康鵬天

甘肅省水產(chǎn)養(yǎng)殖類型較多，包括池塘、流水、河壩、水庫、山溪等，每年可生產(chǎn)成魚1.5萬噸以上，但是隨著養(yǎng)殖規(guī)模的增大，養(yǎng)殖技術(shù)的提高，漁業(yè)病害成為漁業(yè)發(fā)展和生產(chǎn)中重要的一部分，也是造成危害和損失最嚴(yán)重的一個因素。一旦發(fā)生漁業(yè)病害，就會造成不同程度的經(jīng)濟(jì)損失，阻礙漁業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。我省漁業(yè)病害中寄生蟲為易發(fā)、常發(fā)疫病，也是容易診斷的疫病，筆者根據(jù)多年經(jīng)驗和查閱相關(guān)資料，總結(jié)出了我省魚類常見寄生蟲性疫病診斷技術(shù)，可以直接指導(dǎo)基層漁業(yè)技術(shù)推廣部門、養(yǎng)殖戶自行診斷，及時發(fā)現(xiàn)寄生蟲魚病并有效治療。

1.診斷材料及要求

1.1 材料和試劑

1.1.1 材料

普通光學(xué)顯微鏡、雙筒解剖鏡、放大鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、手術(shù)刀、手術(shù)剪、解剖針、吸水紙、培養(yǎng)皿、滴管、解剖盤等。

1.1.2 試劑

0.85%生理鹽水、30‰人工配制海水、4%～5%和10%的福爾馬林、70%酒精、硝酸銀、甘油膠胨、肖氏液、聚乙烯醇。

配置試劑用水應(yīng)符合GB/T 6682-2008的要求。

1.2 采樣量

用于檢查診斷的魚應(yīng)有一定數(shù)量，檢查時采集的樣品至少5～10尾。也可按照OIE《水生動物疾病診斷手冊》的采樣方法進(jìn)行采樣。

1.3 樣品及運(yùn)輸

用于實驗室檢查的病魚應(yīng)是活體，運(yùn)輸時應(yīng)在采集的病魚中加注原池水進(jìn)行活體運(yùn)輸。每個容器只裝運(yùn)同一種病魚送至實驗室。運(yùn)輸過程中應(yīng)采取充氧、降溫等措施。

1.4 病原體記數(shù)

按不同感染部位采集組織，進(jìn)行觀察。記錄顯微鏡檢查時的倍數(shù)和該倍數(shù)下的蟲體數(shù)量。孢囊用數(shù)字說明，蟲體數(shù)為同一玻片中3個視野的平均數(shù)。

2.車輪蟲病

2.1 現(xiàn)場樣品目檢

檢查魚體。病魚魚體發(fā)黑，失去光澤，食欲不振，離群獨游或成群圍繞池邊狂游，魚苗可出現(xiàn)“白頭白嘴”或“跑馬”（環(huán)游不止）癥狀。當(dāng)寄生數(shù)量少時宿主魚不顯癥狀，但大量寄生時，鰓絲上有大量黏液分泌，形成一層黏液層，根據(jù)上述的癥狀可以初步確診。

2.2 實驗室檢測

2.2.1 體表

用解剖刀刮取體表少許黏液，置于載玻片上，滴一滴清潔水，用鑷子將組織黏液分散，蓋上蓋玻片，用拇指輕輕壓片制成水封片，在顯微鏡（10×10以上鏡頭）下檢查。

2.2.2 鰭

剪下各鰭，置于載玻片上，滴一滴清潔水，顯微鏡（10×10以上鏡頭）下檢查。

2.2.3 鰓

鰓絲黏液較多時，用解剖刀刮取少許黏液，置于載玻片上，滴一滴清潔水，用鑷子將組織黏液分散，蓋上蓋玻片，用拇指輕輕壓片制成水封片，在顯微鏡（10×10以上鏡頭）下檢查。

鰓絲黏液較少時，用剪刀將左右兩邊的鰓完整地取出，放在培養(yǎng)皿里（要分開放置），并附上左右標(biāo)記。剪取一小塊鰓組織（應(yīng)從每一邊鰓的第一片鰓片接近兩端的位置剪?。旁谳d玻片上，滴一滴清潔水，蓋上蓋玻片輕壓制成水封片，在顯微鏡（10×10以上鏡頭）下檢查。

2.3 結(jié)果判定

目檢癥狀結(jié)合鏡下觀察，100倍顯微鏡下平均每視野內(nèi)車輪蟲計數(shù)達(dá)到10個及10個以上時，判定為車輪蟲??；車輪蟲計數(shù)不足10個時，判定為車輪蟲感染。

3.斜管蟲病

3.1 現(xiàn)場樣品目檢

檢查魚體。病魚體瘦發(fā)黑，呼吸困難，魚苗有拖泥癥狀。當(dāng)寄生數(shù)量少時宿主魚不顯癥狀，但大量寄生時，皮膚及鰓絲有大量黏液分泌，體表形成蒼白色或淡藍(lán)色的一層黏液層。

3.2 實驗室檢測

診斷時滴加試劑為0.85%生理鹽水，其他步驟同4.2。

3.3 結(jié)果判定

目檢癥狀結(jié)合鏡下觀察，100倍顯微鏡下平均每視野內(nèi)斜管蟲計數(shù)達(dá)到10個及10個以上時，判定為斜管蟲病；斜管蟲計數(shù)不足10個時，判定為斜管蟲感染。

4.小瓜蟲病

4.1 現(xiàn)場樣品目檢

檢查魚體。病魚體色發(fā)黑，消瘦，游動異常，體表或鰓上可見1mm左右的小白點，病情嚴(yán)重時，魚體表伴大量粘液，用鑷子刮下白點或黏液，放在解剖盤上，滴一滴生理鹽水，靜置1～2min，在光亮的地方仔細(xì)觀察，如果見到一個個白色小圓球在慢慢地游動，且大多數(shù)集中在水滴的邊緣，根據(jù)上述的癥狀可以初步確診。

4.2 實驗室檢測

4.2.1 體表

用解剖刀刮取體表兩側(cè)黏液，置于載玻片上，滴一滴生理鹽水，用鑷子將組織黏液分散，蓋上蓋玻片，用拇指輕輕壓片，在顯微鏡或解剖鏡下檢查。

4.2.2 鰭

目檢正常的魚，剪下各鰭，置于載玻片上，滴一滴生理鹽水，解剖鏡下檢查。

目檢魚體各鰭如有潰爛或白點，用鑷子刮取潰爛或白點部位，置于載玻片上，滴一滴生理鹽水，用蓋玻片蓋上輕壓，解剖鏡或顯微鏡下檢查。

4.2.3 鰓

用剪刀將左右兩邊的鰓完整地取出，放在培養(yǎng)皿里（要分開放置），并附上左右標(biāo)記。剪取一小塊鰓組織（應(yīng)從每一邊鰓的第一片鰓片接近兩端的位置剪?。?，放在載玻片上，滴一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片輕壓，在解剖鏡或顯微鏡下檢查。如鰓上肉眼可見白點或孢囊，則用鑷子刮取白點或孢囊，或取整片鰓絲壓片，顯微鏡下檢查。

4.3 結(jié)果判定

目檢癥狀結(jié)合鏡下觀察，40倍顯微鏡下平均每視野內(nèi)小瓜蟲計數(shù)達(dá)到10個及10個以上時，判定為小瓜蟲??；小瓜蟲計數(shù)不足10個時，判定為小瓜蟲感染。

5.刺激隱核蟲病

5.1 現(xiàn)場樣品目檢

滴加試劑為30‰人工配制海水，其他步驟同6.1。

5.2 實驗室檢測

診斷時滴加試劑為30‰人工配制海水，其他步驟同6.2。

5.3 結(jié)果判定

目檢癥狀結(jié)合鏡下觀察，40倍顯微鏡下平均每視野內(nèi)刺激隱核蟲計數(shù)達(dá)到10個及10個以上時，判定為刺激隱核蟲病；刺激隱核蟲計數(shù)不足10個時，判定為刺激隱核蟲感染。

6.粘孢子蟲病

6.1 現(xiàn)場樣品目檢

粘孢子蟲的多數(shù)種類，寄生于魚的體表、鰓、腸道及體腔，都表現(xiàn)出肉眼可見的癥狀，即白點狀或白色的瘤狀孢囊，孢囊形狀和大小不規(guī)則，顏色灰白而不透明。用鑷子取下一個孢囊放在載玻片上，滴一滴生理鹽水，用蓋玻片蓋上輕壓，如孢囊破裂并流出乳白色液體，可初步診斷為粘孢子蟲病。

6.2 實驗室檢測

6.2.1 鏡檢

在400倍顯微鏡下，壓破的孢囊液體中清晰可見孢子，可診斷為粘孢子蟲病。一個孢囊中有成千上萬個孢子蟲。

6.2.2 體表

檢查體表，用解剖刀刮取鱗片下的瘤狀物，置于載玻片上，加一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片輕壓，顯微鏡下檢查。

6.2.3 鰭

檢查方法參見6.2.2，鏡檢倍數(shù)為400倍。

6.2.4 鰓

檢查方法參見6.2.2，鏡檢倍數(shù)為400倍。

6.2.5 體腔

打開魚體腹腔，仔細(xì)觀察顯露出的部位有無可疑病變。如發(fā)現(xiàn)白點，或較大孢囊，有可能是粘孢子蟲寄生。用鑷子刮取白點部位或孢囊置于載玻片上，滴一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片輕壓，見孢囊破裂后，顯微鏡下檢查。

6.2.6 腸道

將腸道外壁上所有脂肪去除干凈，把腸前后伸直擺在解剖盤上。將腸分為前、中、后三段，各取一段，用剪刀從與腸平行的方向剪開一個小小切口，用鑷子從切口上取一小滴內(nèi)容物放在載玻片上，滴一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片輕壓，顯微鏡下檢查，每段同時檢查兩片標(biāo)本。剪開腸道后，如見白點或孢囊附著，直接用解剖刀刮取白點或孢囊于在載玻片上，壓片后，顯微鏡下檢查。

6.3 病原體記數(shù)及結(jié)果判定

6.3.1 病原體記數(shù)

6.3.1.1 計數(shù)符號用“+”表示：“+”表示有；“ ++”表示多；“ +++”表示很多。

6.3.2.1 高倍顯微鏡400倍一個視野下，有1～20個蟲體時記“+”，21～50個蟲體時記“++”，50 個以上的蟲體時記“+++”。

6.3.2 結(jié)果判定

檢出粘孢子蟲則判定為粘孢子蟲病。

7.指環(huán)蟲病

7.1 現(xiàn)場樣品目檢

當(dāng)蟲體大量寄生時，病魚體表可見一層灰白色的黏液，魚體失去光澤，游動極不正常。

7.2 實驗室檢測

該病不會出現(xiàn)白點或孢囊，無須此步檢測。其他步驟參見6.2。

7.3 結(jié)果判定

目檢癥狀結(jié)合鏡下觀察，40倍顯微鏡下平均每視野內(nèi)指環(huán)蟲計數(shù)達(dá)到5個及5個以上時，判定為指環(huán)蟲病；指環(huán)蟲計數(shù)不足5個時，判定為指環(huán)蟲感染。

8.頭槽絳蟲病

8.1 現(xiàn)場樣品目檢

嚴(yán)重感染時，體重減輕，顯得瘦弱，不攝食，體表發(fā)黑，離群水面，口常張開。魚腸前段第一盤曲膨大成胃囊狀，直徑較正常增大3倍，并使腸壁異常擴(kuò)張，形成皺襞萎縮。腸前段伴有慢性炎癥，腸道會出現(xiàn)機(jī)械性堵塞。

8.2 實驗室檢測

8.2.1 解剖

剖開魚腹，剪開前腸擴(kuò)張部位，即可見白色帶狀蟲體聚居。

8.3 結(jié)果判定

檢出頭槽絳蟲則判定為頭槽絳蟲病。

（通聯(lián)：730030，甘肅省漁業(yè)技術(shù)推廣總站 蘭州市中山路113號 電話：13659414531）