摘 要：近幾年，受諸多因素的影響，水細(xì)菌滋生，致使人類的生活飲用水遭到污染。據(jù)相關(guān)研究人員證明，多種病危生物的主要傳播媒介之一是生活飲用水。因此，對于生活飲用水中細(xì)菌的檢測工作，已逐漸引起國家及社會各界人士的關(guān)注。此外，國民對于水資源的相關(guān)檢測部門的檢測技術(shù)提出了更高的要求。細(xì)菌總數(shù)，水資源清潔度的關(guān)鍵性指標(biāo)，宏基因組技術(shù)的應(yīng)用，利于對水資源中的細(xì)菌進(jìn)行快速檢測。本文先是對宏基因組技術(shù)在自來水檢測中應(yīng)用的意義進(jìn)行了簡述，后又對該技術(shù)需要的材料及操作方法展開了深度探究，此次探究的主要目的是為了加強(qiáng)相關(guān)技術(shù)的應(yīng)用，進(jìn)而為我國水資源的檢測工作提供幫助。

關(guān)鍵詞：宏基因組技術(shù)；國標(biāo)法；水質(zhì)檢測

中圖分類號：R123.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1004-7344（2018）18-0337-02

前 言

水資源，萬物生存與發(fā)展的關(guān)鍵性資源。在人類的生活中，水資源具有重要的作用。在眾多的資源當(dāng)中，生活飲用水是人類生活中不可或缺的資源之一。目前，我國的飲用水主要來源于自來水，而在自來水環(huán)境中，是細(xì)菌最容易滋生的地方。文章依據(jù)宏基因組技術(shù)對自來水中細(xì)菌檢測的重要性，進(jìn)一步對該技術(shù)的操作方式及所需要的相關(guān)材料進(jìn)行了分析，總結(jié)出了相應(yīng)的結(jié)果及討論，對宏碁因組技術(shù)的應(yīng)用與推廣具有理論性意義，對我國水資源的細(xì)菌檢測工作具有現(xiàn)實(shí)性的指導(dǎo)意義。

1 宏基因組技術(shù)在自來水檢測中應(yīng)用的意義

生活中，大多數(shù)微生物傳播的主要途徑是生活飲用水。對生活飲用水微生物的檢測是監(jiān)測生活飲用水質(zhì)量的重要方式和手段，細(xì)菌總數(shù)檢測生活飲用水清潔度檢測的重要指標(biāo)。生活應(yīng)用水主要是通過水泵站汲取地表水、地下水，由自來水廠根據(jù)國家飲用水的標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行沉淀、消毒、過濾等工序處理后，通過配置水泵站供給用戶。

目國標(biāo)上對微生物總數(shù)的測定方法主要是用固體營養(yǎng)瓊脂在36℃的環(huán)境中，培養(yǎng)48h后，對微生物菌落進(jìn)行計(jì)算。按照國標(biāo)慣用的方法，菌落的培養(yǎng)以及計(jì)算需要在相對無菌的環(huán)境中，并且需要在48h后，才能得到檢測的效果。同時，加上厭氧菌和兼性厭氧菌生長較為緩慢，使得檢測的結(jié)果誤差較大，尤其是將樣品稀釋高倍數(shù)后進(jìn)行的檢測。本文采用紅基因組技術(shù)的，采用基因組結(jié)合濾膜過濾收集抽提試劑盒的方法，來對自來水中的細(xì)菌中的基因組進(jìn)行提出。通過對自來水中的細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行檢測，細(xì)菌數(shù)量越多，基因組的含量也越高，是成正比的關(guān)系。這種方法或許可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)自來水細(xì)菌總數(shù)檢測的方法。

2 材料與方法

2.1 樣品來源

自來水樣品來源土默特左旗，土默特左旗位于內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市。

2.2 方 法

2.2.1 國標(biāo)細(xì)菌總數(shù)檢測的方法

國標(biāo)檢測的方法，是檢測每毫升子阿里水中含有的細(xì)菌菌落總數(shù)，并進(jìn)行三次做重復(fù)的檢測，在進(jìn)行檢測實(shí)驗(yàn)時，將樣品原液及樣品稀釋到10-1、10-2三組進(jìn)行檢測實(shí)驗(yàn)。同時在進(jìn)行兩組平行實(shí)驗(yàn)，取平均的結(jié)果。

2.2.2 計(jì)算國標(biāo)法試驗(yàn)樣品的體積

國標(biāo)法進(jìn)行檢測的樣品體積通常為1L，將1L100CFU/mL的自來水則算成本次細(xì)菌菌落總數(shù)檢測實(shí)驗(yàn)的樣品體積，分別提出限值體積、大于該體積以及小于該體積的自來水樣品中細(xì)菌的總基因。

2.2.3 國標(biāo)法細(xì)菌總基因提出的方法

國標(biāo)法在進(jìn)行細(xì)菌總基因提出的方法：①通過直徑為0.22um的醋酸纖維過濾膜在真空的環(huán)境中，抽濾收集微生物，并用沖洗、潔凈的尖頭鑷子吧過濾膜去下。②通過細(xì)菌菌落總數(shù)基因組提取試劑盒，從而過濾膜上細(xì)菌菌落總數(shù)基因組。將過濾膜中防止在20ml的無菌離心管中，并確保雙體積試劑加入到每一個步驟中，并且在過濾膜取出棄掉后，才能加入無水乙醇。

2.2.4 電泳分析宏基因組

對提取出的細(xì)菌落總基因的進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，瓊脂糖凝膠為1%，80V，65mA，30min，上樣量均為10ul。并且，需要在紫外凝膠成像儀現(xiàn)，對電泳的結(jié)果進(jìn)行拍照分析。在這個限制總基因組主條帶和總基因主條帶的亮度比值需啊喲通過lmageJ圖像分析如軟件進(jìn)行分析。最后，剩余的水樣總基因組應(yīng)保存在零下20℃的環(huán)境中，為后續(xù)驗(yàn)證提供樣品。

2.2.5 實(shí)際樣品檢測

與2015年7月在內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市土默特左旗采集自來水樣品，并使用國標(biāo)法和宏基因組的方法進(jìn)行進(jìn)行檢測，為驗(yàn)證新方法的可信度。二次檢測的參考值采用的之前保存的國標(biāo)限值水樣基因組，進(jìn)行檢測自來水樣品體積為1L，水樣做三組平行實(shí)驗(yàn)，并取均值。

3 結(jié)果與討論

3.1 結(jié) 果

3.1.1 國標(biāo)限值體積的確定結(jié)果

本次實(shí)驗(yàn)檢測中，國標(biāo)法檢測下，最終確定樣品中的菌落總數(shù)為（165±5）CFU/ml。按照GB/t5750.12-2006的規(guī)定限制在100CFU折算，則1L的自來水樣品相當(dāng)于本次檢測樣品的600ml中漢以后的細(xì)菌菌落總數(shù)。

3.1.2 不同體積樣品基因組提出結(jié)果分析

本次檢測分別在6、8、10進(jìn)行取水實(shí)驗(yàn)，提出水樣體積分別為500ml、600ml、700ml以及1l自來水細(xì)菌菌落總基因組。通過進(jìn)行1%的瓊脂糖凝膠電泳，得出電泳條帶清晰，如圖1所示。

3.1.3 實(shí)際水樣檢測結(jié)果

三組自來水樣品細(xì)菌菌落總基因組的條帶亮度與國標(biāo)限值菌落總基因組的亮度相比，比值為別為2.5、2.08和2.17，取三組平均值。國標(biāo)法檢測的結(jié)果為（168±50）CFU/ml，與宏基因組技術(shù)的檢測結(jié)果一直，由此得出，新采集的自來水樣品微生物超標(biāo)。

3.2 討 論

本文對某小區(qū)生活飲用水的檢測結(jié)果不容樂觀，由于飲用水中含有大量的微生物，使得人容易被感染，造成腸道疾病。因此，加強(qiáng)公共場所生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測勢在必行。國標(biāo)檢測法檢測獲得的結(jié)果是在48h之后，在這48h內(nèi)，可能微生物的感染已經(jīng)發(fā)生，并不能實(shí)施反映水中的水質(zhì)情況。因此，繼續(xù)采用新的檢測方法。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用宏基因組檢測技術(shù)，對水質(zhì)進(jìn)行檢測，檢測的時間不會超過2h，與國標(biāo)法相比，檢測的時間大大縮短，能夠及時的反映水質(zhì)情況，為預(yù)防飲用水衛(wèi)生時間起到積極的作用。

4 結(jié)束語

綜上所述，本文對某小區(qū)生活飲用水的檢測結(jié)果不容樂觀，由于飲用水中含有大量的微生物，使得人容易被感染，造成腸道疾病。因此，加強(qiáng)公共場所生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測勢在必行。國標(biāo)檢測法檢測獲得的結(jié)果是在48h之后，在這48h內(nèi)，可能微生物的感染已經(jīng)發(fā)生，并不能實(shí)施反映水中的水質(zhì)情況。因此，繼續(xù)采用新的檢測方法。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用宏基因組檢測技術(shù)，對水質(zhì)進(jìn)行檢測，檢測的時間不會超過2h，與國標(biāo)法相比，檢測的時間大大縮短，能夠及時的反映水質(zhì)情況，為預(yù)防飲用水衛(wèi)生時間起到積極的作用。

參考文獻(xiàn)

[1]燕平梅，荊雪嬌，李艷琴，等.基于宏基因組學(xué)技術(shù)分析“泡菜老湯”發(fā)酵甘藍(lán)原核微生物群落結(jié)構(gòu)[J].食品工業(yè)科技，2018，01（02）：119～123.

[2]唐樂麗，王曉萌，吳秀玲，等.宏基因組文庫新型β-葡萄糖苷酶的篩選、克隆及酶學(xué)性質(zhì)分析[J].食品科學(xué)，2018，01（04）：118～124.

收稿日期：2018-5-23