高紅梅

摘 要： 目的：重組蛋白多肽藥物生物等效性研究的必要性、可行性和方法學(xué)的發(fā)展概況和實(shí)例探討；方法：利用生物等效性評(píng)價(jià)的方法以研究ELISA測(cè)定為例，生物等效性對(duì)于生物藥物和化學(xué)藥物同等重要，也可采用生物檢測(cè)法測(cè)定活性濃度；結(jié)果與結(jié)論：對(duì)市場(chǎng)較為常見(jiàn)的rhIL-11生物等效性比較和不同免疫分析法測(cè)定ELISA靈敏度與測(cè)定范圍比較，結(jié)果仿制藥的生物等效性靈敏度、測(cè)定范圍均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞： 生物等效性；重組蛋白或多肽；ELISA

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)建設(shè)的不斷深入，醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)出現(xiàn)了新的格局態(tài)勢(shì)，新品種、新生產(chǎn)物不斷產(chǎn)生，仿制藥作為其中重要的一個(gè)產(chǎn)物，不得不引起有關(guān)部門(mén)的高度重視，因此，我國(guó)出臺(tái)了關(guān)于仿制藥品的法律規(guī)定，即《仿制藥品管理?xiàng)l例》其中對(duì)方只要的生物等效性、評(píng)價(jià)方法等做出了嚴(yán)格的規(guī)定。本文以研究的目的是重組蛋白多肽藥物生物等效性研究的必要性、可行性和方法學(xué)的發(fā)展概況和實(shí)例探討，利用生物等效性評(píng)價(jià)的方法以研究ELISA測(cè)定為例，生物等效性對(duì)于生物藥物和化學(xué)藥物同等重要，也可采用生物檢測(cè)法測(cè)定活性濃度，并對(duì)市場(chǎng)較為常見(jiàn)的rhIL-11生物等效性比較和不同免疫分析法測(cè)定ELISA靈敏度與測(cè)定范圍比較。

1、重組蛋白多肽藥物生物等效性發(fā)展現(xiàn)狀

FDA將重組蛋白多肽藥物生物等效性定義為：相對(duì)生物等效性、生物利用度的評(píng)價(jià)涉及到的比較一個(gè)參比品（R）與受試品（T）是否一致，決定因素在于比較仿制藥品和參比藥品、臨床實(shí)驗(yàn)藥品和上市藥品、生產(chǎn)工藝或標(biāo)準(zhǔn)改變前后的各項(xiàng)指標(biāo)。生物等效性、生物利用度密不可分但是生物等效性也會(huì)依附于某個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（預(yù)先設(shè)定生物等效性），所以需要計(jì)算、評(píng)估、判斷生物藥物可信區(qū)間。Fathiroudsari M 等[1]研究表明：大腸桿菌生產(chǎn)的rerelease通常是由大長(zhǎng)歌桿菌產(chǎn)生的，沒(méi)有寡糖側(cè)鏈、清除率較低，當(dāng)除去糖基化和指狀結(jié)構(gòu)區(qū)后，Krigle 2和纖維蛋白的結(jié)合增強(qiáng)了，并且很好地加強(qiáng)了纖維蛋白選擇性?，F(xiàn)將GI公司、深圳百泰生物藥業(yè)有限公司、上海永日藥品貿(mào)易公司、北京醫(yī)進(jìn)生物技術(shù)（有限）公司的rhIL-11（血小板生成素）的生物等效性對(duì)比結(jié)果如下表1。

2、重組蛋白多肽藥物生物等效性研究方法

重組蛋白多肽類(lèi)生物藥的生物等效性研究必須建立專(zhuān)屬性、高靈敏的測(cè)定方法，常用方法有三種：生物測(cè)定與免疫學(xué)分析法、同位素標(biāo)記法和物理化學(xué)分離法。在常規(guī)研究中選用一種或幾種方法并用的分析手段，以期得到完整精確的數(shù)據(jù)。Hill D E等[2]學(xué)者研究表明，同位素標(biāo)記法可以取得良好的臨床效果，但是在實(shí)際應(yīng)用中多選擇生物測(cè)定與免疫學(xué)分析法。

2.1 建立專(zhuān)屬性高靈敏的方法學(xué) 建立可行可靠的QC（檢測(cè)質(zhì)控樣品），目的是檢測(cè)方法的有效性，主要考察指標(biāo)是最低定限量、特異性試驗(yàn)、線(xiàn)性范圍、精密度、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)和準(zhǔn)確度檢查等。

2.2 生物測(cè)定與免疫分析方法 ①酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA），是最常見(jiàn)的測(cè)定抗原的方法，通常采用“夾心餅干”免疫技術(shù)，最終可以測(cè)得未知樣品的抗原濃度和生成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。②高靈敏度（HS）-ELISA法，靈敏度很高，容易將還原型NADP脫磷酸（底物存在）產(chǎn)生還原型NADH，而NADH可以成為輔助因子，進(jìn)而組成新的酶系統(tǒng)。③化學(xué)發(fā)光ELISA法，應(yīng)用“夾心餅干”技術(shù)將被測(cè)抗原特異的單抗預(yù)包被在微孔板上，含被測(cè)抗原的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品加入孔內(nèi)，促進(jìn)抗原與固化抗體結(jié)合?，F(xiàn)將不同免疫分析方法測(cè)定ELISA靈敏度和測(cè)定范圍比較如表1。

3 結(jié)果與結(jié)論

目前，建立對(duì)仿制重組蛋白多肽藥物的生物等效性評(píng)價(jià)是科學(xué)研究的主要方向，仿制藥與化學(xué)藥品有很多相同之處，對(duì)于某些仿制藥除了濃度要求外還有生物等效性的要求。通過(guò)本文對(duì)市場(chǎng)較為常見(jiàn)的rhIL-11生物等效性比較和不同免疫分析法測(cè)定ELISA靈敏度與測(cè)定范圍比較，結(jié)果仿制藥的生物等效性靈敏度、測(cè)定范圍均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。生物制品與化學(xué)藥品的的差別在于生物活性、免疫學(xué)測(cè)定方法精密度較低，化學(xué)藥品在測(cè)定時(shí)高效液相色譜法測(cè)定誤差較大，所以要達(dá)到生物等效性需要采集樣本數(shù)量更多。

參考文獻(xiàn)

[1] Fathiroudsari M， Akhaviantehrani A， Maghsoudi N. Comparison of Three Escherichia coli Strains in Recombinant Production of Reteplase[J]. Avicenna Journal of Medical Biotechnology， 2016， 8（10）：166-168.

[2] Hill D E， Vasdev N， Holland J P. Evaluating the accuracy of density functional theory for calculating 1 H and 13 C NMR chemical shifts in drug molecules[J]. Computational & Theoretical Chemistry， 2015， 1051：161-172.endprint