白淑榮，沈 樂(lè)，陳 乾，楊 靜，耑 冰，王 艷，李 萍，楊 朝，郭東更，楊青蘭

原發(fā)性干燥綜合征相關(guān)間質(zhì)性肺疾病患者血清活性氧、轉(zhuǎn)錄因子κB及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1水平變化及其臨床意義研究

白淑榮1，沈 樂(lè)1，陳 乾1，楊 靜1，耑 冰1，王 艷1，李 萍1，楊 朝1，郭東更2，楊青蘭1

目的觀(guān)察原發(fā)性干燥綜合征相關(guān)間質(zhì)性肺疾病(pSS-ILD)患者血清活性氧(ROS)、轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)水平變化，并探討其臨床意義。方法選取2015年7月—2017年6月寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸科和風(fēng)濕科收治的女性原發(fā)性干燥綜合征(pSS)患者94例，其中單純pSS患者46例作為pSS組，pSS-ILD患者48例作為pSS-ILD組；另選取同期體檢健康女性50例作為對(duì)照組。采用免疫印跡法檢測(cè)抗干燥綜合征A(SSA)抗體、抗干燥綜合征B(SSB)抗體、抗Robert52(Ro52)抗體，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平；血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS及TGF-β1水平的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析。結(jié)果pSS組和pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽(yáng)性率高于對(duì)照組(P<0.05)；pSS組和pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。pSS組和pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于對(duì)照組，pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于pSS組(P<0.05)。Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS(r=0.95)及TGF-β1(r=0.98)水平呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論pSS-ILD患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平明顯升高，且血清NF-κB水平與血清ROS、TGF-β1水平有關(guān)，推測(cè)ROS-NF-κB-TGF-β1信號(hào)通路可能與pSS-ILD的發(fā)生有關(guān)。

干燥綜合征；肺疾病，間質(zhì)性；活性氧；轉(zhuǎn)錄因子κB；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1

原發(fā)性干燥綜合征(primary Sjogren′s syndrome，pSS)是一種主要累及淚腺、唾液腺等外分泌腺體的常見(jiàn)慢性自身免疫系統(tǒng)疾病[1]，可單獨(dú)發(fā)病，也可累及肺臟，表現(xiàn)為間質(zhì)性肺疾病(interstitial lung disease，ILD)。近年來(lái)，原發(fā)性干燥綜合征相關(guān)間質(zhì)性肺疾病(primary Sjogren′s syndrome associated interstitial lung disease，pSS-ILD)發(fā)病率不斷升高，目前其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，但肺纖維化是其致殘率和病死率升高的主要原因之一[2-3]?；钚匝?reactive oxygen species，ROS)是機(jī)體重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor beta 1，TGF-β1)是一種致纖維化效應(yīng)因子，二者均在肺纖維化形成過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，其可通過(guò)激活細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)而生成促炎遞質(zhì)，進(jìn)而介導(dǎo)炎性反應(yīng)。既往研究結(jié)果顯示，ROS、NF-κB、TGF-β1均參與肺纖維化形成過(guò)程[4-5]，但其與pSS-ILD是否有關(guān)目前尚未明確。本研究旨在觀(guān)察pSS-ILD患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年7月—2017年6月寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸科和風(fēng)濕科收治的女性pSS患者94例，均符合pSS診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，其中單純pSS患者46例(pSS組)、pSS-ILD患者48例(pSS-ILD組)，ILD的診斷參照2002年美國(guó)胸科學(xué)會(huì)/歐洲呼吸學(xué)會(huì)(ATS/ERS)制定的ILD診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有肺結(jié)核病史者；(2)合并慢性支氣管炎、肺氣腫、支氣管哮喘、支氣管擴(kuò)張、肺部腫瘤等呼吸系統(tǒng)疾病者；(3)合并慢性心、肝、腎功能不全者；(4)長(zhǎng)期吸煙者。另選取同期體檢健康女性50例作為對(duì)照組。3組受試者年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；pSS組和pSS-ILD組患者病程比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見(jiàn)表1)，具有可比性。

1.2 免疫印跡法檢測(cè)自身抗體譜 pSS患者于入院次日、健康體檢者于體檢當(dāng)天清晨采集空腹靜脈血3 ml，3 000 r/min離心15 min(離心半徑為10 cm)，分離血清置于-80 ℃冰箱中保存待測(cè)；采用深圳恒佳生物工程有限公司生產(chǎn)的ENA多肽抗體譜試劑盒檢測(cè)抗干燥綜合征A(SSA)抗體、抗干燥綜合征B(SSB)抗體及抗Robert52(Ro52)抗體，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，檢測(cè)結(jié)束后將顯色條帶與標(biāo)準(zhǔn)條帶卡比照。

表1 3組受試者一般資料比較

注：pSS=原發(fā)性干燥綜合征，pSS-ILD=原發(fā)性干燥綜合征相關(guān)間質(zhì)性肺疾??；a為F值；“-”表示無(wú)相關(guān)數(shù)據(jù)

1.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平 pSS患者于入院次日、健康體檢者于體檢當(dāng)天采集肘靜脈血5 ml，置于5 ml分離膠-促凝管中(操作過(guò)程中避免溶血)，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心15 min(離心半徑為10 cm)，留取上層血清置于1.5 ml EP管中，每個(gè)EP管分裝血清200 μl，做好標(biāo)記，采用ELISA試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司生產(chǎn))檢測(cè)血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平，并嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料分析采用χ2檢驗(yàn)；血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽(yáng)性率 3組受試者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中pSS組和pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽(yáng)性率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；pSS組和pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見(jiàn)表2)。

2.2 血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平 3組受試者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中pSS組和pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于對(duì)照組，pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于pSS組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表3)。

2.3 血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平呈正相關(guān)(r值分別為0.95、0.98，P<0.05，見(jiàn)圖1～2)。

表2 3組受試者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽(yáng)性率比較〔n(%)〕

Table2 Comparison of positive rates of anti-SSA antibody，anti-SSB antibody and anti-Ro52 antibody among the three groups

組別例數(shù)抗SSA抗體陽(yáng)性抗SSB抗體陽(yáng)性抗Ro52抗體陽(yáng)性對(duì)照組503(6 0)2(4 0)1(2 0)pSS組4644(95 7)a29(63 0)a32(69 5)apSS?ILD組4846(95 8)a30(62 5)a34(70 8)aχ2值114 9346 1761 06P值<0 05<0 05<0 05

注：SSA=干燥綜合征A，SSB=干燥綜合征B，Ro52=Robert52；與對(duì)照組比較，aP<0.05

Table3 Comparison of serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1among the three groups

組別例數(shù)ROSNF?κBTGF?β1對(duì)照組50447 01±68 3059 95±8 6862 21±11 90pSS組46712 31±92 11a310 10±29 81a196 34±23 80apSS?ILD組481073 10±75 80ab440 77±57 33ab248 83±24 59abF值773 001308 791054 36P值<0 05<0 05<0 05

注：ROS=活性氧，NF-κB=轉(zhuǎn)錄因子κB，TGF-β1=轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1；與對(duì)照組比較，aP<0.05；與pSS組比較，bP<0.05

注：NF-κB=轉(zhuǎn)錄因子κB，ROS=活性氧

圖1 血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS水平關(guān)系的散點(diǎn)圖

Figure1 Scatter plot for relationship between serum NF-κB level and serum ROS level in patients with pSS-ILD

注：TGF-β1=轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1

圖2 血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清TGF-β1水平關(guān)系的散點(diǎn)圖

Figure2 Scatter plot for relationship between serum NF-κB level and serum TGF-β1level in patients with pSS-ILD

3 討論

pSS是一種自身免疫系統(tǒng)疾病，好發(fā)于絕經(jīng)期之后或30～40歲女性，其發(fā)病率為0.3%～0.4%。pSS的典型臨床表現(xiàn)為口、眼干燥，并可累及腎臟、肺臟、神經(jīng)系統(tǒng)及消化系統(tǒng)等，其中肺臟是最常累及的器官之一，臨床表現(xiàn)為ILD。pSS-ILD患者早期呼吸道癥狀不明顯，病情可進(jìn)一步進(jìn)展為肺纖維化，進(jìn)而導(dǎo)致患者殘疾或死亡。

NF-κB是一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子，其可調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、酶類(lèi)、細(xì)胞黏附分子表達(dá)。NF-κB普遍存在于多種組織的多種細(xì)胞質(zhì)中，其受到氧自由基、內(nèi)毒素及紫外線(xiàn)等刺激后可激活，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子(如TGF-β1)產(chǎn)生。KWOK等[12]研究結(jié)果顯示，pSS患者唇腺組織中NF-κB水平較高。既往有研究顯示，博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠肺泡灌洗液中丙二醛、TGF-β1水平及P65水平升高，采用N-乙酰半胱氨酸治療后小鼠肺泡灌洗液中丙二醛、TGF-β1及P65水平均明顯降低，提示丙二醛可能通過(guò)激活NF-κB途徑而調(diào)節(jié)TGF-β1釋放，進(jìn)而導(dǎo)致肺纖維化[13]。

TGF-β1是一種致纖維化效應(yīng)因子，其在組織損傷早期及修復(fù)期均具有促肺纖維化作用[14]。在體和離體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，TGF-β1具有較強(qiáng)的促纖維化作用[5]。COTTIN等[15]、BEDARD等[16]研究結(jié)果顯示，采用環(huán)磷酰胺序貫治療的pSS-ILD患者血清及肺泡灌洗液中腫瘤壞死因子α(TNF-α)、TGF-β1、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)水平明顯降低，提示TNF-α、TGF-β1及MMP-9水平升高可能與pSS-ILD發(fā)病有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，pSS組、pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽(yáng)性率高于對(duì)照組，但pSS組和pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽(yáng)性率間無(wú)差異，提示抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體與ILD的發(fā)生及發(fā)展無(wú)關(guān)。本研究結(jié)果還顯示，pSS組和pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于對(duì)照組，pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于pSS組，且血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平呈正相關(guān)，提示血清ROS、NF-κB、TGF-β1水平可能參與pSS-ILD的發(fā)生。

綜上所述，pSS-ILD患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平明顯升高，且血清NF-κB水平與血清ROS、TGF-β1水平有關(guān)，推測(cè)ROS-NF-κB-TGF-β1信號(hào)通路可能與pSS-ILD的發(fā)生有關(guān)，但其具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。

作者貢獻(xiàn)：白淑榮進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)，研究的實(shí)施與可行性分析，撰寫(xiě)論文，對(duì)文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理；沈樂(lè)、楊靜、耑冰、王艷、李萍、郭東更、楊青蘭進(jìn)行數(shù)據(jù)收集、整理、分析；陳乾進(jìn)行結(jié)果分析與解釋?zhuān)粭畛?fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校。

本文無(wú)利益沖突。

[1]SEEGER W，ADIR Y，BARBERJ A，et al.Pulmonary hypertension in chronic lung diseases[J].J Am Coll Cardiol，2013，62(25 Suppl)：D109-116.DOI：10.1016/j.jacc.2013.10.036.

[2]KIMURA M，TANIGUCHI H，KONDOH Y，et al.Pulmonary hypertension as a prognostic indicator at the initial evaluation in idiopathic pulmonary fibrosis[J].Respiration， 2013，85(6)：456-463.DOI：10.1159/000345221.

[3]VALERIO C J，SCHREIBER B E， HANDLER C E，et al.Borderline mean pulmonary artery pressure in patients with systemic sclerosis：transpulmonary gradient predicts risk of developing pulmonary hypertension[J].Arthritis Rheum，2013，65(4)：1074-1084.DOI：10.1002/art.37838.

[4]WRIGHT J L，ZHOU S，CHURG A.Pulmonary hypertension and vascular oxidative damage in cigarette smoke exposed eNOS(-/-)mice and human smokers[J].Inhal Toxicol，2012，24(11)：732-740.DOI：10.3109/08958378.2012.715698.

[5]SUZUKI A，TANIGUCHI H，WATANABE N，et al.Significance of pulmonary arterial pressure as a prognostic indicator in lung-dominant connective tissue disease[J].PLoS One，2014，9(9)：e108339.DOI：10.1371/journal.pone.0108339.

[6]LATSI P I，DU BOIS R M， NICHOLSON A G，et al.Fibrotic idiopathic interstitial pneumonia：the prognostic value of longitudinal functional trends[J].Am J Respir Crit Care Med，2003，168(5)：531-537.

[7]RAGHU G，COLLARD H R，EGAN J J，et al.An official ATS/ERS/JRS/ALAT statement：idiopathic pulmonary fibrosis：evidence-based guidelines for diagnosis and management[J].Am J Respir Crit Care Med，2011，183(6)：788-824.DOI：10.1164/rccm.2009-040GL.

[8]SHIBOSKI S C，SHIBOSKI C H，CRISWELL L A，et a1.AmericaIl Couege of Rheu matology classification criteria for Sjogren′s syndrome：adatadriven，expert consensus apporach in the Sjogren′s Intemational collaborative clinical Alliance cohort[J].Arthritis Care Res，2012，64：475-487.

[9]LIU R M.Oxidative stess，plasminogen activator inhibitor-1，and lung fibrosis[J].Antioxid Redox-Signal，2008，10(2)：303-319.

[10]WATANABE N，SAKAMOTO K，TANIGUCHI H，et al.Efficacy of combined therapy with cyclosporine and low-dose prednisolone in interstitial pneumonia associated with connective tissue disease[J].Respiration，2014，87(6)：469-477.DOI：10.1159/000358098.

[11]VIJ R，STREK M E.Diagnosis and treatment of connective tissue disease associated interstitial lung disease[J].Chest，2013，143(3)：814-824.DOI：10.1378/chest.12-0741.

[12]KWOK S K，CHO M L，HER Y M，et al.TLR2 ligation induces the production of IL-23/IL-17 via IL-6，STAT3 and NF-kB pathway in patients with primary Sjogren′s syndrome[J].Arthritis Res Ther，2012，14(2)：R64.DOI：10.1186/ar3780.

[13]Guideline of respiratory function tests-spirometry，flow-volume curve，diffusion capacity of the lung[J].Nihon Kokyuki Gakkai Zasshi，2004，Suppl：1-56.

[14]MATHAI S C，HASSOUN P M.Pulmonary arterial hypertension in connective tissue diseases[J].Heart Fail Clin，2012，8(3)：413-425.DOI：10.1016/j.hfc.2012.04.001.

[15]COTTIN V，LE PAVEC J， PRéVOT G，et al.Pulmonary hypertension in patients with combined pulmonary fibrosis and emphysema syndrome[J].Eur Respir J，2010，35(1)：105-111.DOI：10.1183/09031936.00038709.

[16]BEDARD K，KRAUSE K H.The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases：physiology and pathophysiology[J].Physiol Rev，2007，87(1)：245-313.

ChangesandClinicalSignificanceofSerumLevelsROS，NF-κBandTGF-β1inPatientswithPrimarySjogren′sSyndromeAssociatedInterstitialLungDisease

BAIShu-rong1，SHENYue1，CHENQian1，YANGJing1，ZHUANBing1，WANGYan1，LIPing1，YANGZhao1，GUODong-geng2，YANGQing-lan1

1.DepartmentofRespiratoryMedicine，thePeople′sHospitalofNingxiaHuiAutonomousRegion，Yinchuan750001，China2.DepartmentofRheumatology，thePeople′sHospitalofNingxiaHuiAutonomousRegion，Yinchuan750001，China

BAIShu-rong,E-mail：jzuxueer@163.com

ObjectiveTo observe the changes of serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1in patients with primary Sjogren′s syndrome associated interstitial lung disease(pSS-ILD)，to explore the clinical significance.MethodsFrom July 2015 to June 2017，a total of 94 female patients with primary Sjogren′s syndrome(pSS)were selected in the Departments of Respiratory Medicine and Rheumatology，the People′s Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region，thereinto 46 patients with isolated pSS were served as A group，the other 48 patients with pSS-ILD were served as B group；meanwhile a total of 50 healthy women were selected as control group.Western blotting method was used to detect anti-SSA anti-body，anti-SSB antibody and anti-Ro52 antibody，enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1；Pearson correlation analysis was used to analyze the correlations of serum NF-κB level with serum levels of ROS and TGF-β1in patients with pSS-ILD.ResultsPositive rates of anti-SSA antibody，anti-SSB antibody and anti-Ro52 antibody in A group and B group were statistically significantly higher than those in control group(P<0.05)，while no statistically significant differences of positive rate of anti-SSA antibody，anti-SSB antibody or anti-Ro52 antibody was found between A group and B group(P>0.05).Serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1in A group and B group were statistically significantly higher than those in control group，meanwhile serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1in B group were statistically significantly higher than those in A group(P<0.05).Pearson correlation analysis results showed that，serum NF-κB level was positively correlated with serum level of ROS(r=0.95)，of TGF-β1(r=0.98)in patients with pSS-ILD，respectively(P<0.05).ConclusionSerum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1are significantly elevated in patients with pSS-ILD，and serum NF-κB level is correlated with serum level of ROS，of TGF-β1，respectively，it is presumed that ROS-NF-κB-TGF-β1signal pathway may correlated with the occurrence of pSS-ILD..

Sjogren′s syndrome；Lung diseases，interstitial；Reactive oxygen species；Nuclear factor-κB；Transforming growth factor beta 1

寧夏自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(NZ15184)

1.750001 寧夏銀川市，寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科

2.750001 寧夏銀川市，寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院風(fēng)濕科

白淑榮，E-mail：jzuxueer@163.com

R 593.22 R 563.13

A

10.3969/j.issn.1008-5971.2017.11.011

白淑榮，沈樂(lè)，陳乾，等.原發(fā)性干燥綜合征相關(guān)間質(zhì)性肺疾病患者血清活性氧、轉(zhuǎn)錄因子κB及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1水平變化及其臨床意義研究[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志，2017，25(11)：42-45.[www.syxnf.net]

BAI S R，SHEN Y，CHEN Q，et al.Changes and clinical significance of serum levels ROS，NF-κB and TGF-β1in patients with primary Sjogren′s syndrome associated interstitial lung disease[J].Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease，2017，25(11)：42-45.

2017-09-23；

2017-11-16)

謝武英)