□ 盧 蕊 朱 山 曾慶真 張 乾 菏澤市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院

維生素C是一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的維生素，性狀表現(xiàn)為無(wú)色結(jié)晶，能夠溶于水。維生素具有非常多的效用，能夠有效地防治壞血病，因此也稱作抗壞血酸。維生素有助于激發(fā)巰基酶的活性，并且維持谷胱甘肽的還原狀態(tài)，從而實(shí)現(xiàn)解毒的作用[1]。另外，維生素C能夠?qū)⑷梭w中的膽固醇轉(zhuǎn)變?yōu)槟懼?，降低人體的膽固醇含量，還能夠有效預(yù)防消化性潰瘍等疾病[2]。

綠色蔬菜中維生素C的檢測(cè)方法較多，有滴定法、光度分析法、高效液相色譜法等。目前，最為常見(jiàn)的檢測(cè)方法為滴定法和高效液相色譜法，但是根據(jù)相關(guān)報(bào)道可知，滴定法和高效液相色譜法檢測(cè)維生素C時(shí)，試劑、待測(cè)液的保存以及提取劑的差異會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成極大的影響[3]。本文以綠色蔬菜黃瓜作為材料，采取滴定法和高效液相色譜法對(duì)維生素C進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)條件的設(shè)置以及樣液的保存和提取等進(jìn)行對(duì)比研究，從而為滴定法與高效液相色譜法對(duì)維生素C檢測(cè)的操作和使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑

材料：本次研究選擇2017年7月期間市場(chǎng)出售的黃瓜作為實(shí)驗(yàn)材料。

試劑：抗壞血酸（標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)）、2,6-二氯淀粉鈉鹽（分析純）、碳酸氫鈉（分析純）、草酸（分析純）、偏磷酸（分析純）、醋酸（分析純）、活性炭、甲醇（色譜純）以及超純水。

儀器：國(guó)產(chǎn)電子分析天平、國(guó)產(chǎn)搗碎機(jī)、國(guó)產(chǎn)超聲波清洗儀、國(guó)產(chǎn)恒溫水浴鍋、國(guó)產(chǎn)高速離心機(jī)、國(guó)產(chǎn)過(guò)濾裝置以及美國(guó)產(chǎn)高效液相色譜儀。

1.2 方法

1.2.1 2，6-二氯靛酚鈉滴定法

2，6-DCIP溶液的制備：準(zhǔn)備52 mg的碳酸氫鈉溶于200 mL的沸水中，隨后加入50 mg的2，6-二氯靛酚，在冷卻后進(jìn)行過(guò)濾，2,6-二氯靛酚鈉溶液存于棕色容量瓶中，并且存放于冰箱。

標(biāo)定：在滴定前，用濃度為1 mg/mL的維生素C標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行標(biāo)定。操作時(shí)，在1 mL維生素C中滴入濃度為2%的草酸9 mL，充分均勻后以制備的2,6-DCIP溶液滴定，當(dāng)顏色變?yōu)榧t色且持續(xù)15 s顏色不退時(shí)，記錄下2,6-DCIP溶液的用量，計(jì)算維生素C的量。

樣品測(cè)定：選取待測(cè)樣液10 mL，用制備的2,6-DCIP滴定，當(dāng)顏色變?yōu)榧t色且持續(xù)15 s顏色不變時(shí)，記錄下2,6-DCIP溶液的用量，重復(fù)操作兩次。另外，選擇濃度為2%的草酸10 mL進(jìn)行空白對(duì)照滴定，同樣操作兩次。

維生素C含量的計(jì)算：根據(jù)滴定中2,6-DCIP溶液的用量計(jì)算出維生素C的含量，公式如下。

公式中，VA表示樣品兩次滴定時(shí)，2,6-DCIP溶液使用的平均體積（mL）；VB表示草酸兩次空白滴定時(shí)，2,6-DCIP溶液使用的平均體積（mL）；C是指樣品提取液定容體積（mL）；T值表示每毫升2,6-DCIP對(duì)應(yīng)的維生素C的mg數(shù)；D表示滴定時(shí)樣液的體積（mL）；W表示被測(cè)樣品的質(zhì)量（g）。

1.2.2 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法檢測(cè)的條件為C18（5 μm，4.6 mm× 250 mm）色譜柱、濃度為0.1%草酸作為流動(dòng)相、流速控制在每分鐘1 mL，同時(shí)柱溫控制為30 ℃，檢測(cè)的波長(zhǎng)為254 nm。準(zhǔn)備6份濃度為1 mg/mL的維生素標(biāo)準(zhǔn)液，分別稀釋成濃度為0.025、0.05、0.1、0.15、0.2、0.3 mg/mL的維生素C使用液，分別用HPLC法進(jìn)行檢測(cè)，每次檢測(cè)的樣液容量為20 μL，分別記錄圖譜的峰面積數(shù)據(jù)，計(jì)算維生素C的含量。

2 結(jié)果

2.1 2,6-DCIP法檢測(cè)結(jié)果

2,6-DCIP法檢測(cè)后，黃瓜中每100 g樣品中，維生素C的平均含量為1.03 mg；另外，檢測(cè)的回收率為103.7%。

2.2 HPLC法檢測(cè)結(jié)果

HPLC法檢測(cè)后，黃瓜中每100 g樣品中，維生素C的平均含量為1.06 mg；另外，檢測(cè)的回收率為104.1%。

3 討論

3.1 維生素C含量檢測(cè)方法比較

綠色蔬菜中常用維生素C含量的檢測(cè)方法較多，但是最為常見(jiàn)的主要包括2,6-DCIP法和HPLC法。在本次研究中，采用上述兩種方法對(duì)黃瓜中的維生素C含量進(jìn)行檢測(cè)。兩種檢測(cè)方法結(jié)果均能夠滿足測(cè)定要求，但HPLC法精準(zhǔn)度高于2,6-DCIP法。

3.2 維生素C檢測(cè)方法的優(yōu)化

首先，試劑的存放時(shí)間會(huì)對(duì)維生素C含量檢測(cè)的結(jié)果造成影響，當(dāng)維生素C標(biāo)準(zhǔn)液存放時(shí)間超過(guò)48 h后，維生素C含量降低，因此標(biāo)準(zhǔn)液需要在48 h內(nèi)完成檢測(cè)。另外，2,6-DCIP溶液超過(guò)12 d后，維生素C含量值下降，因此需要在12 d內(nèi)使用。第二，待測(cè)液保存條件會(huì)對(duì)維生素C的結(jié)果造成影響。存放時(shí)間越長(zhǎng)，維生素C含量越低。因此，待測(cè)液制備后要立即測(cè)定，時(shí)間不能夠超過(guò)1.5 h；第三，提取方法對(duì)維生素C含量的影響。草酸的濃度會(huì)影響維生素C的測(cè)定，因此草酸濃度要控制在2%。同時(shí)，超聲波提取和常溫振蕩提取的時(shí)間都要控制，時(shí)間越長(zhǎng)，測(cè)定的含量越低。因此，樣品提取后應(yīng)該快速定容、過(guò)濾，盡快檢測(cè)。

[1]國(guó)增超.果蔬中維生素C含量檢測(cè)方法的述評(píng)[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù),2016(5).

[2]謝軼,蘇冰霞,周鵬.高效液相色譜法測(cè)定不同品種番木瓜果實(shí)中維生素C含量[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué),2016(2).

[3]何保山,張長(zhǎng)輝,左春艷,等.食品中維生素C含量檢測(cè)研究進(jìn)展[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2010(10).