謝奇+樊鑫梅

【摘要】目的：構(gòu)建強(qiáng)力升白片中沒食子酸的含量測(cè)定方法，以更好控制此產(chǎn)品質(zhì)量。方法：運(yùn)用反相高效液相色譜法，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，ALLTIMA C18為色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm。結(jié)果：當(dāng)食子酸的進(jìn)樣量處于0.040～0.240μg區(qū)間內(nèi)時(shí)，其與峰面積值之間線性關(guān)系較好（r=0.9999）。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）1.96%，平均加樣回收率100.41%。結(jié)論：高效液相色譜法準(zhǔn)確、可靠，且簡(jiǎn)便、易操作，可以用作此產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】強(qiáng)力升白片；高效液相色譜法；沒食子酸；質(zhì)量

【中圖分類號(hào)】R927.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-6851（2017）12-0-02

強(qiáng)力升白片由多種中藥組成，如丹參、黃芪、地榆等，具有活血、益氣等功效，多用于治療由化療、放療等所造成的白細(xì)胞減少，總體效果佳[1]。此產(chǎn)品原為地方品種，當(dāng)將其更改為部頒品種之后，開始以藥方君藥地榆中的沒食子酸作為主要指標(biāo)成分，構(gòu)建了專門用于測(cè)定沒食子酸含量的高效液相色譜（HPLC）法，為更好控制此產(chǎn)品質(zhì)量，提供了準(zhǔn)確、客觀、高效的定量評(píng)價(jià)方法。

1 儀器與試藥

（1）儀器。選用由美國(guó)Waters公司生產(chǎn)的高效液相色譜儀（515型）與紫外檢測(cè)器（2487型）；日本島津生產(chǎn)的紫外可見分光光度計(jì)（UV-2200）；德國(guó)Sartorius公司產(chǎn)的萬分之一電子天平。（2）試藥。選用由中國(guó)藥品生物制品檢定提供的沒食子酸，當(dāng)完成色譜條件的選定及分離后，依據(jù)歸一化法進(jìn)行計(jì)算，得出沒食子酸含量為99.27%，用P2O5干燥器進(jìn)行減壓干燥處理，使其至恒重。所選用乙腈、甲醇，均為色譜純，而諸如磷酸等試劑，則均為分析純，所用水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

（1）色譜條件。色譜柱為ALLTIMA C18，250mm×4.6mm，5μm，柱溫為30℃。流動(dòng)相為0.1%磷酸溶液-乙腈-甲醇，比例為89：6：5；靈敏度為0.01AUFS，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)265nm。（2）確定檢測(cè)波長(zhǎng)。精取適量沒食子酸對(duì)照品，流動(dòng)相稀釋，即2.0μg/ml，設(shè)定流動(dòng)相為空白，于200～600nm波長(zhǎng)區(qū)間內(nèi)，掃描操作。最終結(jié)果得知，波長(zhǎng)為270nm處，Cur吸收最大。（3）制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。取適量對(duì)照品（沒食子酸），甲醇溶解、稀釋，制成儲(chǔ)備液（20.0μg/ml），然后分別精取2.0μl、4.0μl、6.0μl、8.0μl、10.0μl與12.0μl，進(jìn)樣，繪制色譜圖，完成其峰面積測(cè)定工作；然后以峰面積值（A），回歸分析進(jìn)樣量（C），最終可得到回歸線方程，即A= 1.095×103+2.687×106C，r=0.9999。由此可知，沒食子酸進(jìn)樣量處于0.040～0.240μg區(qū)間內(nèi)，其與峰值面積值之間，線性關(guān)系較好。（4）制備供試品溶液。取1g重量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，置入燒瓶，加入25ml濃度為50%的甲醇，稱重，沸水浴中，回流，提取1h，然后置于室溫環(huán)境，再次稱重，用濃度為50%的甲醇，將減失重量補(bǔ)充，濾過處理后，便得。將色譜條件選定之后，對(duì)于沒食子酸中以及其它樣品中的其它組分色譜峰，可以進(jìn)行基線分離，分離度>1.5；依據(jù)沒食子酸峰來進(jìn)行細(xì)致計(jì)算，拖尾因子（T）1.01，理論板數(shù)（N）>3000，此外，精取陰性供試品，將其放置在沒食子酸色譜峰處，未出現(xiàn)色譜峰。（5）精密度試驗(yàn)。精取10μl試品溶液，連續(xù)進(jìn)行5次進(jìn)樣，測(cè)出沒食子酸峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD），即0.73%。由實(shí)驗(yàn)得知，整體精密度較好。（6）穩(wěn)定性試驗(yàn)。精取供試液，分別在0h、2 h、4 h、6 h與8 h時(shí)，進(jìn)樣10μl，得出沒食子酸峰面積值RSD為0.45%。表明，供試液在8h內(nèi)，有著較好的穩(wěn)定性。（7）重復(fù)性試驗(yàn)。依據(jù)上述制定好的含量測(cè)定法，分別取5份同一批次的樣品，依次制備對(duì)應(yīng)的樣品供試液，經(jīng)檢測(cè)得知，沒食子酸含量RSD為0.70%。（8）回收率實(shí)驗(yàn)。分別取已經(jīng)知道含量的樣品（含量為0.2302mg/g），均為0.5g，然后分別將其加入至沒食子酸對(duì)照品溶液中，沒食子酸對(duì)照品溶液劑量分別為100μl、200μl、300μl，添加完畢后，進(jìn)行樣品供試液的精確制備，測(cè)定沒食子酸的含量，最終完成回收率的計(jì)算。（9）測(cè)定樣品。分別對(duì)三批中試樣品（020207、020208、020209）中進(jìn)行沒食子酸含量與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差的測(cè)定，最終結(jié)果得知，020207的沒食子酸含量為0.0230mg/片，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.59%；020208的沒食子酸含量為0.0311mg/片，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.80%；020209的沒食子酸含量為0.0325mg/片，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.55%。

3 討論

有研究[2]分別利用HPLC法、薄層色譜法，對(duì)沒食子酸含量進(jìn)行了測(cè)定。本次研究曾依據(jù)文獻(xiàn)，用甲醇-水-N、甲醇-水，將冰醋酸溶液-二甲基甲酰胺- N作為流動(dòng)相，但最終仍難以較好的對(duì)本品中沒食子酸含量進(jìn)行有效分離與準(zhǔn)確測(cè)定。沒食子當(dāng)中主要為可水解的鞣質(zhì)，通過加熱處理，能夠從中提取沒食子酸，所以，本次試驗(yàn)選用反相高效液相色譜法，來測(cè)定強(qiáng)力升白片中沒食子酸的含量。由本次試驗(yàn)得知，將一定量乙腈-濃度為0.1%磷酸溶液-甲醇作為流動(dòng)相，并對(duì)流動(dòng)相比例、柱溫、流速等色譜條件進(jìn)行適當(dāng)性優(yōu)化，能夠較好的從本品中將沒食子酸峰分離出來，另外，經(jīng)實(shí)驗(yàn)還得知，所構(gòu)建的高效液相色譜測(cè)定方法，在測(cè)定地榆藥材中沒食子酸含量中，同樣適用。用不同提取時(shí)間（0.5h、1 h、1.5 h與2 h）、不同提取方法（超聲或回流）、不同溶劑（50%甲醇、75%甲醇、乙醇、甲醇），提取本品中的沒食子酸。最終結(jié)果得知，1.0g本品，用25ml濃度為50%的甲醇，回流提取1h，有著良好的提取效果。究其原因，因?yàn)榈赜苤械目伤怊焚|(zhì)，具有較差的穩(wěn)定性，若放置較長(zhǎng)時(shí)間，或加熱煮沸，便能分解成沒食子酸，因此，最終選回流提取。由本次實(shí)驗(yàn)整體結(jié)果可知，本方法重現(xiàn)性好，而且準(zhǔn)確、靈活，可用作此產(chǎn)品、地榆藥材中沒食子酸含量的測(cè)定，便于其質(zhì)量控制。

綜上所述，高效液相色譜法準(zhǔn)確、可靠，且簡(jiǎn)便、易操作，可以用作此產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)：

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