張 雪

（本溪市化學工業(yè)學校，遼寧 本溪 117004）

何首烏為廖科植物何首烏干燥的根，是傳統(tǒng)的藥食同源天然植物，具有補肝腎、益精血、烏須發(fā)、強筋骨等功效。現(xiàn)代研究表明，何首烏中的二苯乙烯類是一種植物抗毒素，是何首烏中的有效成分之一，具有顯著的抗衰老、降血脂、抗骨質(zhì)疏松等作用。近年來，國內(nèi)外專家針對何首烏二苯乙烯類成分的提取工藝和含量測定做了大量的研究和應用，并取得了很多有價值的研究成果。在查閱收集大量文獻的基礎上，綜述近幾年來何首烏二苯乙烯類成分的研究進展，旨在為何首烏的開發(fā)利用提供理論參考。

1 何首烏二苯乙烯苷類成分提取工藝

1.1 傳統(tǒng)提取方法

何首烏二苯乙烯苷類成分的傳統(tǒng)提取方法為溶劑提取法，常用介質(zhì)為水、乙醇等，常用方法有煎煮法、滲漉法、回流提取法等。

唐靜等通過響應面法優(yōu)化何首烏二苯乙烯苷類化合物提取工藝。根據(jù)中心組合設計方法，選取溫度、液料比、乙醇體積分數(shù)為自變量，二苯乙烯苷提取率為響應值，利用響應面分析方法得到回歸方程的預測模型。由此確定的二苯乙烯苷提取工藝的最佳條件為：溫度54℃、液料比18∶1、乙醇體積分數(shù)72%，此條件下的提取率達2.75%。

楊勸生等采用高效液相色譜法（HPLC）分析測定何首烏滲漉提取、75℃回流提取、89℃回流提取的提取液中二苯乙烯苷、蒽醌類化合物含量，并考察取液化學成分指紋圖譜相似度及所得干物質(zhì)。結果表明：3種提取方法的二苯乙烯苷、蒽醌類化合物含量基本接近；就蒽醌含量而言，89℃回流提取略高于滲漉提取，75℃回流提取略低于滲漉提??；供試品溶液的特征指紋圖譜與共有模式的相似度均大于0.95，符合國家對藥材指紋圖譜研究的技術要求（大于0.9）。

1.2 現(xiàn)代提取方法

何首烏二苯乙烯苷類成分提取工藝包括超聲波提取法、微波提取法、超臨界CO2萃取法和半仿生提取法等，均具有較好的提取效果。

吳狄等采用超聲波輔助乙醇提取何首烏中的二苯乙烯苷類物質(zhì)，考察乙醇濃度、料液比、提取溫度、提取時間和提取功率對提取率的影響。結果表明，最佳提取工藝條件為：乙醇濃度60%，料液比1∶25，提取溫度65℃，提取時間1.5 h和提取功率800 W。在此條件下，二苯乙烯苷類物質(zhì)的提取率達7.19%。

李敏等以何首烏為原料，采用超臨界CO2萃取技術提取二苯乙烯苷，考察萃取溫度、萃取壓強、萃取時間和料液比等單因素對提取效率的影響，通過正交試驗設計優(yōu)化提取工藝條件。確定最佳工藝參數(shù)為：萃取溫度 55 ℃，萃取壓強 25 MPa，萃取時間 2.5 h，料液比1∶4。在此條件下進行試驗驗證，何首烏中二苯乙烯苷的提取效率達7.08%。

曹聘等以二苯乙烯苷提取率為評價指標，在提取溫度、提取次數(shù)，提取溶劑相同的條件下，考察pH值、提取時間對何首烏半仿生提取效果的影響。用L9（34）正交試驗確定的最佳提取工藝條件為：第1煎液pH 6，第2煎液pH 10，提取時間 2 h。

2 何首中烏二苯乙烯苷含量測定技術

何首烏中的二苯乙烯苷含量的測定方法有高效液相色譜法、紫外光譜法、近紅外光譜法、超高效液相色譜三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜協(xié)同指紋圖譜法等。

2.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法是中藥材有效成分含量測定的常用方法，具有精密度高、分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度高等優(yōu)點。

蘭婷等建立以高效液相法測定何首烏水提液中二苯乙烯苷含量的方法，色譜柱為Agilent Eclipse Plus C18（100 mm×4.6 mm，3.5 μm），柱溫為 25 ℃，流動相為乙腈∶水＝18∶82，流速為 1.0 ml／min，檢測波長為320 nm，進樣量為8 μ。二苯乙烯苷在38～237.5 μg／ml （r＝0.999 4）范圍內(nèi)線性關系良好，回收率為98.32%，RSD＝1.59%。

2.2 紫外光譜法

馮彥欽等用紫外分光光度法和高效液相色譜法測定何首烏中二苯乙烯苷含量，比較兩種方法的準確度。UV法的檢測波長為321.0 nm。HPLC法選用Symmetry C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，以乙腈-水（24.3∶75.7）為流動相，流速 1.0 mL ／min，檢測波長320 nm，柱溫30℃。用UV法測定時，二苯乙烯苷在 5～70μg／mL 范圍內(nèi)線性關系良好 （r＝0.999 8），回收率 98.67%，RSD＝1.17%（n＝6）。 用 HPLC 法測定時，二苯乙烯苷在 20.30～406.40 μg／mL 范圍內(nèi)線性關系良好 （r＝0.999 6）， 回收率為 98.85%，RSD 為 1.71%（n＝6）。對比結果表明，這兩種方法均可作為何首烏中二苯乙烯苷含量測定的方法。

2.3 近紅外光譜法

近紅外光譜是介于可見光和中紅外之間的一種電磁波，波數(shù)范圍為12 500～4 000 cm-1，該區(qū)域的光譜包含豐富的物質(zhì)信息。NIRS是一種物理檢測技術，具有快速、準確、簡便、樣品無損等特點。

賈燦潮等以近紅外光譜（NIRS）法測定何首烏中的 2，3，5，4’-二苯乙烯葡萄糖苷，以 HPLC 法測定何首烏中 2，3，5，4’-二苯乙烯葡萄糖苷的含量，以TQ8.0分析軟件結合化學計量學方法建立何首烏中2，3，5，4’-二苯乙烯葡萄糖苷的近紅外定量分析模型。模型的內(nèi)部交叉驗證決定系數(shù)（R2）為0.996 65，校正均方差 （RMSEC）為 0.068 8，預測均方差（RMSEP） 為 0.074 9， 內(nèi)部交叉驗證均方差（RMSECV）為 0.093 67。

2.4 超高效液相色譜三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法采用多重反應監(jiān)測模式進行定量分析，對目標物質(zhì)做中性碎片掃描，可解決高效液相色譜難以分離復雜體系的問題。此法具有分離效率高、峰容量大及靈敏度高等優(yōu)點。

余意等建立超高效液相色譜三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定不同產(chǎn)地何首烏中10種二苯乙烯苷類成分的方法，比較不同產(chǎn)地何首烏的成分含量差異。采用 ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱 （2.1 mm×100 mm，1.8μm），以 0.1%甲酸水（A）-0.1%甲酸乙腈（B）溶液為流動相梯度洗脫，流速 0.5 m L／min，柱溫 40℃；采用電噴霧離子源負離子檢測，得到相應的提取離子流圖，以峰面積進行定量。何首烏中白藜蘆醇，虎杖苷，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-葡萄糖苷，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2，3-O-二葡萄糖苷，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-葡萄糖基-（1→6）-葡萄糖苷，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-（2″-O-沒食子?；?葡萄糖苷，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-（6″-O-乙酰基）-葡萄糖苷，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-（2″-O-阿魏?；?葡萄糖苷和2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-（2″-O-香豆?；?葡萄糖苷具有良好的線性關系（r均≥0.998 7），平均加樣回收率為 96.5%～06.3%，RSD 均≤3.5%。

2.5 高效液相色譜協(xié)同指紋圖譜法

李燕等采用高效液相色譜儀，在指紋圖譜條件下測定20批何首烏藥材中二苯乙烯苷的含量。選用色用譜柱 Ag-ilent SB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），檢測波長280 nm，流動相乙腈-0.4%磷酸水溶液梯度洗脫，流速 1.0 mL／min，柱溫 25 ℃，分析時間 60 min。經(jīng)精密度、穩(wěn)定性、重復性試驗考察，RSD均小于3%，平均回收率為 100.33%。

3 結語

研究者對何首烏中二苯乙烯苷類成分提取工藝和含量測定做了大量研究。二苯乙烯類成分作為何首烏的主要有效成分，其藥用價值、保健價值和合理應用等需進一步深入研究，以期為何首烏資源的進一步開發(fā)利用提供理論參考。