王玉梅

1.材料與方法

1.1 原理

樣品中的孔雀石綠、隱色孔雀石綠經(jīng)有機(jī)試劑提取，吸附劑凈化，正己烷除脂后，加入氧化劑將隱色孔雀石綠氧化成為孔雀石綠，經(jīng)濃縮復(fù)溶后，孔雀石綠與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和微孔膜檢測線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與控制線（C線）顏色深淺比較，對樣品中孔雀石綠和隱色孔雀石綠總量進(jìn)行定性判定。

1.2 儀器

移液器：200μL、1mL和5mL

渦旋混合器

離心機(jī)：轉(zhuǎn)速 ≥4000r/min

電子天平：感量分別為0.01mg 和0.01g

氮吹濃縮儀

恒溫水浴鍋

1.3 試劑盒

四年來，一直用的是無錫中德伯爾生物技術(shù)有限公司的孔雀石綠快速檢測試劑盒，開展檢測前，先任意抽取3個檢測卡進(jìn)行性能驗證，驗證檢測卡是否有效。

1.4 孔雀石綠質(zhì)控加標(biāo)液的配制

配制孔雀石綠（無色）標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為2.0μg/mL，溶劑：乙腈，存放于4℃冰箱，避光保存（有效期1年）。

1.5 檢測流程和方法

檢測方法參照試劑盒里的使用說明書

陰性結(jié)果：T線比C線深或一樣深，表示樣本中孔雀石綠濃度低于其檢測限；

陽性結(jié)果：T線比C線淺，表示樣本中孔雀石綠濃度高于其檢測限

1.6 檢測條件

檢測條件見表1。

2.檢測結(jié)果與討論

2.1 檢測結(jié)果見表2

2.2 討論

表1 檢測條件

2.2.1 樣品前處理一定要認(rèn)真。樣品要求新鮮，取脂肪含量較低部位的肌肉，比如魚，要求去皮、去骨，去脂肪，只取背上的一部分肉；蝦要去頭、去殼，取蝦仁，肉取好后要充分粉碎成肉糜狀，否則肉的顆粒太大，在檢測時，與試劑接觸的面較小，不能充分提取、氧化，最后可能會出現(xiàn)假陰性。我們曾做了對照試驗，對同一樣品采取不同的樣品處置方法，一個是肉糜狀，一個加工粗糙，有骨頭，魚肉用剪刀剪后，沒有充分粉碎，顆粒較大，在樣品中直接添加濃度為3.0μg/kg孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測，結(jié)果會出現(xiàn)假陰性。

2.2.2 樣品復(fù)溶再離心后一定要等明顯分層后取下層液體用于檢測，因為如果有違禁藥物的殘留，在經(jīng)過一系列的處理后，會溶解在下層液體中，取上層液體就會檢測不出或出現(xiàn)假陰性的情況。

2.2.3 做檢測前必須對本批次的速測盒進(jìn)行性能驗證，至少抽3個檢測卡用于性能驗證，檢測本批次的速測盒是否有效，是否能檢測出陽性。以免有的速測盒因為存放時間長、保管措施不到位而影響了速測盒的性能。

表2 2013-2016年孔雀石綠檢測結(jié)果

2.2.4 注意檢測時間要求，在樣本提取完后要求在10分鐘內(nèi)進(jìn)行檢測，待檢樣品溶液在酶標(biāo)孔中完全溶解，等待反應(yīng)時間10分鐘，最后判讀檢測卡反應(yīng)的時間5～8分鐘，所有的檢測要求在規(guī)定時間內(nèi)完成。

2.2.5 出現(xiàn)假陽性的原因。2013年以來，共有5個樣品檢測結(jié)果疑似陽性，后來把疑似陽性的留樣送至省水產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心重新定量檢測，只有1個是陽性，其余是陰性。其原因可能是兩個方面：一是出現(xiàn)了交叉反應(yīng)，可能試劑盒里的抗原抗體的特異性太差；二是樣品里含有與孔雀石綠分子結(jié)構(gòu)差不多的物質(zhì)，該物質(zhì)與試劑盒內(nèi)的抗原抗體先發(fā)生反應(yīng)而出現(xiàn)假陽性的現(xiàn)象。

（通聯(lián)：226500，江蘇省如皋市如城鎮(zhèn)解放路動植物檢測中心三樓）