俞慧慧 趙宏利

1 浙江省慈溪市中醫(yī)醫(yī)院 浙江 慈溪 315300

2 浙江省杭州市中醫(yī)院 杭州 310007

盆舒顆粒對模型大鼠盆腔粘連形成及病理形態(tài)學(xué)的影響*

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1 浙江省慈溪市中醫(yī)醫(yī)院 浙江 慈溪 315300

2 浙江省杭州市中醫(yī)院 杭州 310007

目的：觀察中藥復(fù)方盆舒顆粒對模型大鼠盆腔粘連形成及病理形態(tài)學(xué)的影響，以及經(jīng)轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）抗體干預(yù)下產(chǎn)生的影響。方法：選用成年雌性SD大鼠50只，隨機(jī)分為空白對照組、模型對照組、中藥治療組、抗體干預(yù)組、抗體干預(yù)+中藥治療組。采用機(jī)械損傷復(fù)制盆腔粘連大鼠模型，灌胃給藥14天。開腹觀察大鼠子宮、輸卵管標(biāo)本的大體情況，比較各組盆腔粘連Philips評分結(jié)果，并進(jìn)行病理檢測。結(jié)果：治療3組與模型組比較，盆腔炎性病變及粘連程度輕，Philips評分顯著降低（P＜0.01）。結(jié)論：盆舒顆粒及TGF-β1抗體能有效預(yù)防和減少模型大鼠盆腔組織粘連，且聯(lián)合應(yīng)用效果優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用。

盆腔粘連 盆舒顆粒 大鼠 病理形態(tài)學(xué)

盆腔粘連為婦科常見病、多發(fā)病，其臨床表現(xiàn)以性生活不適、慢性盆腔疼痛為主，?？砂橛性陆?jīng)失調(diào)、不孕等病癥，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。本研究根據(jù)盆腔粘連的臨床表現(xiàn)，研制以通經(jīng)養(yǎng)血、散結(jié)除濕治法的中藥復(fù)方盆舒顆粒。在臨床取得確切療效的基礎(chǔ)上進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)研究，進(jìn)一步驗(yàn)證盆舒顆粒防治粘連的療效，為盆舒顆粒的作用機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物：SD大鼠，雌性，50只，體重230±20g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物實(shí)驗(yàn)條件合格證號：SYXK(浙)2008-0113。

1.2 主要藥物與試劑：盆舒顆粒（由當(dāng)歸、炒白芍、炒白術(shù)、川芎、澤瀉、茯苓、延胡索、莪術(shù)、王不留行、川牛膝、紅藤組成,配伍比例為2：6：2：1.2：2：2：2：2：2：2：2：3），中藥顆粒劑，由杭州市中醫(yī)院提供。兔抗鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 模型制備：將50只大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為空白對照、模型組、中藥治療組、TGF-β1抗體干預(yù)組、TGF-β1抗體干預(yù)+中藥治療組。用2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠(30mg/kg)，常規(guī)消毒后取下腹正中切口約2cm，開腹暴露并固定子宮，用手術(shù)刀輕刮漿膜表面，長約2cm，共12次，至漿膜表面明顯充血，雙側(cè)子宮用1號手術(shù)線輕扎，使并攏，逐層關(guān)腹，消毒術(shù)區(qū)。需TGF-β1抗體干預(yù)的兩組實(shí)驗(yàn)大鼠在關(guān)腹前將TGF-β1抗體注入盆腔，關(guān)腹[1-2]。

2.2 給藥方案：造模后開始灌胃給藥1ml/100g，1次/d，共14天。中藥治療組、TGF-β1抗體干預(yù)+中藥治療組：每日按體表面積給予等效計(jì)量的盆舒顆粒；空白對照組、模型對照組、抗體干預(yù)下對照組給予等容量生理鹽水。

2.3 指標(biāo)測定：分述如下。

2.3.1 大體觀察：末次用藥24h后如前法麻醉開腹，觀察記錄子宮、輸卵管標(biāo)本的外觀、顏色、粘連情況。

2.3.2 粘連分級：參照Philips分級標(biāo)準(zhǔn)[3]對粘連程度進(jìn)行分級。0級：完全無粘連，漿膜面光滑；Ⅰ級：盆腔臟器與周圍組織少量粘連，疏松易分，無滲血；Ⅱ級：盆腔臟器與周圍組織輕到中度粘連，分離時局部有滲血；Ⅲ級：盆腔臟器與周圍組織廣泛粘連，較難分離。

2.3.3 病理檢測：摘取雙側(cè)子宮置于4%中性甲醛中固定、常規(guī)切片、HE染色、光鏡下觀察子宮病理形態(tài)變化。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。等級變量用秩和檢驗(yàn)。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大體觀察：抗體干預(yù)組及中藥治療組各1只大鼠因術(shù)后灌胃不當(dāng)死亡予以剔除?？瞻讓φ战M大鼠子宮形態(tài)大小正常，與周圍組織無粘連；模型組子宮充血明顯，質(zhì)硬腫脹，部分模型子宮表面水腫，與周圍組織粘連廣泛；中藥治療組大鼠子宮輕度充血，部分模型子宮表面水腫，與周圍組織粘連較疏松；抗體干預(yù)組大鼠子宮輕度充血，部分模型子宮表面水腫，個別與周圍組織粘連廣泛；抗體干預(yù)+中藥治療組大鼠子宮輕度充血，部分有水腫，與周圍組織粘連較疏松。觀察結(jié)果顯示，盆舒顆粒及TGF-β1抗體均能大鼠使模型子宮充血、腫脹、組織粘連程度有不同程度的減輕，粘連評分降低，兩者聯(lián)合應(yīng)用與盆舒顆粒單獨(dú)應(yīng)用無明顯差異。

3.2 大鼠盆腔粘連Philips評分結(jié)果：見表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)秩和檢驗(yàn)表明，模型組及3個治療組盆腔粘連Philips評分結(jié)果與空白對照組比較均有極顯著性差異（P＜0.01）；中藥治療組、抗體干預(yù)組與模型組比較，均具有顯著性差異（P＜0.05）；抗體干預(yù)+中藥治療組與模型組比較有極顯著性差異（P＜0.01）；抗體干預(yù)+中藥治療組與抗體干預(yù)組比較差異具有顯著性（P＜0.05）；3個治療組之間比較均無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 各實(shí)驗(yàn)組大鼠盆腔粘連Philips評分結(jié)果

3.3 光鏡下病理形態(tài)觀察：空白對照組子宮表面單層上皮組織層完整，無炎細(xì)胞浸潤。與空白對照組比較，模型組子宮表面漿膜層厚度增加，伴大量炎癥細(xì)胞浸潤，部分上皮細(xì)胞水腫變性、壞死脫落。周圍結(jié)締組織增生、毛細(xì)血管擴(kuò)張，有肉芽腫形成，伴有較多纖維組織增生及纖維粘連帶形成。與模型組對比，3個治療組子宮漿膜層厚度薄，伴中等量炎癥細(xì)胞浸潤，周圍結(jié)締組織中可見散在肉芽腫，伴有多少不等的纖維組織增生及纖維粘連帶形成。中藥治療組與抗體干預(yù)組比較，漿膜層炎性改變及纖維組織增生無明顯差異，抗體干預(yù)+中藥治療組較單獨(dú)治療組炎癥細(xì)胞浸潤及肉芽腫減少，伴少量纖維組織增生及纖維粘連帶。見圖1。

圖1 各組大鼠子宮病理形態(tài)學(xué)表現(xiàn)（HE，×2）

病理形態(tài)觀察結(jié)果顯示，盆舒顆粒及TGF-β1抗體均能減輕模型大鼠子宮漿膜層上皮細(xì)胞水腫變性、壞死脫落，炎性細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管擴(kuò)張，纖維組織增生及粘連帶形成等病變程度，但尚不能恢復(fù)至正常形態(tài)。兩者聯(lián)合應(yīng)用效果優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用。

4 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，盆腔粘連多由手術(shù)創(chuàng)傷、感染、子宮內(nèi)膜異位癥、異物反應(yīng)等引起，其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，目前認(rèn)為有多種細(xì)胞因子參與調(diào)控，其中多功能細(xì)胞因子TGF-β1起著較關(guān)鍵的作用[4-5]。

筆者認(rèn)為，本病發(fā)病或?yàn)檎龤獗咎?，易感邪毒，傷及沖任胞宮，氣血運(yùn)行失暢；或?yàn)榻?jīng)行產(chǎn)后攝生不潔或手術(shù)創(chuàng)傷，風(fēng)寒濕熱、蟲毒之邪乘虛內(nèi)侵，傷及沖任督帶，累及胞宮胞絡(luò)。臨床上以濕瘀互結(jié)為多見，病勢纏綿難解，久之耗傷氣血，終致虛實(shí)錯雜。本病屬本虛標(biāo)實(shí)之證，病機(jī)要點(diǎn)不離虛、濕、瘀三端。因此，課題組確立通經(jīng)養(yǎng)血，散結(jié)除濕的治療原則，創(chuàng)立了盆舒顆粒。本方為當(dāng)歸芍藥散加味，其中白芍、當(dāng)歸、川芎為血分藥，有養(yǎng)血和血，宣滯止痛之效；茯苓、白術(shù)、澤瀉為氣分藥，具有健脾運(yùn)濕，利水散結(jié)的功用；延胡索、莪術(shù)活血散結(jié)，行氣止痛；王不留行、川牛膝活血通絡(luò)，下瘀通經(jīng)；紅藤清熱利濕，敗毒散瘀。諸藥合用，氣血同治，攻補(bǔ)兼施，扶正不斂邪，祛邪不傷正。

本研究結(jié)果提示，盆舒顆粒及TGF-β1抗體對模型大鼠盆腔組織形態(tài)均具有保護(hù)作用，能有效預(yù)防和減少粘連形成，且聯(lián)合應(yīng)用效果優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用，具體的分子作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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杭州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目盆舒顆粒對TGF-β1多克隆抗體干預(yù)下大鼠盆腔粘連的影響，編號：2011KJJ19；杭州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目盆舒顆粒對子宮粘連模型大鼠子宮內(nèi)膜TGF-β1/SMAD3的影響，編號：20130733Q19

# 通訊作者：趙宏利，E-mail：z6hl@163.com

2017-08-07