蔡迪鳴

（葫蘆島市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心 遼寧 葫蘆島 125000）

黨參屬于桔?？浦参?，《中國(guó)藥典》數(shù)據(jù)[1]認(rèn)為黨參是黨參、川黨參 或素花黨參三種黨參的干燥根部，味甘性平，其主要產(chǎn)地為陜西、甘肅、湖北、貴州等地，主要功效為潤(rùn)肺生津、補(bǔ)中益氣[2]。黨參的有效成分包括煙酸、黨參炔苷、黨參多糖等。本文圍繞高效液相色譜法測(cè)定黨參中的煙酸與黨參炔苷含量展開研究，取得了較為滿意的結(jié)果，現(xiàn)具體報(bào)告如下。

1.材料與方法

1.1 材料

（1）實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)儀器選用產(chǎn)自沒過沃特世公司的高效液相色譜儀Waters e2695，其中包含Waters 2998 PDA檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、柱溫箱、四元泵。采用產(chǎn)自瑞士梅特勒公司的型號(hào)為AE240的電子天平，其感量為0.01毫克；產(chǎn)自昆山超聲儀器公司的型號(hào)為KQ-252TTB高頻數(shù)控超聲波清洗器；產(chǎn)自蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品公司型號(hào)為HH-D的恒溫水浴鍋；產(chǎn)自南京實(shí)驗(yàn)儀器公司型號(hào)為DGF24-IA的電熱風(fēng)鼓風(fēng)干燥箱。

（2）實(shí)驗(yàn)對(duì)照物（煙酸及黨參炔苷）為產(chǎn)自成都瑞芬思生物科技公司，其批號(hào)分別為D-026-150728、Y-062-150801，純度高于98.0%；乙腈為產(chǎn)自湖北昌泰興業(yè)公的特技色譜純；磷酸為產(chǎn)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司的色譜純。其他實(shí)驗(yàn)所涉及的藥劑均屬于分析純，采用超純水Milli-Q。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 實(shí)驗(yàn)所用色譜柱為Syncronis AQ(250mm×1.5mm，5μm)，流動(dòng)相A為乙腈，B為磷酸水溶液，其比例為32：68，1.0mL/min流速，30℃柱溫，檢測(cè)的紫外線波長(zhǎng)為285nm。實(shí)驗(yàn)參考為黨參炔苷理論塔板，其數(shù)值＞5000。在上述條件下煙酸及黨參炔苷均可到達(dá)基線分離。

1.2.2 對(duì)照物配置方法 量取對(duì)照物煙酸及黨參炔苷適量，分別溶于甲醇溶液中至定容刻度，配置成濃度為480μg/mL、496μg/mL的對(duì)照物儲(chǔ)備液。通過微量加樣槍從對(duì)照物儲(chǔ)備液中各采集1mL放于容量為10mL的容量瓶中，甲醇溶液定容后搖勻，此時(shí)對(duì)照物濃度為48.0μg/mL、49.6μg/mL。再通過微量加樣槍采集2mL放于容量為10mL的容量瓶中，此時(shí)對(duì)照物濃度為96.0μg/mL、99.2μg/mL，保存于-20℃的環(huán)境中。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)品溶液制取 量取實(shí)驗(yàn)測(cè)試品黨參粉末1g，經(jīng)直徑為450μm的孔徑篩后置于具塞三角瓶中，與80mL甲醇混合，密塞稱重，于45℃、40kHz、200W的環(huán)境中超聲提取30min，冷卻后再次稱重，補(bǔ)足損失的甲醇質(zhì)量，搖勻后過濾。精密量取50mL濾液，使其蒸干，所得殘?jiān)尤爰状既芙夂筠D(zhuǎn)移至容積為5mL的容量瓶中，加入甲醇至定標(biāo)后搖勻。經(jīng)直徑為0.45μm的孔徑篩后，取所得濾液為實(shí)驗(yàn)品溶液。

2.結(jié)果

2.1 優(yōu)化提取條件

實(shí)驗(yàn)指標(biāo)為煙酸及黨參炔苷，對(duì)黨參的提取條件進(jìn)行評(píng)估，分別于30℃、45℃、60℃的溫度下進(jìn)行提取，結(jié)果在45℃環(huán)境下效率最高。同時(shí)，對(duì)提取時(shí)間進(jìn)行評(píng)估，分別為30min、60min，結(jié)果差異不著，則選擇了30min。因此，本實(shí)驗(yàn)提取條件定為45℃的純度為100%的甲醇溶液下30min。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)

通過PDA檢測(cè)器對(duì)范圍為210～400nm內(nèi)的波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，分別采集其光譜圖。結(jié)果顯示波長(zhǎng)為285nm時(shí)煙酸及黨參炔苷色譜圖的峰面積均較為理想，因此波長(zhǎng)定為285nm。

2.3 流動(dòng)相

為達(dá)到良好分離的要求，實(shí)驗(yàn)測(cè)試了梯度洗脫及等度洗脫，并分別對(duì)比甲醇-0.2%磷酸水溶液、乙腈-0.2%磷酸水溶液、乙腈-水、乙腈-0.2%甲酸水溶液、乙腈-0.2%乙酸水溶液，結(jié)果顯示乙腈-0.2%磷酸水溶液較為理想，在此流動(dòng)相下基線平穩(wěn)、分離度高，重復(fù)性強(qiáng)。

2.4 線性方程與檢出限

以X（質(zhì)量濃度）為橫坐標(biāo)，Y（峰面積）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算兩者的線性方程等結(jié)果。具體結(jié)果為：煙酸的線性方程、檢出限/（μg/mL）、線性范圍（μg/mL）分別為Y=724.8X+5155.6、0.95、9.5～57.9，黨參炔苷組對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)為Y=15105X+875.9、0.11、9.98～59.8。煙酸及黨參炔苷的線性方程、線性范圍、檢出限均能滿足要求。

2.5 穩(wěn)定性

對(duì)同一樣品進(jìn)行測(cè)定，分別于0、2、4、8、12、24各進(jìn)樣一次，記錄兩者的色譜峰面積，評(píng)定其穩(wěn)定性。煙酸及黨參炔苷的偏差值RSD分別為2.0%、1.1%。具體數(shù)值為：煙酸在0、2、4、8、12、24時(shí)的峰面積值分別為：21240、21743、21168、21373、22135、21629，RSD/%值為2.0；黨參炔苷對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)為：627438、634571 632459、634325、645475、637536、1.1。

3.小結(jié)

煙酸通過緩解因機(jī)體低密度脂蛋白增多、高密度脂蛋白減少帶來的血脂異常，從而可降低冠心病等疾病的發(fā)病率[3]。黨參炔苷的藥理活性包括抗?jié)?、抗氧化，可以激活NF-kB[4]。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了檢測(cè)時(shí)色譜條件、環(huán)境溫度等，所得的煙酸及黨參炔苷的線性方程、線性范圍、檢出限均能滿足要求，且其偏差值RSD分別為2.0%、1.1%。說明HPLC法對(duì)同時(shí)測(cè)定兩者的含量便捷精準(zhǔn)、穩(wěn)定理想，因此對(duì)黨參的質(zhì)量控制有重要的臨床意義。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2015版[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005:199.

[2]陳前鋒，鄧小艷，?；埒P．HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地黨參中黨參炔苷和丁香苷的含量[J].食品工業(yè)科技，2016(6):64-67．

[3]竇武宇，崔治家，侯嘉，等.甘肅不同產(chǎn)地黨參藥材總皂苷含量測(cè)定[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2015，1(6):59-62．

[4]陳慧慧，牛偉霞，李士棟，等．HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地黨參中黨參炔苷的含量[J].食品與藥品，2014，16(1):37-38，39．