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        芋兒七的成分鑒定及抗氧化作用

        2018-01-12 07:35:02王曉梅王怡捷趙立芳段宇航王金鎖
        化工時刊 2017年7期
        關(guān)鍵詞:鞣質(zhì)超氧水提物

        王曉梅 王怡捷 趙立芳 段宇航 王金鎖

        (寶雞文理學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院,陜西省植物化學(xué)重點實驗室,陜西 寶雞 721013;*西安醫(yī)學(xué)院附屬寶雞醫(yī)院,陜西 寶雞 721000)

        芋兒七,又名魚兒七、獅兒七、佛手七。為百合科延齡草屬植物延齡草TrillimtschonoskiiMaxim.的干燥根和根莖,是著名的太白山“七藥”之一。為多年生草本,生于海拔1300-2200米的山坡林下。性味:甘、辛,溫。功效:補肝腎,強筋骨,止痛,止血,生肌。治療肝腎虛損、腰膝酸軟、關(guān)節(jié)不利、肢體麻木、頭暈、目眩、月經(jīng)不調(diào)、不孕不育、外傷出血等病[1,2]。芋兒七主要在當(dāng)?shù)孛耖g使用,且具有顯著的療效,但對其所含化學(xué)成分及有效部位的研究卻鮮有報道。本實驗運用各種化學(xué)方法對芋兒七的化學(xué)成分進行初步的鑒定,并對芋兒七幾種提取物的抗氧化活性進行探討,以期為太白草藥的開發(fā)利用提供實驗室依據(jù)。

        1 材料、試劑與儀器

        芋兒七(購于眉縣),經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)胡本祥教授鑒定。茚三酮(上海源葉生物公司);α-萘酚(上海鼓臣生物);三羥甲基氨基甲烷(上海探求生物技術(shù)有限公司);鄰苯三酚(南京展云化工有限公司);香草醛(阿拉丁試劑);鹽酸,濃硫酸,酒石酸鉀鈉,無水碳酸鈉,次硝酸鉍,三氯化鐵,三氯化鋁,枸櫞酸,丙酮,醋酸鎂,95%乙醇,無水乙醇,氫氧化鈉,硫酸銅等均為市售分析純。

        ZF-7型暗箱三用紫外線分析儀(上海嘉鵬科技有限公司);UV-1200紫外可見分光光度計(鄭州美譜達儀器有限公司);DK-98-1電熱恒溫水浴鍋(天津泰斯特儀器有限公司);KQ5200E型超聲波清洗器(上海市超聲儀器有限公司)。

        2 實驗方法

        2.1 提取物的制備

        稱取粉碎的芋兒七,分別以水、95%乙醇及乙酸乙酯為溶劑,以質(zhì)體比1∶12浸泡提取芋兒七,超聲提取30 min,靜置后傾出上清液,沉渣再次提取,合并兩次的上清液,經(jīng)濃縮、干燥,研成粉末備用。

        2.2 芋兒七提取物化學(xué)成分的鑒定

        2.2.1氨基酸的鑒定

        取芋兒七提取物溶液1 mL分別于試管中加入1%茚三銅試液2-3滴,加熱煮沸4~5 min,觀察現(xiàn)象。

        2.2.2皂苷的鑒定

        取芋兒七提取物溶液2 mL于帶塞試管中,用力振搖3 min,觀察現(xiàn)象。

        2.2.3糖、多糖或苷類的鑒定

        α-萘酚試驗:取芋兒七提取物溶液1 mL加5%萘酚試液數(shù)滴振搖后,沿管壁滴入5-6滴濃硫酸,觀察現(xiàn)象。

        斐林反應(yīng):取2支試管,加入斐林試劑A和B各1.0 mL搖勻后分別加入取芋兒七提取物,搖勻后置沸水浴中加熱數(shù)分鐘,取出冷卻,觀察現(xiàn)象。

        本尼迪哥特反應(yīng):取芋兒七提取物1 mL于試管中,分別加入本尼迪哥特試劑2 mL置沸水浴中加熱數(shù)分鐘,取出冷卻,觀察各管顏色變化。

        2.2.4鞣質(zhì)及酚類的鑒定

        三氯化鐵試驗:取芋兒七提取物溶液1 mL加1%三氯化鐵試液1~2滴,觀察現(xiàn)象。

        香草醛試驗:取芋兒七提取物溶液點于濾紙上,干后滴加1%香草醛,觀察現(xiàn)象。

        2.2.5黃酮及苷類的鑒定

        鹽酸—鎂粉試驗:取芋兒七提取物溶液1 mL加少量鎂粉后加濃鹽酸4-5滴置沸水浴加熱2-3 min,觀察現(xiàn)象。

        三氯化鋁試驗:取芋兒七提取物溶液點于濾紙上,干后噴霧1%三氯化鋁乙醇試液,在紫外燈下觀察現(xiàn)象。

        硼酸丙酮枸櫞酸丙酮試驗:取芋兒七提取物溶液1 mL在沸水浴上蒸干加入飽和硼酸丙酮溶液及10%枸櫞酸丙酮液各0.5 mL,蒸去丙酮后,在紫外燈下觀察現(xiàn)象。

        堿液試驗:取芋兒七提取物溶液點于濾紙上,干后噴霧1%碳酸鈉,觀察現(xiàn)象。

        2.2.6蒽醌類化合物的鑒定

        Brongtrager’s反應(yīng):取芋兒七提取物適量,加2%氫氧化鈉溶液數(shù)滴觀察顏色變化。

        濃硫酸反應(yīng):取樣品適量,滴加濃硫酸觀察顏色變化。

        2.3 芋兒七提取物對超氧陰離子生成的影響

        取10 mL試管,準(zhǔn)確量取pH 8.2的0.1 mol/L Tris-HCl緩沖液3.6 mL,去離子水3 mL和芋兒七提取物溶液(濃度分別為2 mg/mL,1 mg/mL,0.5 mg/mL,0.25 mg/mL,0.125 mg/mL,0.0625 mg/mL)1 mL,混合均勻,于25 ℃水浴保溫20 min后,立即加入25 ℃預(yù)熱的3 mmol/L鄰苯三酚溶液0.2 mL,反應(yīng)12 min后迅速倒入比色皿中,以0.1 mol/L Tris-HCl緩沖溶液作為參比,在345 nm處測定吸光度,記錄數(shù)據(jù)為A樣品,平行測三組,計算時取均值。以等體積去離子水代替鄰苯三酚溶液以扣除樣品本身的干擾,記錄數(shù)據(jù)為A樣品本體,平行測三組,計算時取均值。另設(shè)不加提取物溶液的空白組,記錄數(shù)據(jù)為A空白,平行測三組,計算時取均值。按下列公式計算抑制率。

        3 結(jié)果與討論

        3.1 芋兒七提取物中成分的鑒定

        在茚三酮實驗中兩種提取物均呈紫色,說明芋兒七醇提物和水提物中含有氨基酸。

        芋兒七醇提物、芋兒七水提物在泡沫實驗中均產(chǎn)生大量持久性的泡沫,說明兩種提取物都含有皂苷類物質(zhì)。

        在α-萘酚試驗中,兩種提取物均出現(xiàn)微紫色環(huán),推斷芋兒七醇提物及水提物都含有糖類。在費林試驗和本尼迪特試驗中醇提物分別呈磚紅色和黃綠色,水提取物均呈黃色,提示芋兒七醇和水提物都含有還原糖。

        在三氯化鐵試驗中,兩種提取物都出現(xiàn)藍綠色,在香草醛試驗中,芋兒七醇提物和水提物均呈現(xiàn)紅色斑點,說明芋兒七醇和水提物都含有酚類和鞣質(zhì)。

        表1 芋兒七提取物中黃酮類的鑒定Table 1 Identification of flavonoids of extractsfrom Trillium tschonoskii Maxim.

        由表1可知在四種實驗條件下,提取物大多發(fā)生陽性反應(yīng),提示兩種提取物中均含有黃酮類物質(zhì)。

        在Brongtrager′s反應(yīng)中,醇和水提物均產(chǎn)生紅色物質(zhì),在濃硫酸反應(yīng)中兩種提取物均呈深棕色,說明兩種提取物均含有蒽醌類物質(zhì)。

        綜上可知,芋兒七中含有氨基酸,皂苷類,糖類,鞣質(zhì)和酚類物質(zhì),黃酮類以及蒽醌類物質(zhì)。

        3.2 芋兒七提取物對超氧陰離子的抑制作用

        圖1 芋兒七提取物對超氧陰離子的抑制作用Fig 1 Inhibition on superoxide anion of extractsfrom Trillium tschonoskii Maxim.

        由圖1可以看出,芋兒七三種提取物對超氧陰離子的生成均有不同程度的抑制作用。其中乙酸乙酯提取物在各濃度均有強的抑制作用,抑制率隨著提取物濃度的增大而增高,抑制率由66.7%增大到82.1%。芋兒七乙醇提取物對超氧陰離子的產(chǎn)生同樣有一定的抑制作用,但各濃度的抑制率均低于相應(yīng)濃度的乙酸乙酯提取物,最大抑制率為66.7 %。水提取物的抑制作用在低濃度時抑制作用很微弱,當(dāng)水提取物濃度大于0.25 mg/mL之后,抑制率急劇增高,水提物濃度為2 mg/mL時,抑制率高達84.6%。

        藥用植物中含有多種成分且具有各種藥理作用。糖類是植物藥中最常見的成分,其中多糖具有各種藥理活性[3,4]。黃酮類在藥用植物中分布很廣,且藥理作用多種多樣[5],如黃芩素可降壓、抑菌、利尿。槲皮素、杜鵑素有祛痰作用。蒽醌苷類大都有瀉下作用,有些可抗菌、抗腫瘤。人參皂苷具有強壯作用,柴胡皂苷有止咳、解熱鎮(zhèn)痛等作用等。鞣質(zhì)是具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的酚類化合物,也是藥用植物中最常見的一類成分,鞣質(zhì)在醫(yī)療上常用于收斂止血、止瀉、抗菌消炎等[6,7]。過氧化物質(zhì)是一類性質(zhì)活潑、具有很強氧化性的物質(zhì),超氧陰離子是生物體細胞在新陳代謝過程中,氧分子受單一電子還原的產(chǎn)物。超氧陰離子若生成過量可造成DNA、蛋白質(zhì)的損傷進而生物功能的異常。

        4 結(jié) 論

        本實驗通過多種實驗方法測得芋兒七中含有氨基酸,皂苷類,糖類,鞣質(zhì)和酚類物質(zhì),黃酮類以及蒽醌類物質(zhì)。通過鄰苯三酚自氧化法,得知芋兒七乙醇提取物,芋兒七乙酸乙酯提取物,芋兒七水提取物對超氧陰離子的生成均有較強的抑制作用,進而可發(fā)揮細胞保護作用。對芋兒七化學(xué)成分及藥理作用的深入研究將在今后的工作中繼續(xù)進行。

        [1] 寶雞市衛(wèi)生局.太白山本草志[M]. 西安:陜西科學(xué)技術(shù)出版社,1987:317~318.

        [2] 陜西省中草藥科研組.陜西中草藥[M]. 西安:陜西省出版社, 2000,40~47.

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