王鵬思，王玉潔，薛健*，李嘉欣，金紅宇，馬雙成

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；2.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050)

·中藥農(nóng)業(yè)·

溴氰菊酯和氟啶蟲胺腈兩種農(nóng)藥分別對(duì)金銀花品質(zhì)的影響△

王鵬思1，王玉潔1，薛健1*，李嘉欣1，金紅宇2，馬雙成2

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；2.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050)

目的研究農(nóng)藥溴氰菊酯、氟啶蟲胺腈分別對(duì)金銀花中綠原酸和木犀草苷含量的影響，為兩種農(nóng)藥的合理使用提供參考。方法采用田間試驗(yàn)的方法采集金銀花樣品，樣品經(jīng)70%乙醇超聲提取后，采用高效液相色譜-紫外檢測(cè)器法(HPLC-UV法)測(cè)定樣品中綠原酸、木犀草苷的含量，對(duì)含量結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果兩年兩地的試驗(yàn)結(jié)果顯示溴氰菊酯、氟啶蟲胺腈對(duì)金銀花中綠原酸和木犀草苷的平均含量與空白組相比均無顯著性影響(P>0.05)。結(jié)論溴氰菊酯、氟啶蟲胺腈對(duì)金銀花品質(zhì)無不良影響，可用于金銀花蚜蟲的防治。

溴氰菊酯；氟啶蟲胺腈；農(nóng)藥；金銀花；品質(zhì)

長期以來，由于人們對(duì)中藥資源不合理地開發(fā)利用及生態(tài)環(huán)境的改變、破壞，目前依賴自然生態(tài)提供的野生藥用生物資源種類和數(shù)量已不能滿足社會(huì)需求。百余種常用藥材生產(chǎn)現(xiàn)狀分析表明，大約70%的藥材商品是通過人工生產(chǎn)進(jìn)行替代和補(bǔ)償以保障供給[1]。而在人工生產(chǎn)過程中，藥用植物和其他農(nóng)作物一樣會(huì)受到各種病蟲害的侵襲，為了降低損失、增產(chǎn)增收，便不可避免地要使用各種農(nóng)藥。目前，對(duì)中藥材生產(chǎn)過程中農(nóng)藥使用的相關(guān)研究主要集中在農(nóng)藥藥效的優(yōu)選、殘留檢測(cè)、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等問題上，忽視了農(nóng)藥的使用對(duì)藥用植物成分的影響。薛健[2]認(rèn)為在中藥材種植過程中農(nóng)藥作為一種重要的農(nóng)藝措施雖不得不用，但是必須要考慮農(nóng)藥的使用對(duì)中藥材有效成分的影響，農(nóng)藥的使用若影響到藥材的成分含量和組成，這種農(nóng)藥就要慎重使用，趨利除弊。

本研究采用田間試驗(yàn)的方法，選擇金銀花生產(chǎn)中對(duì)蚜蟲防治效果良好的溴氰菊酯、氟啶蟲胺腈兩種農(nóng)藥，考察了三倍推薦劑量(高劑量)下兩種農(nóng)藥對(duì)2015版《中華人民共和國藥典》規(guī)定的金銀花指標(biāo)成分(綠原酸和木犀草苷)含量的影響，旨在較全面地評(píng)價(jià)兩種農(nóng)藥對(duì)金銀花品質(zhì)的影響，從而為兩種農(nóng)藥在金銀花上的科學(xué)合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 主要儀器

Waters 2695高效液相色譜儀，配紫外檢測(cè)器；Reprosil-Pur 120 C18-AQ色譜柱(5μm，250mm×4.6mm，德國Dr.Maisch GmbH)；電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；SB-5200DT 超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 主要材料

乙醇、冰醋酸(分析純，北京化工廠)；乙腈(色譜純，美國Fisher公司)；乙醇(色譜純，天津光復(fù)科技發(fā)展有限公司)；Milli-Q超純水；綠原酸20 mg、木犀草苷25 mg(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；25 g·L-1溴氰菊酯乳油(拜耳作物科學(xué)有限公司)；50%氟啶蟲胺腈水分散顆粒(美國陶氏益農(nóng)公司)；金銀花樣品[由田間試驗(yàn)獲得，經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所張本剛研究員鑒定為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 田間試驗(yàn)及樣品采集

參照中華人民共和國農(nóng)業(yè)部所頒行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》(NY/T788-2004)[3]進(jìn)行田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)。試驗(yàn)地2015年設(shè)在河南省封丘縣黃德鎮(zhèn)西于村金銀花(品種為大毛花)種植基地，2016年設(shè)在河南省封丘縣陳固鎮(zhèn)東仲宮村金銀花(品種為大毛花)種植基地，分別設(shè)置空白對(duì)照組、推薦劑量組(溴氰菊酯7.5 g·hm-2、氟啶蟲胺腈22.5 g·hm-2)、三倍推薦劑量組(溴氰菊酯22.5 g·hm-2、氟啶蟲胺腈67.5 g·hm-2)三個(gè)處理(高劑量農(nóng)藥處理對(duì)金銀花成分的影響往往更加明顯，因此僅測(cè)定空白對(duì)照處理組和三倍推薦劑量組樣品中綠原酸和木犀草苷的含量)，每個(gè)處理3 個(gè)重復(fù)小區(qū)，小區(qū)面積約為15 m2，小區(qū)間設(shè)隔離行約3 m。

在金銀花花蕾初期蚜蟲發(fā)生時(shí)，均勻噴施農(nóng)藥于各小區(qū)內(nèi)的每一植株上，分別于施藥后不同時(shí)期(2015年采樣時(shí)間為施藥后2 h(0 d)、1、2、3、4、5、7、9、11、13、15 d；2016年采樣時(shí)間為施藥后2 h(0 d)、1、2、3、4、6、8、10、12、15 d。在各小區(qū)內(nèi)每一植株上采用五點(diǎn)法采集金銀花樣品共約100 g，送至烘房烘干(40 ℃ 升溫至60 ℃)處理20 h，干燥樣品放至室溫后儲(chǔ)存于-20 ℃冰箱待測(cè)。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對(duì)照品適量于10 mL容量瓶，加70%乙醇(本文提到的70%乙醇均指70%乙醇水溶液)定容至刻度，配制成1.25 mg·mL-1的綠原酸對(duì)照品母液。精密稱取木犀草苷對(duì)照品適量于10 mL容量瓶，加70%乙醇定容至刻度，配制成1.05 mg·mL-1木犀草苷對(duì)照品母液。取上述木犀草苷和綠原酸對(duì)照品母液各1 mL于25 mL容量瓶，加70%乙醇定容至刻度，得到每毫升含50 μg綠原酸和42 μg木犀草苷的混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

[4-6]，確定供試品溶液的制備方法為：取金銀花粉末(過2號(hào)篩)約1 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中。精密加入70%乙醇20 mL，稱定重量。超聲處理1 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。取續(xù)濾液過0.45 μm微孔濾膜，即得。

2.4 色譜分析條件

色譜柱：Reprosil-Pur 120 C18-AQ色譜柱(5μm，250mm×4.6mm，德國Dr.Maisch GmbH)；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：0.5%冰醋酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脫程序見表1；流速1mL·min-1；檢測(cè)波長：350 nm；進(jìn)樣量：10 μL；外標(biāo)法定量。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

2.5 數(shù)據(jù)分析方法

按照2.3、2.4所述方法對(duì)獲得的168份金銀花樣品進(jìn)行測(cè)定，采用SPSS 19.0軟件對(duì)空白對(duì)照組(不施藥)和實(shí)驗(yàn)組(施用3倍推薦劑量農(nóng)藥)金銀花樣品中綠原酸和木犀草苷的平均含量進(jìn)行平均數(shù)差異檢驗(yàn)。

3 結(jié)果與分析

對(duì)2015年和2016年對(duì)照組和施藥組樣品進(jìn)行測(cè)定，得到金銀花中綠原酸和木犀草含量如表2、表3所示，由表2、表3知對(duì)照組和施藥組樣品中綠原酸和木犀草苷含量均不低于2015版《中華人民共和國藥典》的規(guī)定值(金銀花按干燥品計(jì)算，含綠原酸不得少于1.5%；含木犀草苷不得少于0.050%)。且經(jīng)SPSS 19.0軟件分析得：兩年兩地實(shí)驗(yàn)組金銀花中綠原酸和木犀草苷的平均含量與對(duì)照組金銀花中綠原酸和木犀草苷的平均含量之間無顯著性差異(P>0.05)。

表2 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組(溴氰菊酯)金銀花中綠原酸和木犀草苷含量(n=3)

注：CK為空白對(duì)照處理(對(duì)照組)；3TJ為3倍推薦劑量施藥處理(實(shí)驗(yàn)組)；a：P>0.05。

表3 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組(氟啶蟲胺腈)金銀花中綠原酸和木犀草苷含量(n=3)

注：CK為空白對(duì)照處理(對(duì)照組)；3TJ為3倍推薦劑量施藥處理(實(shí)驗(yàn)組)；a：P>0.05。

將兩年兩地對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組金銀花中綠原酸含量-施藥后天數(shù)、木犀草苷含量-施藥后天數(shù)繪制折線圖分別見圖1、圖2、圖3、圖4。

圖1 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組(溴氰菊酯)金銀花樣品中綠原酸含量-施藥后天數(shù)折線圖

圖2 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組(溴氰菊酯)金銀花樣品中木犀草苷含量-施藥后天數(shù)折線圖

圖3 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組(氟啶蟲胺腈)金銀花樣品中綠原酸含量-施藥后天數(shù)折線圖

圖4 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組(氟啶蟲胺腈)金銀花樣品中木犀草苷含量-施藥后天數(shù)折線圖

由圖1、圖2、圖3、圖4知兩年兩地的實(shí)驗(yàn)組金銀花中綠原酸、木犀草苷的含量與對(duì)照組金銀花中綠原酸、木犀草苷的含量變化趨勢(shì)基本一致。

4 討論

4.1 不同農(nóng)藥對(duì)金銀花中綠原酸和木犀草苷含量的影響

本研究表明溴氰菊酯、氟啶蟲胺腈兩種農(nóng)藥對(duì)金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量均無顯著性影響。而李嘉欣等[7]研究發(fā)現(xiàn)高劑量吡蟲啉、啶蟲脒、三唑酮的使用對(duì)金銀花中綠原酸含量的影響分別為：顯著提高、顯著提高、顯著降低；低劑量吡蟲啉、啶蟲脒、三唑酮的使用對(duì)金銀花中綠原酸含量的影響分別為：顯著提高、無顯著性差異、顯著降低。劉璐[8]研究發(fā)現(xiàn)高劑量烯啶蟲胺的使用可顯著促進(jìn)金銀花中綠原酸的積累而顯著抑制木犀草苷的積累。劉亞南等[9]研究發(fā)現(xiàn)高、低劑量噻蟲嗪的使用對(duì)金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量均無顯著性影響。陳美艷等[10-11]研究發(fā)現(xiàn)高、低劑量吡蟲啉的使用對(duì)金銀花中木犀草苷的含量均無顯著性影響而對(duì)綠原酸的含量具有一定促進(jìn)作用(高劑量促進(jìn)作用顯著；低劑量促進(jìn)作用不顯著)。可見，農(nóng)藥的用量、種類等對(duì)同一藥材的相同成分會(huì)產(chǎn)生不同影響。

4.2 藥用植物上農(nóng)藥的合理使用

藥用植物不同于糧食、蔬菜、水果等作物，作為中藥(包括中藥材、中藥飲片、中成藥)的主要來源，其首要價(jià)值在于預(yù)防、治療疾病及其良好的養(yǎng)生保健作用。因此，藥用植物上使用農(nóng)藥時(shí)，既要保證農(nóng)藥殘留的安全性，也應(yīng)重視農(nóng)藥的使用對(duì)藥用植物有效成分含量的影響。本研究表明溴氰菊酯和氟啶蟲胺腈對(duì)金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量無顯著性影響，且課題組已經(jīng)建立兩種農(nóng)藥的安全使用規(guī)范[12-13]，經(jīng)實(shí)地調(diào)研和田間藥效試驗(yàn)表明兩種農(nóng)藥均可有效防治金銀花蚜蟲蟲害且對(duì)金銀花外觀性狀無不良影響，因此溴氰菊酯和氟啶蟲胺腈可以在金銀花產(chǎn)區(qū)進(jìn)行推廣使用。不過，由于中藥往往是依靠其復(fù)雜的有效成分群發(fā)揮作用，建議可以借助中藥指紋圖譜等技術(shù)更加深入全面地研究農(nóng)藥對(duì)中藥有效成分群的影響。此外，若農(nóng)藥對(duì)藥用植物有效成分的含量有影響，那么其影響機(jī)理也需進(jìn)一步深入的研究。

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EffectsofDeltamethrinandSulfoxafloronQualityofHoneysuckle

WANGPengsi1，WANGYujie1，XUEJian1*，LIJiaxin1，JINHongyu2，MAShuangcheng2

(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalScience&PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China；2.NationalInstitutesforFoodandDrugControl，Beijing100050，China)

Objective：To research the effects of deltamethrin and sulfoxaflor on the content of chlorogenic acid and galuteolin in honeysuckle and provide reference for the rational use of the two pesticides.MethodsField experiments were conducted and the collected honeysuckle samples were extracted with 70% ethanol under ultrasound assistance，detected by HPLC with ultraviolet detector and determined by external standard method.ResultsThe results showed that there was no significant effect(P>0.05)on the average content of chlorogenic acid and galuteolin between the experimental group and the blank control group.ConclusionDeltamethrin and sulfoxaflor had no adverse effects on the quality of honeysuckle and could be used for the prevention and control of aphids during the cultivation ofLonicerajaponica.

Honeysuckle；pesticides；deltamethrin；sulfoxaflor；chlorogenic acid；galuteolin；quality

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.12.014

國家重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)(2014ZX09304307-002)

*

薛健，研究員，研究方向：中藥有效成分分析、質(zhì)量控制及中藥有害污染物研究；Tel：(010)57833097，E-mail：xuejian200@sina.com

2017-08-22)