□ 楊 旭 山東銀寶食品有限公司

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器與試劑

本實(shí)驗(yàn)過程中所使用儀器包括：免疫磁分離系統(tǒng)（由美國Matrix公司提供），PCR熒光定量分析儀（由美國ABI公司提供）；電子天平；離心管；移液槍。

本實(shí)驗(yàn)過程中所使用試劑包括：金黃色葡萄球菌多克隆抗體（由美國Matrix公司提供）；志賀氏菌多克隆抗體（由美國Matrix公司提供）；超順磁性納米微球（由上海AllMag公司提供）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 免疫磁分離

將金葡萄球菌、志賀氏菌菌懸液1.0 mL劑量加入裝有免疫磁球離心管內(nèi)，室溫狀態(tài)下結(jié)合反應(yīng)30.0 min，利用免疫磁分離系統(tǒng)進(jìn)行分離反應(yīng)30.0 min，洗滌磁球-細(xì)菌重復(fù)3次，加入1.0 mL劑量1×PBS混懸液，以充分分散離心管內(nèi)磁球，取洗滌后上層清液以及最終磁球混懸液200.0 μL劑量，涂布后在36.0 ℃下進(jìn)行培養(yǎng)，維持24.0 h對檢測結(jié)果進(jìn)行觀察。在此基礎(chǔ)之上利用移液槍將經(jīng)處理后免疫磁球轉(zhuǎn)移至免疫磁分離系統(tǒng)磁球吸附磁鐵裝置上，稱取25.0 g劑量鮮豬肉樣本以及225.0 mL劑量NB培養(yǎng)基體系中接種金葡萄球菌、志賀氏菌菌液（菌液均為10倍稀釋），制備為250.0 mL待檢測體系，將體系放置于免疫磁分離系統(tǒng)上，循環(huán)富集反應(yīng)時間為30.0 min，將經(jīng)過上述處理后形成2.0 mL劑量金葡萄球菌、志賀氏菌菌體-磁球復(fù)合物混懸液作為待分析樣本，取200.0 μL劑量涂布后進(jìn)行技術(shù)檢測，剩余混懸液進(jìn)行DNA提取。

1.2.2 核酸提取

在4.0 ℃反應(yīng)條件下取10 000.0 g待分析樣本，離心處理5.0 min后棄上層清液備用，使用金葡萄球菌、志賀氏菌菌基因組相對應(yīng)DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA提取，對核酸純度、核酸濃度進(jìn)行檢測，所提取DNA在-20.0 ℃條件下妥善保存。

表1 金葡萄球菌、志賀氏菌免疫磁球檢測結(jié)果示意表

1.2.3 兩重?zé)晒舛縋CR檢測

將經(jīng)檢驗(yàn)證實(shí)金葡萄球菌以及志賀氏菌陰性鮮豬肉樣本40份劃分為4組，每組內(nèi)設(shè)置1份空白對照樣品，其他樣品分別接種金葡萄球菌以及志賀氏菌，對兩重?zé)晒舛縋CR檢測法下檢測限進(jìn)行測定與分析。CFUg。各組均可準(zhǔn)確檢出所添加標(biāo)準(zhǔn)金葡萄球菌、志賀氏菌菌株，對應(yīng)陰性樣品檢測結(jié)果呈陰性。結(jié)果提示，金葡萄球菌、志賀氏菌在免疫磁分離-兩重?zé)晒舛縋CR法檢測下所對應(yīng)檢測限分別為2.52 CFU/g以及1.36 CFU/g。所有樣品均用于測定金葡萄球菌、志賀氏菌株，檢測靈敏度、特異性以及準(zhǔn)確性均為100%。

3 結(jié)論

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 免疫磁球特異性檢測

表1為金葡萄球菌、志賀氏菌的免疫磁球檢測結(jié)果示意表。結(jié)合表1數(shù)據(jù)可見，金葡萄球菌、志賀氏菌兩種免疫磁球均具有良好特異性。

2.2 檢測限

所選擇4組新鮮豬肉樣本分別接種金葡萄球菌、志賀氏菌，250.0 mL體系中金葡萄球菌終濃度區(qū)間為0.25 CFU/g～2 520.0 CFU/g，志賀氏菌終濃 度 區(qū) 間 為 0.136 CFU/g～1 360.0

本文通過實(shí)驗(yàn)方式利用免疫磁分離-兩重?zé)晒舛縋CR法對鮮豬肉樣本中的金葡萄球菌以及志賀氏菌進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示免疫磁分離-兩重?zé)晒舛縋CR法能夠在6.0 h時間內(nèi)完成對鮮豬肉樣本中金葡萄球菌以及志賀氏菌的檢測，具有檢測過程快速性、檢測結(jié)果靈敏度高、特異性高以及準(zhǔn)確可靠等諸多優(yōu)勢，可作為食品樣本中常見食源性致病菌的常規(guī)檢測方法之一，加以推廣應(yīng)用。

[1]蔡亦紅.PCR快速檢測食品中志賀氏菌方法的建立[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào) ,2008(2)：150-153.