農向+曠歡+趙樂樂

摘要：通過飼喂小鼠紫莖澤蘭乙醇提取物及左缺諾孕酮炔雌醚進行毒性試驗，結果表明：紫莖澤蘭和左缺諾孕酮炔雌醚對小鼠小鼠肝中乙酰膽堿轉移酶活力在不同藥劑作用的結果是F值>F0.01，P<0.01，有極顯著性差異，在小鼠肝中乙酰膽堿轉移酶活力在藥劑持續(xù)時間作用的結果是F0.05

關鍵詞：紫莖澤蘭；肝；肝；乙酰膽堿轉移酶活力

引言

紫莖澤蘭是一種外來物種[1]，它對本地的植物構成嚴重的危害，對土壤形成一種絕對占有的優(yōu)勢，它的擴散趨勢還未減弱，拿樂山為例它的入侵已成定局，風險評估是會成為樂山外來物種入侵近幾年的前五名[7]。紫莖澤蘭[2]的乙醇提取物開發(fā)成新型的殺蟲劑[5]已是當代一個熱點，本實驗為了證明紫莖澤蘭對于小鼠的毒性大小，有利于更好的為紫莖澤蘭殺蟲劑的生產實用提供依據。左缺諾孕酮炔雌醚是避孕藥主要成分，對小鼠的卵巢功能有影響，20mg/kg劑量降低了雌性鼠的生育率和小鼠的出生時的死亡率，但5mg/kg劑量對母鼠沒有傷害性[6]，但同時經過了臨床試驗對人體的無害性，副反應發(fā)生相對較低且有良好的耐受性[3]。本實驗為了證明紫莖澤蘭提取物和左缺諾孕酮炔雌醚對小鼠的重要器官肝和腎是否有影響。采用了空白對照來進行對照，同時保持灌胃藥物的持續(xù)時間對照，肝和腎是哺乳動物的重要解毒和排毒的器官。肝是體內重要的解毒器官，腎雖然也有解毒功能但主要還是起排毒的作用。乙酰膽堿轉移酶的作用，它是合成乙酰膽堿的一種酶，乙酰膽堿是生物體一種重要的神經傳遞物質[1，120]。

1 材料與方法

1.1 材料

紫莖澤蘭的乙醇提取液（2g/ml純濃液和1g/ml稀釋一倍）。左缺諾孕酮炔雌醚，華潤紫竹藥業(yè)有限公司[8]。各種酶購于南京建成科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 測定方法

蛋白質測定用考馬斯亮藍法，乙酰膽堿轉移酶活力測定采用乙酰膽堿轉移酶測試盒[9]。

1.2.2 喂藥方法

將24只老鼠分成四組，對照組6只小鼠不灌胃藥只提供和別的小組實驗同樣的水和飼料，2g/ml紫莖澤蘭濃度和1g/ml紫莖澤蘭濃度各5只，為公鼠，左缺諾孕酮炔雌醚組5只，為母鼠。從第一天8月3號解剖第一次的，8月4號開始灌胃的四組小鼠中的三組要灌胃對應藥物的，6天后中各取一只進行解剖測定，記錄數據。同時剩下的三組要灌胃藥物的鼠都分別灌胃2g/ml紫莖澤蘭，1g/ml紫莖澤蘭，左缺諾孕酮炔雌醚，同時對照組和其他組一樣繼續(xù)保持供水和飼料。6天后，重復過程，先解剖測量，記錄數據，再灌胃。灌胃三次，最后一次測定后不進行灌胃等鼠恢復6天再進行解剖測定。

1.2.3 樣品制備方法

每組取一只小鼠，解剖，快速取其肝臟，用人工研磨方法，在冰塊上充分研磨，并按照測試盒要求加入超純水混勻，提取需要的部分和含量在離心機上進行設置好的轉速和時間離心。取上清液先測定蛋白質的含量，然后按照測試盒中測定小鼠肝臟乙酰膽堿轉移酶酶的活力。

2 實驗結果

2.1小鼠肝中的乙酰膽堿轉移酶含量方差分析表

通過方差分析得知，F(xiàn)A=7.70471，F(xiàn)B=5.298761，對于藥劑的影響，由于dfA=3，dfe=12查F值表得，F(xiàn)0.05=3.49 F0.01=5.95，F(xiàn)A>F0.01，P<0.01，表明藥劑對小鼠體內的肝中的乙酰膽堿轉移酶的影響差異極顯著，對于持續(xù)時間，根據dfB=4，dfe=12，查F值表得，F(xiàn)0.05=3.26 F0.01=5.41，F(xiàn)0.05

2.2.小鼠腎和肝中的的乙酰膽堿轉移酶活力

乙酰膽堿轉移酶活力在小鼠肝中與不同的藥劑的影響是差異極顯著，就是小鼠肝中的乙酰膽堿轉移酶活力與不同藥劑作用的影響有關，而在乙酰膽堿轉移酶活力在小鼠肝中與灌胃藥物持續(xù)時間的影響是差異顯著，那就有95%的把握說小鼠肝中的乙酰膽堿轉移酶活力與灌胃藥物持續(xù)時間有關，這從側面也驗證了小鼠的腎和肝的作用，功能不一樣，在解毒方面肝的作用要更大。

2.3不同藥劑對小鼠肝中的乙酰膽堿轉移酶活力影響趨勢

圖1可以看出，小鼠肝中乙酰膽堿轉移酶活力在沒有喂藥時基本一致，藥劑中2g/ml濃度的紫莖澤蘭在第一次喂藥之后對肝中的乙酰膽堿轉移酶活力的影響是在沒有喂藥的空白對照組的較低水平上的，第二次喂藥后含量開始快速上升，但還是低于空白對照組的數值，第三次含量持續(xù)上升，但一直都是低于對照組的，當不喂藥時含量就開始有一些下降。左缺孕酮避孕藥對小鼠肝中的乙酰膽堿轉移酶活力的影響是在第一次喂藥比沒有喂藥的空白對照低出很多，第二次喂藥后即有顯著上升，第三次繼續(xù)上升，但數值一直低于空白對照組的活力，停止喂藥乙酰膽堿轉移酶活力的水平出現(xiàn)急劇下降。1g/ml濃度的紫莖澤蘭組在第一次喂藥后，與空白對照相比就遠遠的低于對照水平，第二次喂藥后含量保持上升，第三次喂藥活力上升的速率要慢一點，至喂藥截止恢復期時還在上升，但它的數值始終在對照組水平之下。2g/ml濃度的紫莖澤蘭和左缺孕酮避孕藥變化趨勢基本一致，出現(xiàn)的乙酰膽堿轉移酶活力變化趨勢較大。1g/ml濃度的紫莖澤蘭從第一次喂藥至第三次喂藥都是呈現(xiàn)上升趨勢，乙酰膽堿轉移酶活力的總體變化趨勢是較大的。但三種藥劑的乙酰膽堿轉移酶都是始終低于對照組的乙酰膽堿轉移酶活力的。

3.結論

紫莖澤蘭提取物對小鼠體內肝中的乙酰膽堿轉移酶活力有顯著性，其他的各項變化均無顯著性差異，所以紫莖澤蘭的2g/ml，1g/ml濃度和左缺諾孕酮炔雌醚對小鼠有輕微的影響但基本不構成危害[13]。而1g/ml濃度的紫莖澤蘭則對小鼠的影響要更小。所以紫莖澤蘭和左缺諾孕酮炔雌醚對小鼠影響不大，與參考文獻中對小鼠的的肝腎有損害，且有輕微中毒現(xiàn)象[14]基本一致，以此作為紫莖澤蘭環(huán)保型殺蟲劑的毒性試驗的依據。

參考文獻：

[1]Oelrichs P B，Calanasan C A，MacLeod J K，Seawright A A，Ng J C. Isolation of a compound from Eupatorium adenophorum （Spreng.） [Ageratina adenophora （Spreng.）] causing hepatotoxicity in mice.[J]. Natural toxins，1995，3（5）

[2]張顯理，段玉海，吳永峰，王萬寧，曹文麗.人用不育劑對小鼠繁殖的影響[J].寧夏大學學報（自然科學版），2005，（01）：71-74.

[3]陳麗剛.短效復方口服避孕藥Yasmin的臨床研究[D].華中科技大學，2006.

[4]羅嶼，藏宇，鐘遠等新型殺蟲劑對蚯蚓超顯微結構影響的研究[J]，電子顯微學報，2002，21（5）；513-514.

[5]農向.紫莖澤蘭提取物對動物寄生螨類的殺滅效果及殺蟲活性成分研究[D].四川農業(yè)大學，2013.

[6]陳思東，許雅，曾轉萍，楊翌.左炔諾孕酮炔雌醚抗雌鼠生育的實驗研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008，（12）：2491-2492+2604.

[7]易建平，印麗萍，李大春，李風婷，葉軍.四川樂山地區(qū)紫莖澤蘭的入侵定殖和風險評估[J].植物檢疫，2003，（06）：333-336+319-386.

[8]何玉仙，王長方，陳鋒，楊秀娟，翁啟勇.殺蟲劑處理對甜菜夜蛾幼蟲體內酶活性的影響[J].江西農業(yè)大學學報，2003，（06）：896-899.

[9]杜淑紅，陳劍杰.分光光度法測定海蜇中過氧化氫的含量[J]. 廣東微量元素科學，2012，（11）：9-11.

[10]李妙魚.乙酰膽堿酯酶抑制劑的合成、表征及其對電鰻AChE抑制活性的研究[D].山西大學，2004.

[11]楊帆，帥霞.桃蚜高效氯氰菊酯抗藥性與乙酰膽堿酯酶的關系[J].植物保護，2008，（05）：60-62.

[12]呂林蘭，楊家新，董學興，黃金田，呂富.馬拉硫磷對雙齒圍沙蠶乙酰膽堿酯酶和過氧化氫酶的影響[J].農業(yè)環(huán)境科學學報，2010，（03）：431-436.

[13]謝全喜，張建梅，王文春，韓廣泉，王凱，谷巍.紫莖澤蘭脫毒草粉對小白鼠的亞慢性毒性試驗研究[J].廣東飼料，2014，（05）：25-27.

[14]董強，趙寶玉，顧強，王蕾，盧巖，史志誠.紫莖澤蘭全草對小鼠毒性試驗[J].西北大學學報（自然科學版），2011，（03）：469-472.

[15]簡淑娟.HPLC外標法測定左炔諾孕酮炔雌醚片含量[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2009，（02）：43-44.

作者簡介：

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農向：男，1980.11，博士，副教授，研究方向為天然藥物和林業(yè)病蟲害，endprint