高巧營(yíng)，劉晉津，吳騰，張一，李東華，趙凱

(天津市南開醫(yī)院，天津300100)

普羅布考聯(lián)合山莨菪堿對(duì)糖尿病大鼠對(duì)比劑腎損傷的影響

高巧營(yíng)，劉晉津，吳騰，張一，李東華，趙凱

(天津市南開醫(yī)院，天津300100)

目的探討普羅布考聯(lián)合山莨菪堿對(duì)糖尿病大鼠對(duì)比劑腎病(CIN)的影響。方法選取130只大鼠制備糖尿病大鼠模型，將造模成功大鼠隨機(jī)分為模型組、普羅布考組、山莨菪堿組、聯(lián)合組各21只。另選10只正常大鼠為正常對(duì)照組。糖尿病造模9周后，普羅布考組及聯(lián)合組給予普羅布考500 mg/kg灌胃，連續(xù)6 d；第8天時(shí)，于制備CIN模型前，山莨菪堿組及聯(lián)合組經(jīng)腹腔注射山莨菪堿100 μg/100 g，15 min后，模型組、普羅布考組、山莨菪堿組、聯(lián)合組經(jīng)尾靜脈注射復(fù)方泛影葡胺注射液0.8 mL/100 g制備CIN模型；1 h后，山莨菪堿組、聯(lián)合組經(jīng)腹腔注射山莨菪堿100 μg/100 g共7次。注射對(duì)比劑前及24 h后，采用CBB法測(cè)定尿蛋白。內(nèi)眥靜脈取血，測(cè)定血清BUN、Scr水平。稱重，開腹后采集左右腎臟并稱重，計(jì)算腎指數(shù)。HE染色法觀察腎臟組織病理變化。取腎臟組織制成腎組織勻漿，測(cè)定氧化應(yīng)激指標(biāo)包括一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及總抗氧化能力(T-AOC)。熒光定量PCR法檢測(cè)腎組織Bcl-2相關(guān)X蛋白質(zhì)(Bax)和B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)mRNA表達(dá)。結(jié)果①模型組BUN、Scr、UAE均高于正常對(duì)照組(P均<0.05)。普羅布考組及聯(lián)合組BUN、Scr、UAE均低于模型組，聯(lián)合組BUN、Scr、UAE均低于山莨菪堿組(P均<0.05)。②模型組腎指數(shù)高于正常對(duì)照組，普羅布考組及聯(lián)合組腎指數(shù)低于模型組(P均<0.05)。③與模型組比較，普羅布考組、山莨菪堿組腎臟NOS水平升高，MDA水平降低(P均<0.05)。聯(lián)合組腎臟SOD、T-AOC均高于普羅布考組和山莨菪堿組(P均<0.05)。④與模型組比較，普羅布考組、聯(lián)合組腎臟Bax表達(dá)水平降低， Bcl-2及Bcl-2/Bax升高(P均<0.05)；山莨菪堿組腎臟Bcl-2/Bax升高(P<0.05)，聯(lián)合組腎臟Bcl-2/Bax高于山莨菪堿組(P<0.05)。結(jié)論普羅布考、山莨菪堿聯(lián)用可減輕糖尿病CIN大鼠的腎臟損傷，其機(jī)制可能與抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)、上調(diào)Bcl-2/Bax比值有關(guān)，且效果優(yōu)于單藥應(yīng)用。

普羅布考；山莨菪堿；對(duì)比劑腎??；糖尿?。谎趸瘧?yīng)激；B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因；Bcl-2相關(guān)X蛋白質(zhì)

對(duì)比劑腎病(CIN)是指在排除其他原因的前提下，血管內(nèi)應(yīng)用對(duì)比劑72 h內(nèi)發(fā)生的腎功能急性損害或腎功能損害加重[1]。糖尿病是發(fā)生CIN常見的危險(xiǎn)因素之一[2]。當(dāng)糖尿病患者伴有腎功能不全時(shí)CIN發(fā)病率明顯上升，可高達(dá)50%。普羅布考是一種較早應(yīng)用于臨床的降脂藥物，具有抗氧化、抗炎、改善內(nèi)皮細(xì)胞功能、抑制血管內(nèi)膜增生等作用，目前已被應(yīng)用于治療腎臟疾病[3]。山莨菪堿為M受體阻斷劑，具有抗休克、改善組織微循環(huán)灌注、抗自由基等作用，在腎臟疾病的治療中具有擴(kuò)張腎小球小動(dòng)脈、改善微循環(huán)、促進(jìn)腎組織修復(fù)、有效清除氧自由基、減少腎臟細(xì)胞凋亡等作用[4]?？梢娚鲜鰞煞N藥物均有抗氧化、保護(hù)腎組織損傷的作用。但目前，關(guān)于普羅布考、山莨菪堿聯(lián)合應(yīng)用于CIN防治的研究較少。2015年3月～2016年5月，我們通過建立糖尿病大鼠CIN模型，觀察給予普羅布考、山莨菪堿聯(lián)合用藥后腎臟組織氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)因子及細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2表達(dá)的變化，探討兩藥聯(lián)合應(yīng)用對(duì)糖尿病CIN大鼠腎臟的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、試劑與儀器 健康雄性SD大鼠140只，質(zhì)量240～260 g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院環(huán)境所動(dòng)物中心提供。鏈脲佐菌素(STZ)購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；普羅布考購(gòu)于承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司；山莨菪堿購(gòu)于天津金耀藥業(yè)有限公司；復(fù)方泛影葡胺注射液購(gòu)于湖南漢森制藥股份有限公司；尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及總抗氧化能力(T-AOC)檢測(cè)試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所；動(dòng)物組織RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量PCR試劑盒購(gòu)于北京天根生化科技有限公司；IQ5型熒光定量PCR儀購(gòu)于美國(guó)Bio-rad公司；LEICA DM4000B正置顯微鏡購(gòu)于德國(guó)Leica公司。

1.2 模型制備及分組方法 140只大鼠中隨機(jī)挑取10只為正常對(duì)照組，其他130只大鼠禁食12 h稱重，經(jīng)腹腔按60 mg/kg劑量注射STZ，注射72 h及1周后斷尾測(cè)血糖，以血糖>16.7 mmol/L判定糖尿病大鼠模型構(gòu)建成功。成模大鼠104只，隨機(jī)分為模型組、普羅布考組、山莨菪堿組、聯(lián)合組各21只。

1.3 干預(yù)方法 根據(jù)焦占全[5]和賈辛未[6]報(bào)道的CIN造模及用藥方法，結(jié)合臨床應(yīng)用普羅布考預(yù)防CIN的方法及山莨菪堿半衰期短、起效快等藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，對(duì)聯(lián)合組采用先灌胃普羅布考6 d、再于CIN造模前后腹腔注射山莨菪堿的聯(lián)合用藥方法。糖尿病造模后飼養(yǎng)9周，普羅布考組及聯(lián)合組給予普羅布考500 mg/kg灌胃，正常對(duì)照組、模型組和山莨菪堿組給予等量生理鹽水灌胃，連續(xù)6 d；第7天時(shí)禁水不禁食。第8天時(shí)，于制備CIN模型前，山莨菪堿組及聯(lián)合組經(jīng)腹腔注射山莨菪堿100 μg/100 g，正常對(duì)照組、模型組及普羅布考組腹腔注射等量生理鹽水；15 min后，模型組、普羅布考組、山莨菪堿組、聯(lián)合組經(jīng)尾靜脈注射復(fù)方泛影葡胺注射液0.8 mL/100 g制備CIN模型；1 h后，山莨菪堿組、聯(lián)合組按1次/h經(jīng)腹腔注射山莨菪堿100 μg/100 g共3次，之后再以1次/4 h腹腔注射4次。

1.4 腎功能相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) 注射對(duì)比劑前及24 h后，每組隨機(jī)選取8只大鼠放入代謝籠中，收集尿液，采用CBB法測(cè)定尿蛋白。各組剩余大鼠經(jīng)內(nèi)眥靜脈采血1 mL，離心留取上清液，采用脲酶法測(cè)定BUN，苦味酸法測(cè)定Scr。

1.5 腎指數(shù)測(cè)算 大鼠取血后，稱重。無(wú)菌條件下麻醉大鼠，開腹后采集左右腎臟并稱重，計(jì)算腎指數(shù)=腎質(zhì)量/體質(zhì)量。

1.6 腎臟組織病理觀察 將左腎剖開放入10%中性甲醛中固定，進(jìn)行常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片，進(jìn)行HE染色，顯微鏡下觀察腎臟組織病理變化。

1.7 腎組織勻漿氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè) 取剩余腎臟組織-80 ℃冰箱保存，制成腎組織勻漿，采用硝酸還原酶法測(cè)定NO，氧化還原法測(cè)定NOS，黃嘌呤氧化酶法測(cè)SOD，硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA，比色法測(cè)定T-AOC。

1.8 腎組織Bax、Bcl-2 mRNA檢測(cè) 采用熒光定量PCR法。取腎臟組織，參照試劑盒操作說明提取腎組織總RNA，并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。Bax、Bcl-2和GAPDH引物均由上海生工生物技術(shù)有限公司合成。引物序列：Bax上游5′-GCGAATTGGAGATGAACTGG-3′，下游5′-GTGAGCGAGGCGGTGAGGAC-3′；Bcl-2上游5′-CTGGTG-GACAACATCGCTCTG-3′，下游5′-GGTCTGCTGACCTC-ACTTGTG-3′；GAPDH上游5′-AGATGGTGAAGGTCG-GTGTG-3′，下游5′-CTGGAAGATGGTGATGGGTT-3′。應(yīng)用IQ5型熒光定量PCR儀進(jìn)行定量檢測(cè)，每份樣本進(jìn)行3個(gè)復(fù)孔測(cè)定，結(jié)果參照2-ΔΔCt法[7]進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 各組腎功能相關(guān)指標(biāo)比較 模型組BUN、Scr、UAE均高于正常對(duì)照組(P均<0.05)。普羅布考組和聯(lián)合組BUN、Scr、UAE均低于模型組(P均<0.05)。聯(lián)合組BUN、Scr、UAE均低于山莨菪堿組(P均<0.05)。見表1。

2.2 各組腎指數(shù)比較 模型組腎指數(shù)高于正常對(duì)照組，普羅布考組及聯(lián)合組腎指數(shù)低于模型組(P均<0.05)。見表1。

表1 各組腎功能相關(guān)指標(biāo)及腎指數(shù)比較

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05；與普羅布考組比較，△P<0.05；與山莨菪堿組比較，▲P<0.05。

2.3 各組腎臟組織病理觀察 正常對(duì)照組腎小球、腎小管及間質(zhì)未見病變，其余各組腎臟明顯增大、腎血管充血嚴(yán)重。模型組腎小體有的呈分葉狀；腎小管上皮細(xì)胞可見空泡樣變性、局部壞死；普羅布考組、山莨菪堿組和聯(lián)合組腎臟的病理變化基本同模型組，聯(lián)合組病理改變較模型組減輕。

2.4 各組腎組織勻漿氧化應(yīng)激指標(biāo)比較 與正常對(duì)照組比較，模型組腎臟NOS、MDA水平升高，而SOD及T-AOC水平降低(P均<0.05)。與模型組比較，普羅布考組、山莨菪堿組腎臟NOS水平升高，MDA水平降低(P均<0.05)；聯(lián)合組腎臟NOS、SOD及T-AOC水平升高，MDA水平降低(P均<0.05)。聯(lián)合組腎臟SOD、T-AOC均高于普羅布考組和山莨菪堿組(P均<0.05)。

表2 各組腎組織勻漿氧化應(yīng)激指標(biāo)比較

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，﹟P<0.05；與普羅布考組比較，△P<0.05；與山莨菪堿組比較，▲P<0.05。

2.5 各組腎組織Bax、Bcl-2表達(dá)比較 與正常對(duì)照組比較，模型組腎臟Bax、Bcl-2表達(dá)及Bcl-2/Bax均降低(P均<0.05)。與模型組比較，普羅布考組、聯(lián)合組大鼠Bax表達(dá)降低，Bcl-2及Bcl-2/Bax升高(P均<0.05)；山莨菪堿組腎臟Bcl-2/Bax升高(P<0.05)。聯(lián)合組腎臟Bcl-2/Bax高于山莨菪堿組(P<0.05)。見表3。

表3 各組腎組織Bax、Bcl-2基因表達(dá)比較

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，﹟P<0.05；與普羅布考組比較，△P<0.05；與山莨菪堿組比較，▲P<0.05。

3 討論

隨著疾病診療方法的發(fā)展，對(duì)比劑越來越多地應(yīng)用于臨床，如心腦血管的介入診療。對(duì)比劑是為增強(qiáng)影像觀察效果而注入(或服用)到人體組織或器官的化學(xué)制品，其可產(chǎn)生一定的不良反應(yīng)如CIN，具體表現(xiàn)為使用對(duì)比劑后72 h內(nèi)，血清肌酐水平升高44.2 μmol/L以上或比基礎(chǔ)值升高超過25%。臨床上大量使用對(duì)比劑導(dǎo)致的CIN已成為院內(nèi)獲得性急性腎損傷的第三大原因[8]。CIN的發(fā)病機(jī)制尚不明確。研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)比劑能直接損傷腎小管，誘導(dǎo)小管上皮細(xì)胞凋亡；可促進(jìn)氧自由基、炎癥因子等產(chǎn)生，參與細(xì)胞凋亡。

糖尿病與心腦血管疾病關(guān)系密切，糖尿病患者發(fā)生心腦血管疾病的危險(xiǎn)性明顯高于非糖尿病患者。心血管疾病已經(jīng)成為2型糖尿病患者的主要死亡原因。臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，伴有糖尿病病史的心血管患者，進(jìn)行介入診療時(shí)發(fā)生腎臟損害的危險(xiǎn)性升高。流行病學(xué)研究顯示，糖尿病是CIN發(fā)生的最常見危險(xiǎn)因素之一。Wasaki等[9]研究發(fā)現(xiàn)，高糖條件誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)了腎小球系膜細(xì)胞對(duì)對(duì)比劑細(xì)胞毒性的敏感性。還有學(xué)者提出對(duì)比劑與高血糖對(duì)細(xì)胞凋亡有協(xié)同作用。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組比較，模型組BUN、Scr、UAE、腎指數(shù)均增高，腎小體呈分葉狀，腎小管上皮細(xì)胞可見空泡樣變性、局部壞死，提示對(duì)比劑可導(dǎo)致糖尿病大鼠發(fā)生腎損傷，導(dǎo)致腎臟形態(tài)及功能異常。

細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)途徑可分為內(nèi)源性途徑、外源性途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑。內(nèi)源性途徑始于線粒體，是最重要的凋亡途徑之一，Bcl-2家族在線粒體凋亡通路中起重要作用。Bcl-2和Bax是該家族中重要的凋亡基因。前者能阻遏細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)細(xì)胞壽命，主要分布于線粒體膜、細(xì)胞膜內(nèi)表面、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等處。后者主要促進(jìn)細(xì)胞凋亡，細(xì)胞內(nèi)Bcl-2與Bax的比值(Bcl-2/Bax)調(diào)節(jié)凋亡的發(fā)生。當(dāng)該比值增加時(shí)，細(xì)胞趨于存活；比值下降時(shí)，細(xì)胞趨于凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，CIN的發(fā)生與對(duì)比劑直接腎毒性促進(jìn)細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)腎缺血及再灌注過程中產(chǎn)生的氧自由基損傷有重要關(guān)系[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠Bcl-2和Bax的mRNA表達(dá)均低于正常對(duì)照組，且Bcl-2/Bax比值降低，提示對(duì)比劑應(yīng)用后可使糖尿病大鼠腎臟凋亡細(xì)胞增加。

Bcl-2 除通過直接調(diào)節(jié)線粒體膜通透性外，還可通過影響ROS產(chǎn)生來阻礙細(xì)胞凋亡。有學(xué)者認(rèn)為CIN發(fā)生機(jī)制中氧自由基損傷作用亦處于主導(dǎo)地位[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組比較，除NO外，模型組大鼠腎臟NOS活力和MDA水平升高，而SOD和T-AOC降低，提示對(duì)比劑應(yīng)用后可使糖尿病大鼠腎臟產(chǎn)生過多的氧自由基，減少了保護(hù)細(xì)胞免受損傷的因子，可能與對(duì)比劑導(dǎo)致腎損傷的機(jī)制有關(guān)。

目前，水化治療已明確對(duì)CIN有治療作用，但臨床上被證實(shí)對(duì)CIN有確切效果的藥物并不多。臨床上普羅布考多作為降脂藥出現(xiàn)，研究者經(jīng)過長(zhǎng)期觀察發(fā)現(xiàn)它具有保護(hù)腎功能，可降低CIN發(fā)生率。趙凱等[12]發(fā)現(xiàn)，對(duì)接受PCI治療的不穩(wěn)定型心絞痛老年患者預(yù)防性應(yīng)用普羅布考可有效減少CIN的發(fā)生。山莨菪堿已被廣泛用于治療急性腎小球腎炎和糖尿病腎病，對(duì)腎功能具有良好保護(hù)作用。汪雁博等[13]臨床研究發(fā)現(xiàn)，山莨菪堿不僅可減輕介入治療的患者腎功能損傷程度，還有助于患者腎功能的恢復(fù)。但目前其尚未被廣泛地應(yīng)用于預(yù)防CIN。學(xué)者發(fā)現(xiàn)普羅布考和山莨菪堿均具有抗氧化作用[14,15]。本研究發(fā)現(xiàn)，普羅布考組和聯(lián)合組大鼠腎指數(shù)、BUN、Scr、UAE均低于模型組，且聯(lián)合組上述腎功能指標(biāo)亦低于山莨菪堿組，提示普羅布考及兩藥聯(lián)合使用可改善CIN大鼠的腎功能；與模型組比較，聯(lián)合組大鼠腎臟NOS、SOD及T-AOC水平升高，MDA水平降低，且SOD和T-AOC均高于普羅布考組和山莨菪堿組，提示兩藥均可減少氧自由基的產(chǎn)生，且兩藥聯(lián)合使用還可增加腎臟抗氧化因子的產(chǎn)生，故兩藥單獨(dú)或聯(lián)合使用均可減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)，保護(hù)CIN大鼠腎組織免受損傷，兩藥具有協(xié)同作用；與模型組比較，普羅布考組和聯(lián)合組大鼠Bax表達(dá)水平降低，Bcl-2及Bcl-2/Bax升高；山莨菪堿組大鼠Bcl-2/Bax亦升高，聯(lián)合組大鼠腎臟Bcl-2/Bax高于山莨菪堿組，提示普羅布考與山莨菪堿均可減少腎臟細(xì)胞凋亡數(shù)，減輕腎功能損害，而兩藥聯(lián)合應(yīng)用作用更強(qiáng)。

綜上，普羅布考、山莨菪堿聯(lián)用可減輕糖尿病CIN大鼠的腎臟損傷，其機(jī)制可能與抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)、上調(diào)Bcl-2/Bax，從而減少腎細(xì)胞凋亡有關(guān)，且效果優(yōu)于單藥應(yīng)用。

[1] Sessa M, Rossi C, Mascolo A, et al.Contrast media-induced nephropathy: how has Italy contributed in the past 30 years? A systematic review[J].Ther Clin Risk Manag, 2017,24(13):1463-1478.

[2] Goldenberg I, Matetzky S. Nephropathy induced by contrast media: pathogenesis, risk factors and preventive strategies[J]. CMAJ, 2005,172(11):1461-1471.

[3] 趙凱,楊萬(wàn)松,黨群,等.普羅布考對(duì)高脂血癥大鼠內(nèi)皮功能的影響[J].山東醫(yī)藥,2011,51(28):26-28.

[4] Chen C, Fu X, Li W, et al. Intracoronary administration of anisodamine and nicorandil in individuals undergoing primary percutaneous coronary intervention for acute inferior myocardial infarction: A randomized factorial trial[J]. Exp Ther Med, 2015,10(3):1059-1065.

[5] 焦占全.糖尿病大鼠造影劑急性腎損害機(jī)制及普羅布考保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D].天津：天津醫(yī)科大學(xué),2012:50-55.

[6] 賈辛未.辛伐他汀聯(lián)合山莨菪堿在冠脈介入治療中的心腎保護(hù)作用[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué),2010:104-136.

[7] Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-Delta Delta(T)Method[J]. methods, 2001,25(4):402-408.

[8] Zhao K, Li YJ, Gao QY. Role of red blood cell distribution width in predicting contrast induced nephropathy in patients with stable angina pectoris undergoing percutaneous coronary intervention[J]. Int J Cardiol, 2015, 197:276-278.

[9] Wasaki M, Sugimoto J, Shirota K. Glucose alters the susceptibility of mesangial cells to contrast media[J]. Invest Radiol,2001,36(7):355-362.

[10] Evans RG, Ince C, Joles JA, et al. Haemodynamic influences on kidney oxygenation: clinical implications of integrative physiology[J]. Clin Exp Pharmacol Physiol, 2013,40(2):106-122.

[11] Itoh Y, Yano T, Sendo T, et al. Clinical and experimental evidence for prevention of acute renal failure induced by radiographic contrast media[J]. J Pharmacol Sci, 2005,97(4):473-488.

[12] 趙凱,李永健.普羅布考對(duì)老年不穩(wěn)定型心絞痛患者對(duì)比劑腎損害的預(yù)防作用[J].重慶醫(yī)學(xué),2013,42(14):1593-1597.

[13] 汪雁博,傅向華,谷新順,等.山莨菪堿對(duì)ST段抬高心肌梗死患者直接經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療術(shù)后對(duì)比劑腎病的預(yù)防作用[J].中國(guó)介入心臟病學(xué)雜志,2012,20(6):312-316.

[14] 張杰,劉亞華,代正,等.山莨菪堿對(duì)心臟驟停豬肺氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡的影響[J].臨床急診雜志,2015,16(12):957-961.

[15] 趙凱,楊萬(wàn)松,李永健.普羅布考對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血管活性物質(zhì)的影響[J].江蘇醫(yī)藥,2013,39(2):135-137.

Effectofprobucolcombinedwithanisodamineoncontrast-inducednephropathyindiabeticrats

GAOQiaoying,LIUJinjin,WUTeng,ZHANGYi,LIDonghua,ZHAOKai

(TianjinNankaiHospital,Tianjin300100,China)

ObjectiveTo explore the synergistic effect of probucol combined with anisodamine on contrast-induced nephropathy (CIN) in diabetic rats.MethodsTotally 130 rats were selected to make the models of diabetic rats. The diabetic rat models were randomly divided into the model group, probucol group, anisodamine group, and the combination group (probucol combined with anisodamine), with 21 rats in each group. In addition, 10 normal rats were selected as the control group. After 9-week feeding, the diabetic rats in the probucol group and the combination group

intragastric administration of probucol (500 mg/kg) for 6 d. On the eighth day, rats in the anisodamine group and combination group were injected with anisodamine 100 μg/100g intraperitoneally before the preparation of CIN model. After 15 min, all diabetic rats were injected with urografin 0.8 mL/100 g intravenously to prepare the CIN models. One hour later, rats in the anisodamine group and combination group were given anisodamine 100 μg/100 g intraperitoneally for 7 times. The coomassie brilliant blue (CBB) was used to determine the urinary protein before and after injection with contrast medium 24 h. Blood samples were taken from the inner canthus vein for measuring the serum BUN and Scr levels. After weighed, the left and right kidneys of all rats were also weighed for calculating the renal index. Pathological changes of kidneys were observed by HE staining. The renal tissues were homogenized for testing nitric oxide (NO), nitric oxide synthase (NOS), superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA) and total antioxidant capacity (T-AOC). The expression levels of B cell lymphoma/leukemia-2 gene (Bcl-2) and Bcl-2-related X protein (Bax) mRNA were detected by fluorescent quantitative PCR.Results①The levels of BUN, Scr, and UAE in the model group were higher than those in the control group. The levels of BUN, Scr and UAE in the probucol group and combination group were lower than those in the model group, and the levels of BUN, Scr, and UAE in the combination group were lower than those of the anisodamine group (allP<0.05). ②The renal index in the model group was higher than that of the control group, and the renal index in the probucol group and the combination group was lower than that in the model group (allP<0.05). ③Compared with the model group, the NOS level increased and MDA decreased in the probucol group and anisodamine group (bothP<0.05). The levels of SOD and T-AOC in the combination group were higher than those in the probucol group and anisodamine group (bothP<0.05). ④Compared with the model group, the Bax expression decreased, the levels of Bcl-2 and the ratio of Bcl-2/Bax increased in the probucol group and combination group (allP<0.05), and the ratio of Bcl-2/Bax in the anisodamine group increased (P<0.05). The ratio of Bcl-2/Bax in the combination group was higher than that in the anisodamine group (P<0.05).ConclusionThe probucol combined with anisodamine can alleviate the renal injury of diabetic CIN rats. The mechanism may be related to the inhibition of oxidative stress and up-regulation of Bcl-2/Bax ratio, and the effect is superior to single drug application.

probucol; anisodamine; contrast-induced nephropathy; diabetes mellitus; oxidative stress; B cell lymphoma/leukemia-2 gene; Bcl-2 related X protein

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.46.002

R692.9；R818.03

A

1002-266X(2017)46-0007-05

天津市衛(wèi)生局科技基金項(xiàng)目(2014KZ050)。

高巧營(yíng)(1982-)，女，碩士，研究方向?yàn)樗幚韺W(xué)。 E-mail: 843262515@qq.com

趙凱(1980-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向?yàn)樾难軆?nèi)科學(xué)。E-mail: zhaokai155@sohu.com

2017-05-22)

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[1] 杜賈軍,孟龍,陳景寒,等.手輔助電視胸腔鏡食管切除胃食管胸內(nèi)吻合術(shù)[J].山東醫(yī)藥,2004,44(27):1-3.

[2] Takano M, Mizuno K, Okamatsu K, et al. Mechanical and structural characteristics of vulnerable plaques: analysis by coronary angioscopy and intravascular ultrasound[J]. J Am Coll Cardiol, 2002,38(1):99-104.

[3] 葉任高,陸再英.內(nèi)科學(xué)[M].5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:277-280.