黃秋紅 高禮善 楊曉玲 楊梅 徐文峰 廖曉玲

(1. 納微生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)重慶市工程實(shí)驗(yàn)室， 重慶 401331; 2. 納微復(fù)合材料與器件重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 重慶 401331;3. 重慶科技學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究院， 重慶 401331)

一種靶向蛋白質(zhì)超聲微泡的制備及表征

黃秋紅1，2，3高禮善1，2，3楊曉玲1，2，3楊梅1，2，3徐文峰1，2，3廖曉玲1，2，3

(1. 納微生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)重慶市工程實(shí)驗(yàn)室， 重慶 401331; 2. 納微復(fù)合材料與器件重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 重慶 401331;3. 重慶科技學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究院， 重慶 401331)

以氟碳?xì)怏w為超聲造影劑，通過(guò)接枝納米磁性顆粒-RGD多肽，構(gòu)建靶向蛋白質(zhì)超聲微泡，制備一種可同時(shí)用于超聲造影和磁共振成像(MRI)的雙模態(tài)造影增強(qiáng)劑。通過(guò)顯微鏡對(duì)磁性蛋白超聲微泡形貌進(jìn)行觀察，利用紅外光譜、分光光度法分析納米磁性顆粒接枝牛血清蛋白的接枝率，并通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)磁性蛋白微泡的生物相容性。

超聲微泡； 靶向雙模態(tài)成像； 納米磁性顆粒； RGD多肽

與CT、MRI、光學(xué)成像技術(shù)相比，超聲影像診斷技術(shù)具備無(wú)創(chuàng)、無(wú)輻射、操作簡(jiǎn)便、可反復(fù)應(yīng)用等優(yōu)勢(shì)，在疾病診斷、治療、監(jiān)控方面得到廣泛的應(yīng)用[1-3]。超聲微泡造影劑的研究，帶來(lái)了超聲影像學(xué)領(lǐng)域的第3次技術(shù)革命，其中靶向超聲造影劑，將超聲成像技術(shù)深入到分子成像水平，成為現(xiàn)代超聲分子影像學(xué)的核心與基礎(chǔ)。近年來(lái)，超聲分子探針不僅應(yīng)用于醫(yī)療診斷，還可以在微泡上接枝各種藥物或具有治療效用的基團(tuán)進(jìn)行靶向性給藥，集診斷、治療技術(shù)于一體。通過(guò)設(shè)計(jì)單靶點(diǎn)、多靶點(diǎn)和多模式的超聲分子探針，還可實(shí)現(xiàn)“一探針多模式分子成像”。

研究表明，RGD多肽小分子具有免疫原性低而且化學(xué)穩(wěn)定性較好的性質(zhì)[8]，且含有RGD序列的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白能與細(xì)胞整合素ανβ3受體結(jié)合到超聲微泡造影劑表面，因此常用于腫瘤血管新生標(biāo)志物檢測(cè)[4-7]。用氟碳?xì)怏w制備的超聲造影劑具有穩(wěn)定性良好、粒徑小、靶向準(zhǔn)確、顯影聚集的特點(diǎn)，在治療急性呼吸窘迫綜合癥、急性肺損傷、動(dòng)脈粥樣硬化斑塊、血栓、腫瘤，保護(hù)心肌功能方面得到了應(yīng)用[9-11]。區(qū)文超研究的白蛋白包裹微泡通過(guò)體外培養(yǎng)細(xì)胞，形成了一種基因傳輸方法[12]。也有研究發(fā)現(xiàn)，超聲聯(lián)合白蛋白微泡造影劑實(shí)現(xiàn)了基因轉(zhuǎn)染的靶向性[13]。另外，由于超順磁性納米氧化鐵顆粒具備粒徑小，超順磁性、水溶性好，及靶向效應(yīng)、組織相容性及表面積效應(yīng)明顯的特征，在磁共振成像和藥物載體等方面已有廣泛的應(yīng)用[14-16]。

本次研究采用牛血清蛋白(BSA)、超順磁性納米氧化鐵顆粒、RGD多肽為微泡原材料，利用甘油、PBS溶液混合物為溶劑，以氟碳?xì)怏w為被包裹氣體，制備一種新型靶向超聲微泡造影劑。通過(guò)蛋白質(zhì)超聲微泡與納米磁性RGD粒子的接枝，使該超聲微泡造影劑可同時(shí)應(yīng)用于超聲成像和磁共振成像(MRI)，并實(shí)現(xiàn)多模態(tài)成像。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

主要設(shè)備：YG-100型銀汞膠囊調(diào)和器，Amalgamtor；XD-202數(shù)碼倒置熒光顯微鏡，南京江南永新光學(xué)有限公司；KQ2200B超聲波清洗機(jī)，昆山市超聲儀器有限公司制造；420溫度可控性搖床，美國(guó)Thenmo公司制造；UV755B紫外分光光度計(jì)，上海佑科儀器儀表有限公司制造。

主要試劑：牛血清白蛋白，Biosharp；全氟丙烷，廣東華特氣體股份有限公司生產(chǎn)；納米磁性顆粒，東南大學(xué)顧寧教授實(shí)驗(yàn)室提供；RGD多肽，sigma公司生產(chǎn)；1-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽(阿拉丁)和N-羥基琥珀酰亞胺(阿拉丁)，鄰二氮菲，成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn)；鹽酸羥胺，成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn)；Hela細(xì)胞，大連理工大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程系提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 納米磁性顆粒改性

納米磁性顆粒由東南大學(xué)顧寧教授實(shí)驗(yàn)室提供。將右旋糖酐用硼氫化鈉(NaBH4)還原醛基得到羥基，再將其末端的葡萄糖還原為山梨糖醇；繼續(xù)加入NaOH，部分羥基將被羧基化的還原型右旋糖酐聚葡萄糖山梨醇，最后加入FeCl2、FeCl3、NH3·H2O，即得到以氧化鐵為核心、水化PSC為殼的納米磁性顆粒(見(jiàn)圖1)。此納米磁性顆粒的飽和磁化強(qiáng)度為74 emug，矯頑力為1.069 6G，具有超順磁，磁化率為32 981.2×10-6。

1.2.2 納米磁性RGD粒子制備

采用Luo Yu等人實(shí)驗(yàn)方法[17]，以1-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)為磁性納米顆粒活化的偶聯(lián)劑，在5 mL的2-(N-嗎啡啉)乙磺酸(MES)(0.1 molL)緩沖溶液中，對(duì)氧化鐵(Fe2O3)納米顆粒表面的末端游離羧基進(jìn)行活化，混合后室溫條件下，搖床震蕩反應(yīng)1 h；然后逐滴加入濃度為1 mgmL的RGD多肽，室溫下?lián)u床震蕩反應(yīng)12 h，透析多次，得到產(chǎn)物置低溫下保存。其中n(Fe2O3) ∶n(EDC) ∶n(NHS) ∶n(RGD)=1 ∶70 ∶70 ∶4。圖2所示為主磁性顆粒接枝RGD多肽原理。

圖1 納米磁性顆粒表面修飾示意圖

圖2 納米磁性顆粒接枝RGD多肽原理

1.2.3 磁性靶向蛋白微泡材料制備

分別稱量EDC、NHS混合于燒杯中，并取適量MES溶液，加入燒杯當(dāng)中，磁力攪拌15 min，使其充分溶解。取混合液加入磁性氧化鐵溶液，在室溫下調(diào)節(jié)搖床震動(dòng)反應(yīng)1 h。取適量PBS、甘油、牛血清白蛋白(BSA)溶液并逐滴加入活化后的磁性納米顆粒溶液中。利用透析袋封裝納米磁性顆粒溶液并置于燒杯，用去離子水進(jìn)行透析得到納米磁性顆粒+牛血清蛋白(BSA)接枝產(chǎn)物。圖3所示為牛血清白蛋白超聲微泡與活化后的納米磁性顆粒接枝反應(yīng)原理。

圖3 牛血清白蛋白超聲微泡與活化后的納米磁性顆粒接枝反應(yīng)原理

1.2.4 磁性靶向蛋白超聲微泡制備

稱牛血清白蛋白置于采血管中。在采血管中加入甘油，PBS溶液蓋緊蓋子，用密封膠密封管口，分別放置在超聲清洗機(jī)和恒溫水浴箱中震蕩、加熱溶解，直至牛血清白蛋白充分溶解。在MES緩沖液中加入納米磁性顆粒搖床震蕩反應(yīng)1 h充分活化后加入溶解后的牛血清蛋白(BSA)搖床震蕩反應(yīng)12 h，透析。用三通閥將裝有空注射器、含有全氟丙烷的注射器、采血管三者連接。首先將三通閥無(wú)孔端對(duì)準(zhǔn)含全氟丙烷的注射器，抽拉空注射器，使采血管中形成負(fù)壓。轉(zhuǎn)動(dòng)三通閥旋鈕，將無(wú)孔端對(duì)準(zhǔn)抽真空的注射器方向(在此期間抽真空注射器保持不動(dòng))。此時(shí)，全氟丙烷氣體自動(dòng)進(jìn)入采血管。重復(fù)以上步驟2次。將充入全氟丙烷的采血管置于銀汞膠囊調(diào)和器中，設(shè)置振動(dòng)時(shí)間為50s，則制得微泡。

1.2.5 磁性靶向蛋白超聲微泡形貌表征

將制得的微泡用移液槍吸取少許滴加于載玻片上，利用熒光倒置顯微鏡對(duì)制得的微泡形態(tài)進(jìn)行觀察。若視野中存在較多微泡影響觀察，可直接利用PBS溶液進(jìn)行稀釋，尋找合適區(qū)域進(jìn)行拍照并測(cè)算微泡尺寸。

1.2.6 磁性靶向蛋白材料表征

首先進(jìn)行定性分析。利用紅外光譜對(duì)白蛋白(空白對(duì)照樣)和白蛋白+磁性顆粒的樣本進(jìn)行紅外檢測(cè)，得到特征紅外吸收光譜圖，進(jìn)行定性分析。紅外光譜具有高度特征性，采用白蛋白+磁性顆粒樣本與標(biāo)準(zhǔn)化合物白蛋白樣本的紅外光譜對(duì)比的方法，利用化學(xué)鍵的特征波數(shù)來(lái)鑒別化合物、化學(xué)鍵的類型。采用數(shù)據(jù)處理軟件Origin對(duì)光譜圖進(jìn)行處理，對(duì)特征吸收峰進(jìn)行對(duì)比觀察。若在酰胺鍵的特征吸收峰處出現(xiàn)位移，便說(shuō)明活化后的納米磁性顆粒與脂質(zhì)體或牛血清蛋白超聲微泡接枝成功。

接著進(jìn)行定量分析。采用鄰二氮菲比色法測(cè)定鐵的含量，得到鄰二氮菲鐵絡(luò)合物的吸收光譜確定樣品的特定波長(zhǎng)；再通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定光吸收度與溶液濃度呈良好的線性關(guān)系，符合Lambert-Beer定律；最后確定樣品含鐵量。

測(cè)定鄰二氮菲鐵絡(luò)合物的吸收光譜。稱取FeCl3·6H2O置于燒杯中，分別加入20 mL的HCl溶液(6 molL)和少量蒸餾水，進(jìn)行充分溶解后轉(zhuǎn)移至1 000 mL的量瓶中，繼續(xù)加水稀釋至刻度線并搖勻配制出10 mgL的標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液。將10 mL標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液置于100 mL量瓶中，加入2 mL的HCl溶液，加水稀釋至刻度線，搖勻存放備用。量取5 mL溶液，置于25 mL量瓶之中，加入10%鹽酸羥胺溶液1 mL、0.15%鄰二氮菲溶液2 mL、1 molL NaAC溶液5 mL，加水稀釋至刻度線并搖勻。將配制得到的溶液(桔紅色溶液)作為空白溶液，置于比色皿中，在400～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定該空白溶液的吸收光譜，樣品在某一特定波長(zhǎng)處有最大吸收峰，該波長(zhǎng)即可被確定為本次試驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，確認(rèn)測(cè)定結(jié)果符合Lambert-Beer定律。分別量取10 mgL標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液1.00、3.00、5.00、7.00、9.00 mL，置于25 mL量瓶中，再分別加入10%鹽酸羥胺溶液1 mL、0.15%鄰二氮菲溶液2 mL、1molL 的NaAC溶液5 mL，加水稀釋至量瓶刻度線并搖勻。以此試劑為空白試劑在特定波長(zhǎng)處測(cè)定溶液對(duì)光的吸收度，測(cè)定數(shù)據(jù)線性回歸，由此得出回歸方程結(jié)果表明在某濃度范圍內(nèi)，光吸收度與溶液濃度呈良好的線性關(guān)系，符合Lambert-Beer定律。

定量分析樣品含鐵量，計(jì)算接枝率。量取樣品溶液2 mL并置于1 L量瓶中，加入6 molL的鹽酸溶液20 mL后，加水稀釋至刻度線并搖勻。量取1 mL液并置于25 mL中后，按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線同法操作，測(cè)定樣品中的含鐵量。

1.2.7 磁性靶向蛋白超聲微泡的生物相容性表征

取1×105個(gè)Hela細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中，采用10%胎牛血清、1%雙抗的DMEM 完全培養(yǎng)基，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。將培養(yǎng)皿中實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞用PBS清洗3次后加入CO2非依賴培養(yǎng)基、L-谷氨酰胺和 FBS的混合培養(yǎng)液，再加入超聲微泡與細(xì)胞共培養(yǎng)，將培養(yǎng)皿置于顯微鏡下對(duì)同一區(qū)域進(jìn)行觀察，并分別在0、30、60、90 min時(shí)拍照。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

2.1 磁性靶向蛋白超聲微泡的形貌

通過(guò)肉眼觀察到，制得的BSA+磁性顆粒磁性靶向蛋白材料樣品為淡黃色半透明狀態(tài)，粒徑范圍為2～8 μm，單個(gè)微泡外觀圓整，分散情況較好，同時(shí)很穩(wěn)定，未見(jiàn)明顯的微泡間相互粘連或局部聚集成團(tuán)現(xiàn)象(見(jiàn)圖4)。

圖4 制得樣品及其40×物鏡下的磁性蛋白質(zhì)超聲微泡彩圖

2.2 磁性靶向蛋白材料紅外光譜分析

本實(shí)驗(yàn)采用FT-IR分析牛血清蛋白(BSA)超聲微泡表面活化后的超順磁性納米磁性顆粒接枝情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，超順磁性的納米磁性顆粒經(jīng)過(guò)活化后表面存在大量的游離態(tài)羧基。圖5中黑色實(shí)線為牛血清蛋白(BSA)加入PBS溶液和甘油混合液中超聲振蕩溶解后的樣品特征譜帶。其中，3 316.61 cm-1代表樣品中含有羥基(分子間締合額，多聚)；1 638.33 cm-1代表樣品中含有酰胺鍵且為碳氧雙鍵伸縮振動(dòng)；2 155.57 cm-1代表含有胺或銨鹽。酰胺鍵同樣出現(xiàn)在牛血清蛋白和納米磁性顆粒接枝后的磁性蛋白質(zhì)超聲微泡上，并紅移至1 654.45 cm-1，1 043.18 cm-1代表其中含有醚基。酰胺鍵吸收峰的出現(xiàn)，表明活化后的納米磁性顆粒與牛血清蛋白接枝成功。

2.3 磁性靶向蛋白材料分光光度法分析

利用鄰二氮菲(鄰菲羅啉)結(jié)合紫外分光光度計(jì)測(cè)定樣品中的含鐵量。將實(shí)驗(yàn)操作步驟中所述的空白試劑按比例配比完成后，置于1 cm比色皿中，在400～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定吸收光譜(見(jiàn)圖6)。本品絡(luò)合物在510±2 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，故確定510±2 nm波長(zhǎng)為本次實(shí)驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。

圖5 磁性靶向蛋白材料紅外光譜圖

圖6 鄰二氮菲絡(luò)合物吸收光譜

按實(shí)驗(yàn)操作步驟，分別配置標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液為1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL(Fe的質(zhì)量濃度分別為0.4、1.2、2.0、2.8、3.6 mgL)的空白試劑(見(jiàn)圖7)，在510±2 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，測(cè)定后的數(shù)據(jù)經(jīng)線性回歸得出回歸方程：A=0.005 7+0.196 8C，r=0.999 9。檢測(cè)結(jié)果表明，當(dāng)Fe的質(zhì)量濃度在 0.4～3.6 mgL范圍內(nèi)時(shí)，光的吸收度與溶液濃度呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，符合Lambert-Beer定律。

圖7 不同量標(biāo)準(zhǔn)Fe溶液配制的空白試劑

將活化后的超順磁性納米磁性顆粒作為被檢測(cè)物質(zhì)，再次檢測(cè)，用分光光度法測(cè)量Fe含量。

利用分光光度計(jì)在400～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)透析后產(chǎn)物進(jìn)行照射，測(cè)定的波長(zhǎng)510±2 nm處吸光度則為樣品中所含鐵的吸光度。根據(jù)回歸方程：A=0.005 7+0.196 8C，r=0.999 9，計(jì)算樣品中的Fe含量。同理，將活化后的納米磁性顆粒視為未知濃度Fe溶液，按上述實(shí)驗(yàn)步驟配制溶液并利用分光光度法測(cè)量Fe 含量，然后可對(duì)納米磁性顆粒接枝牛血清蛋白的接枝率進(jìn)行計(jì)算。

納米磁性顆粒在測(cè)定波長(zhǎng)為510±2 nm處的平均吸光度值為：A1=0.698 6Abs，由此可得納米磁性顆粒的質(zhì)量濃度為3.520 8 mgL；納米磁性顆粒接枝牛血清蛋白(BSA)溶液在測(cè)定波長(zhǎng)510±2 nm處的平均吸光度值為0.352 1Abs，由此可得納米磁性顆粒接枝牛血清蛋白(BSA)溶液的Fe質(zhì)量濃度為1.760 6 mgL。根據(jù)公式：

(1)

式中：η表示接枝率；C1表示接枝成功的Fe2O3+BSA的質(zhì)量濃度；C2表示Fe2O3的質(zhì)量濃度。

經(jīng)由式(1)計(jì)算得到，F(xiàn)e2O3納米磁性顆粒接枝牛血清蛋白(BSA)的接枝率為50%。

2.4 磁性靶向蛋白超聲微泡的生物相容性分析

分別拍攝2組Hela細(xì)胞在熒光倒置顯微鏡20倍物鏡下0、30、60、90 min時(shí)某一固定位置的細(xì)胞形態(tài)(見(jiàn)圖8)。其中，第一組(A1、B1、C1、D1)為未加微泡的hela細(xì)胞；第二組(A2、B2、C2、D2)為加入磁性蛋白質(zhì)超聲微泡與Hela細(xì)胞共培養(yǎng)的細(xì)胞。可以清晰地看到，在Hela細(xì)胞中加入本次實(shí)驗(yàn)研制的磁性蛋白質(zhì)超聲微泡后，細(xì)胞形態(tài)在該時(shí)間段內(nèi)并未發(fā)生明顯變化，細(xì)胞成活率高于80%。由此證明，本次實(shí)驗(yàn)研制的磁性蛋白質(zhì)超聲微泡對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，具有良好的細(xì)胞相容性。

圖8 不同時(shí)間顯微鏡下的細(xì)胞形態(tài)

3 結(jié) 語(yǔ)

現(xiàn)階段關(guān)于超聲微泡的研究熱點(diǎn)主要集中在HIFU聯(lián)合超聲微泡造影劑治療腫瘤等方面。通過(guò)超聲微泡或超聲微泡聯(lián)合HIFU攜帶藥物進(jìn)行基因靶向性治療或診斷疾病時(shí)，藥物或基因大多數(shù)情況下是被微泡包覆后進(jìn)入生物體內(nèi)，到達(dá)病灶部位后在超聲作用下使微泡破碎，藥物得以釋放從而達(dá)到治療或診斷的目的。

本次研究所制成的超聲微泡，是一種雙模態(tài)造影增強(qiáng)劑，可同時(shí)用于超聲造影和磁共振成像，實(shí)現(xiàn)病灶部位的高清顯像與精準(zhǔn)診斷，滿足當(dāng)代精準(zhǔn)化醫(yī)療理念。將納米磁性顆粒與RGD多肽特異性配體連接到微泡表面形成靶向微泡造影劑，使其能主動(dòng)結(jié)合到靶組織或靶器官上相應(yīng)的細(xì)胞受體，產(chǎn)生特異性靶向顯影。通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，本次研究的Fe2O3納米磁性顆粒接枝牛血清蛋白(BSA)的接枝率為50%，制得的超聲微泡均勻、分散性好，沒(méi)有細(xì)胞毒性，具有細(xì)胞相容性，可用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。

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[16] 武兆忠, 劉敏 ,李志銘，等. 納米氧化鐵顆粒表征分析及其對(duì)體外標(biāo)記腫瘤細(xì)胞磁信號(hào)變化的影響[J]. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù), 2010, 14(8): 1402-1407.

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PreparationandCharacteristicsofaCertainTargetedProteinUltrasoundMicrobubbles

HUANGQiuhong1，2，3GAOLishan1，2，3YANGXiaoling1，2，3YANGMei1，2，3XUWenfeng1，2，3LIAOXiaoling1，2，3

(1.Chongqing Medical Engineering Laboratory, Chongqing 401331, China; 2.Chongqing Key Laboratory of Nano Micro Composite Materials and Devices, Chongqing 401331, China; 3.Biomedical Engineering Research Institute, Chongqing University of Science and Technology, Chongqing 401331, China)

In this paper, fluorocarbon gas is used as ultrasound contrast agent to design a dual modal angiography enhancer for both ultrasound and magnetic resonance imaging (MRI) by grafting nano-magnetic particles - RGD peptide to prepare magnetic targeting protein ultrasound micro bubbles. The micro bubble morphology of magnetic protein was observed and analyzed by microscope. The grafting rate of nano - magnetic particles grafted bovine serum albumin was analyzed by infrared spectroscopy and spectrophotometry. Then the biocompatibility of magnetic protein micro bubbles was evaluated by cell experiments.

ultrasound microbubbles; targeted dual-mode imaging; nano magnetic particles; RGD peptide

2017-09-07

國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目“骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)軟組織、力學(xué)失穩(wěn)損傷及修復(fù)的機(jī)制”(11532004)；國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目“基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)的生物材料誘導(dǎo)干細(xì)胞定向分化的FAK/Src信號(hào)機(jī)制研究”(31271014)；重慶市科委自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目“基于FRET技術(shù)的擾動(dòng)流影響動(dòng)脈粥樣硬化的力學(xué)生物學(xué)機(jī)制研究”(CSTC2015JC2015JCYJBX0003)；重慶科技學(xué)院研究生科技創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目“石油廢水重金屬離子Pb2+、Cd2+的高通量快速檢測(cè)系統(tǒng)研究”(YKJCX1720201)

黃秋紅(1991 — )，女，重慶人，重慶科技學(xué)院在讀碩士研究生，研究方向?yàn)樯锊牧稀?/p>

廖曉玲，女，博士，教授，研究方向?yàn)樯锊牧稀?/p>

Q813

A

1673-1980(2017)06-0063-05