來(lái)的現(xiàn)代分析方法，以其分辨率、靈敏度及定量精度高等特點(diǎn)，已廣泛地用于蔬菜中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。所有試驗(yàn)均表明，在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中，高效液相色譜法是一種高效能、高靈敏度、高準(zhǔn)確度、操作簡(jiǎn)便的分析方法。隨著技術(shù)的不斷完善和發(fā)展，高效液相色譜必將在食品檢測(cè)與分析領(lǐng)域有更廣闊的發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1]惠衛(wèi)甲，岳田利，袁亞宏，等.蘋(píng)果汁中擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥輻照降解 [J].農(nóng)業(yè)機(jī)械學(xué)報(bào)，2009，40 （4）：121-124.

[2]楊元，高玲，景露，等.SPE-GC/MS法測(cè)定水中有機(jī)磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥 [J].中國(guó)測(cè)試，2009，35（2）：86-89.

[3]羅惠明，梁希揚(yáng).蔬菜、水果中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗(yàn)方法 [J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)，2008（5）：26-29.

[4]趙穎，潘偉，金雁，等.UPLC-MS/MS同時(shí)測(cè)定蔬菜中19種氨基甲酸酯類(lèi)藥物殘留 [J].現(xiàn)代儀器，2009（4）：57-60，65.

[5]龔久平，李燕，洪云菊，等.高效液相色譜法測(cè)定蔬菜中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留方法優(yōu)化 [J].西南農(nóng)業(yè)報(bào)，2009，22 （5）：1 332-1 335.

[6]邵金良，黎其萬(wàn)，劉宏程，等.高效液相色譜法測(cè)定蔬菜中8種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留 [J].現(xiàn)代食品科技，2011，27（7）：856-862.

[7]胡建英，楊緋，高貴桃，等.高效液相色譜－柱后衍生熒光光度法測(cè)定蔬菜中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留量 [J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2012，34（7）：623-627.

[8]侯如燕，蔡薈梅，張正竹，等.液相色譜法檢測(cè)水果蔬菜中的煙堿類(lèi)農(nóng)藥殘留 [J].分析試驗(yàn)室，2012，29（2）：59-63.

[9]蘭珊珊，劉宏程，黎其萬(wàn)，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蔬菜和水果中8種農(nóng)藥殘留 [J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27（2）：171-174.

[10]張雪輝，杜雨倩，徐芳，等.高效液相色譜法檢測(cè)蔬菜中的吡蟲(chóng)啉殘留 [J].現(xiàn)代食品技，2012，28（4）：466-468.

[11]房超，易海華，倪忠，等.高效液相色譜法測(cè)定蔬菜中氟草煙殘留 [J].廣州化工，2010，38（12）：194-195.

[12]張?jiān)粕?，李志?高效液相色譜法測(cè)定氟蟲(chóng)腈 [J].河北省科學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，27（2）：40-42.◇