張艷

【摘要】目的 考察校正因子法測定血塞通片中5個主要皂苷類成分含量的可行性和技術(shù)適應(yīng)性。

方法 血塞通片中，以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd的含量為依據(jù)，相同色譜條件下，考察不同儀器的相對保留時間、相對校正因子；比較校正因子法與外標(biāo)法測定的結(jié)果，驗證校正因子法的準(zhǔn)確性和可行性。結(jié)果 校正因子法與外標(biāo)測定結(jié)果無顯著差異，血塞通片可以采用校正因子法來定量分析其中主要皂苷類成分的含量。結(jié)論 以校正因子法測定血塞通片中皂苷類主要成分含量是可行的、準(zhǔn)確的。

【關(guān)鍵詞】校正因子；HPLC；血塞通片

【中圖分類號】R259 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】ISSN.2095-6681.2018.33..03

血塞通片由三七總皂苷加適量輔料制成，用于活血祛瘀，通脈活絡(luò)，抑制血小板聚集和增加腦血流量。用于腦路瘀阻，中風(fēng)偏癱，心脈瘀阻，胸痹心痛；腦血管病后遺癥，冠心病、心絞痛屬上述癥候者[1]。三七總皂苷含有人參皂昔Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh，三七皂昔Rl、R2、R3、R4、R6等20多種皂苷成分[2]，其中以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd含量最高。現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)基本都是用三七總皂苷標(biāo)準(zhǔn)品為對照品，利用5%香蘭醛冰醋酸溶液、高氯酸與其顯色后測定吸光度的方法[3]，測定樣品中三七總皂苷的含量，實驗過程復(fù)雜，準(zhǔn)確度沒有HPLC法高。本試驗用高效液相色譜，利用校正因子法[4]，同時測定血塞通片中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd的含量，為血塞通片的質(zhì)量控制建立一種高效準(zhǔn)確的檢測方法。

1 儀器與試藥

儀器：戴安U3000高效液相色譜儀；安捷倫Agilent 1260高效液相色譜儀；XS205型電子分析天平（瑞士METTLER TOLEDO）。

試藥：三七皂苷R1（中檢院，批號：110745-201318）；人參皂苷Rg1（中檢院，批號：110703-201731）；人參皂苷Re（中檢所，批號：110754-201626）；人參皂苷Rb1（中檢所，批號：110704-201424）；人參皂苷Rd（中檢所，批號：111818-201302）。

樣品：分別由A、B、C、D、E五家企業(yè)生產(chǎn)。

試劑：甲醇、乙腈（色譜純，江蘇漢邦科技有限公司）

2 方法與結(jié)果

2.1 一般方法學(xué)考察

2.1.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性

Welch Ultimate PG-C18（250 mm×4.60 mm，5 ?m）和Phenomenex Gemini-NX，C18（250 mm×4.60 mm，

5 ?m）；檢測波長：203 nm；流動相：乙腈-水（按表1梯度洗脫，）；柱溫35℃，流速1.2 ml/min。見表1。

2.1.2 對照品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取適量三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd對照品，加適量甲醇溶解，制成濃度為0.15 mg/mL的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備

取血塞通片樣品，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于三七總皂苷25 mg），置50 mL量瓶中，加入甲醇適量，超聲30 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 線性試驗

精密吸取三七皂苷R1等上述五種皂苷的對照品溶液，按照2.1.1項下的色譜條件分別進(jìn)樣0.5 ?L、1 ?L、2 ?L、5 ?L、10 ?L、20 ?L，25 ?L記錄峰面積。以含量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程分別為三七皂苷R1：Y=244.33x+2.149，R2=0.9998；人參皂苷Rg1：Y=367.32x-5.2452，R2=0.9999；人參皂苷Re：Y=300.08x-4.0476，R2=1；人參皂苷Rb1：Y=254.65x-2.9866，R2=1；人參皂苷Rd：Y=288.28x-49994，R2=0.9999。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd分別在0.0893～4.465 ?g、0.0807～4.115 ?g、0.0774～3.872 ?g、0.0836～4.181 ?g、0.0817～4.086 ?g的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5 精密度試驗

精密吸取三七皂苷R1等上述五種皂苷的對照品溶液，按2.1.1項下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 ?L，記錄峰面積，計算得到峰面積的RSD分別為0.5%、0.2%、0.3%、0.2%、0.4%。結(jié)果表明儀器精密度符合實驗要求。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取三七皂苷R1等上述五種皂苷的對照品溶液，按2.1.1項下的色譜條件，在0、1、6、8、12、24、48、72 h

分別進(jìn)樣，每次10 ?l，記錄峰面積，計算得到峰面積的RSD分別為0.11%、0.14%、0.27%、0.10%、0.15%。結(jié)果表明五種對照品溶液在72 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.7 加樣回收率試驗

稱取樣品A粉末0.1 g，置50 mL量瓶中，加甲醇適量，分別精密加入三七皂苷R1等上述五種皂苷的對照品各適量，超聲30 min，加甲醇至刻度，搖勻，取續(xù)濾液。按照2.1.1項下的色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，平行操作6份。計算得到五者的加樣回收率，三七皂苷R1：99.5%、100.2%、100.2%、97.5%、99.6%、99.3%、平均99.4%，RSD%為1.0%；人參皂苷Re：99.1%、98.7%、97.5%、99.1%、99.1%、100.0%、平均98.9%，RSD%為0.9%；人參皂苷Rg1：97.9%、100.2%、100.6%、99.5%、99.7%、98.9%、平均99.4%，RSD%為1.0%；人參皂苷Rb1：97.5%、100.0%、97.3%、100.3%、100.2%、100.4%、平均99.3%，RSD%為1.8%；人參皂苷Rd：99.4%、98.3%、101.8%、100.5%、100.7%、97.6%、平均99.7%，RSD%為1.6%。結(jié)果可以看出加樣回收率試驗符合要求。

2.2 校正因子的重復(fù)性考察

2.2.1 高效液相色譜儀的考察

取2.1.2項下的對照品溶液，選擇不同的色譜系統(tǒng)，按2.1.1項下的色譜條件分別進(jìn)樣2、5、10、20、25 ?l測定，以人參皂苷Rg1為內(nèi)標(biāo)，計算校正因子，見表2。

2.2.2 待測組分色譜峰的定位

取對照品溶液、樣品A～E，按2.1.3項下的方法處理，分別選擇不同的高效液相色譜儀按2.1.1項下的色譜條件進(jìn)樣，以人參皂苷Rg1為內(nèi)標(biāo)，記錄各色譜峰的保留時間。計算相對保留時間見表3。由結(jié)果可以看出，利用相對保留時間來定位峰是可行的。

2.3 校正因子法與外標(biāo)法結(jié)果比較分析

取樣品A～E5個樣品，按2.1.3項下的方法處理，按2.1.1項下的色譜條件進(jìn)樣。采用校正因子法和外標(biāo)法計算樣品中四種皂苷的含量，結(jié)果見表4、5。對四種皂苷不同方法、不同儀器所測得的結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果無顯著性差異，表明校正因子法是切實可行的。

3 討 論

參考文獻(xiàn)[5]，確定測定波長為203 nm，選用乙腈-水梯度洗脫系統(tǒng)進(jìn)行試驗峰形良好，人參皂苷Rg1與人參皂苷Re的分離度符合有關(guān)技術(shù)要求。

以相對保留時間來進(jìn)行色譜峰的定位，考察了Agilent 1260和戴安U3000兩種不同高效液相色譜系統(tǒng)的影響，建立了校正因子法測定血塞通片中皂苷類成分的檢測方法，比較校正因子法和外標(biāo)法測定含量結(jié)果的差別。結(jié)果表明，校正因子法與外標(biāo)法得到的含量值之間沒有顯著性差異，說明采用校正因子法測定血塞通片中皂苷類成分的方法是可行的。

利用校正因子的方法測定血塞通片中5種皂苷的含量，在原有標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上提高了檢測的準(zhǔn)確性，校正因子的運用還可以大大節(jié)約檢驗成本。

參考文獻(xiàn)

[1] 袁忞敏.血塞通片不能完全替代原藥材三七[J].中國醫(yī)藥指南.2012.10（36）：579-580.

[2] 蘇 靜，朱衛(wèi)泉.RP-HPLC梯度洗脫法測定血塞通片中三七皂皂Rl、人參皂苷Rbl及人參皂苷Rgl的含量[J].2005.25（2）.

[3] WS3-B-3207-98，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).中藥成方制劑（第17冊）[S].

[4] 袁曉芳，張 舒.校正因子法測定香連丸中生物堿的含量[J].今日藥學(xué).2014.24（12）：875-878.

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M]，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：11-12.

本文編輯：劉欣悅