龍兆博 唐曉梅 司婷婷 秦 娟 王三喜

·臨床研究·

細(xì)胞塊制片免疫組化對胸腹腔積液轉(zhuǎn)移性腺癌的診斷價值

龍兆博 唐曉梅 司婷婷 秦 娟 王三喜

目的探討細(xì)胞塊制片免疫組化對胸腹腔積液轉(zhuǎn)移性腺癌的診斷價值。方法收集胸腹腔積液患者100例，經(jīng)過穿刺法獲取胸腹腔積液標(biāo)本100 ml，病理檢查，給予常規(guī)涂片和細(xì)胞塊制片，均聯(lián)合免疫組化法，比較兩種檢測方法相關(guān)蛋白陽性、陰性以及不確定性，計算細(xì)胞陽性率。結(jié)果細(xì)胞塊檢測陽性率為48.0%，高于常規(guī)檢測的34.0%，不確定性比例為0，低于常規(guī)的22.0%(P<0.05)；兩種方法對良性組織檢測結(jié)果顯示：CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、NapsinA、E-cad均呈低表達(dá)，WT-1、Calretinin、CK5/6均呈高表達(dá)，惡性組織檢測顯示CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、NapsinA、E-cad均呈高表達(dá)，并且細(xì)胞塊法陽性率均高于常規(guī)涂片法(P<0.05)，WT-1、Calretinin、CK5/6均呈低表達(dá)；常規(guī)涂片對不確定組織檢測結(jié)果：WT-1、Calretinin、CK5/6陽性率均較高，其他均為低陽性率，CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4在轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤中陽性率均較高，并且細(xì)胞塊陽性率均高于相應(yīng)的常規(guī)涂片法(P<0.05)。結(jié)論細(xì)胞塊制片免疫組化對胸腹腔積液轉(zhuǎn)移性腺癌的診斷具有重要意義，各指標(biāo)間聯(lián)合可以判斷腫瘤類型。

細(xì)胞塊；免疫組化；胸腹腔積液轉(zhuǎn)移性腺癌

胸腹腔積液是臨床上多種炎癥和惡性腫瘤常見的伴隨癥狀，而且部分是首先癥狀，大部分惡性腫瘤晚期均會產(chǎn)生胸腹腔積液，其中細(xì)胞可以來源于肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃腸道腫瘤等[1]，臨床可以通過常規(guī)的涂片判斷細(xì)胞良惡性，但是部分腫瘤細(xì)胞不典型，診斷比較困難，在細(xì)胞學(xué)診斷工作中發(fā)現(xiàn)胸腹腔積液離心涂片細(xì)胞重疊，細(xì)胞少，陽性率低，部分難以確認(rèn)，即使診斷也不能確定腫瘤原發(fā)病灶，缺乏科學(xué)依據(jù)，因此國內(nèi)外學(xué)者探索有價值的方法[2]，近年來有研究資料表明，抗體組合在確定胸腹腔積液良惡性和惡性腫瘤原發(fā)病灶及制定治療方案具有重要意義[3]，本文通過收集我院2015年5月到2017年3月收治的可疑的100例胸腹腔積液惡性病例，采用細(xì)胞塊免疫組化檢測，探討其在胸腹腔積液轉(zhuǎn)移性腺癌患者匯總診斷意義，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2014年5月至2016年6月收治的診斷具有胸腹腔積液患者100例，其中男性56例，女性44例，年齡28～70歲，平均(45.45±3.46)歲，病程1～5年，平均(2.78±0.89)年，納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：①經(jīng)過明確診斷具有胸腹腔積液，并且可以收集到患者完整的檢查和疾病資料；②患者均為可疑惡性或者臨床懷疑惡性；③患者均進(jìn)行常規(guī)和細(xì)胞塊涂片檢查；④研究符合倫理道德，患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①明確胸腹腔積液病因者，并且已經(jīng)確認(rèn)良惡性者；②依從性差，或者拒絕參加研究者；③經(jīng)過評價患者生存時間<3個月者。

1.2 研究方法

患者均經(jīng)過穿刺法獲取胸腹腔積液標(biāo)本100 ml，送至病理科檢測，整個實驗過程由經(jīng)過專業(yè)訓(xùn)練的經(jīng)過培訓(xùn)的病理醫(yī)師進(jìn)行操作和結(jié)果判斷。標(biāo)本通過給予常規(guī)涂片和細(xì)胞塊制片，均聯(lián)合免疫組化法。

免疫組化法：采用SP法，具體操作方法和要求進(jìn)行，選用抗體為細(xì)胞角蛋白7(cytokeratin，CK7)、上皮細(xì)胞表面糖蛋白(MOC-31)、整合素蛋白αv(CD5)1、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1(thyroid transcription factor -1，TTF-1)、癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen，CEA)、CA125、腫瘤糖蛋白(Ber EP4)、Wilm’s 腫瘤基因-1(WT-1)、鈣結(jié)合蛋白(Calretinin)、細(xì)胞角蛋白(CK5/6)、足細(xì)胞結(jié)蛋白(Desmin)、NapsinA、E-cad等，均購自南京建成生物工程研究所，每項指標(biāo)均設(shè)置陽性和陰性對照，整個操作過程均按照試劑盒要求嚴(yán)格執(zhí)行。

常規(guī)涂片法：將胸腹腔積液裝入凍存管中，3000 rpm離心15 min，留取細(xì)胞沉渣做細(xì)胞涂片，染色光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和形狀，觀察細(xì)胞壞死情況等。

細(xì)胞塊制定方法：胸腹腔積液靜置1 h后棄掉上清液，收取全部沉淀，分別裝入試管，2 000 rpm，離心5 min，棄上清液，取部分沉淀涂片2張，剩余部分全部制作細(xì)胞塊，若為血性加入50%乙醇，去除紅細(xì)胞，2 000 rpm，離心5 min，棄上清液，加入沉淀物等量的蛋清液(雞蛋清和LBS按照12∶1混合而成)；加入95%乙醇離心2 000 rpm，離心5 min，等凝集成塊，用擦鏡紙包裹后放入包埋盒中，常規(guī)包埋、脫水切片。

1.3 研究指標(biāo)[5]

比較兩種檢測方法陽性、陰性以及不確定性，計算細(xì)胞陽性率；結(jié)果判斷：離心涂片，細(xì)胞塊HE切片，E-cad、CEA、CA125細(xì)胞膜為棕黃色顆粒為陽性，TTF-1和WT-1細(xì)胞核為棕黃色者為陽性，NapsinA細(xì)胞質(zhì)顯示棕黃色者為陽性，CK7細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜同時表現(xiàn)出棕黃色為陽性表達(dá)，Calretinin細(xì)胞核、細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)同時表現(xiàn)出棕黃色為陽性表達(dá)， 每張切片選取不重復(fù)視野觀察細(xì)胞陽性染色情況，比例≥10%者為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩種方法病理學(xué)檢測結(jié)果

細(xì)胞塊檢測陽性率為48.0%，高于常規(guī)檢測的34.0%，不確定性比例為0，低于常規(guī)的22.0%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，陰性率二者間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩種方法病理學(xué)檢測結(jié)果(例，%)

2.2 兩種檢測方法蛋白陽性檢測結(jié)果

良性組織兩種方法檢測顯示CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、NapsinA、E-cad陽性率均較低，WT-1、Calretinin、CK5/6均較高；惡性組織兩種方法檢測顯示CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、NapsinA、E-cad陽性率均較高，并且細(xì)胞塊法陽性率均高于常規(guī)涂片法(P<0.05)，WT-1、Calretinin、CK5/6均較低；不確定組織常規(guī)涂片WT-1、Calretinin、CK5/6陽性率均較高，其他陽性率均較低，見表2；CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4在轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤中陽性率均較高，并且細(xì)胞塊陽性率均高于相應(yīng)的常規(guī)涂片法(P<0.05)，WT-1、Calretinin、CK5/6在間皮瘤中常規(guī)涂片陽性率較高，見表3。

表3 轉(zhuǎn)移性肺癌和間皮瘤組織兩種方法檢測結(jié)果(例，%)

3 討論

本文漿膜腔中惡性腫瘤均為轉(zhuǎn)移性，漿膜腔中細(xì)胞學(xué)病理檢測對于惡性腫瘤診斷及腫瘤原發(fā)病灶的治療和預(yù)后評估具有重要意義，隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，精確醫(yī)療要求病理診斷既要確定腫瘤的良惡性，同時也要判斷腫瘤組織來源[6]，為組織的后續(xù)治療提供良好基礎(chǔ)，胸腹腔積液細(xì)胞塊免疫組化抗體選擇是診斷鑒別的關(guān)鍵，但是選擇合適抗體是建立在細(xì)胞形態(tài)和臨床病史，影像學(xué)檢查及相關(guān)實驗基礎(chǔ)上，才能使病理診斷更加精確，不能主觀選擇抗體，在胸腹腔積液中檢測中我選擇抗體主要有CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、WT-1、Calretinin、CK5/6、NapsinA、E-cad等，目前研究發(fā)現(xiàn)每種蛋白抗體均具有特殊對應(yīng)的癌癥，比如CA125主要針對女性患者，以排除暖巢癌和乳腺癌[7-8]。

本文通過收集100例胸腹腔積液標(biāo)本檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞塊檢測陽性率為48.0%，高于常規(guī)檢測的34.0%，說明細(xì)胞塊法較常規(guī)涂片更加靈敏，可以避免漏診或者誤診等現(xiàn)象發(fā)生等，對比兩種方法蛋白抗體顯示兩種方法在良性組織檢測顯示CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、NapsinA、E-cad陽性率均低表達(dá)，WT-1、Calretinin、CK5/6均高表達(dá)，而在惡性組織檢測結(jié)果與良性組織相反，并且惡性組織中CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4在轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤中陽性率均高表達(dá)，且細(xì)胞塊陽性率均高于相應(yīng)的常規(guī)涂片法，再次說明細(xì)胞快法具有較高診斷精確性，并且各種蛋白可以單獨診斷也可以聯(lián)合檢測對疾病診斷和篩選，其中CEA是是大腸癌組織產(chǎn)生的1種糖蛋白[9]，是1個廣譜性腫瘤標(biāo)志物，反映多種腫瘤的存在，對大腸癌、乳腺癌和肺癌的療效判斷；TTF-1是核轉(zhuǎn)錄蛋白，表達(dá)與肺、甲狀腺、上皮細(xì)胞及胚胎大腦的某些區(qū)域，組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)TTF-1在肺腺癌中敏感性和特異性較高[10]，間皮細(xì)胞中不表達(dá)，與本研究相同；NapsinA是1種新型的天門冬氨酸蛋白酶，正常情況下存在肺Ⅱ型肺泡上皮，部分Ⅰ型，研究發(fā)現(xiàn)在肺腺癌中特異表達(dá)，并且在TTF-1部分陰性組織中陽性表達(dá)，可以與TTF-1聯(lián)合使用用于肺源性肺腺癌診斷；CA125是上皮性卵巢，尤其是漿液性癌的主要標(biāo)志，敏感性高，但是特異性較差，粘液腫瘤不存在，CA125不僅是卵巢癌主要標(biāo)志，而且在子宮內(nèi)膜癌、宮頸腺癌、胰腺癌等癌癥中具有不同表達(dá)，因此需要和其他指標(biāo)聯(lián)合使用；臨床上對于CK7、MOC-31、CD51、Ber EP4、WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin、E-cad等均具有對應(yīng)的惡性腫瘤的診斷或者篩選，對于各指標(biāo)之間的聯(lián)合應(yīng)用還是需要更加長時間的研究[11-12]。

綜上所述，細(xì)胞塊制片免疫組化對胸腹腔積液轉(zhuǎn)移性腺癌的診斷具有重要意義，各指標(biāo)間聯(lián)合可以判斷腫瘤類型，并且各項抗體蛋白聯(lián)合應(yīng)用對于胸腹腔積液的良惡性及原發(fā)病灶的確認(rèn)具有中重要的診斷意義，其中TTF-1、CEA、CA125針對肺腺癌，CEA、CA125聯(lián)合使用鑒別卵巢漿液性癌輸卵管癌，E-cad可以確定胸腹腔積液良惡性，Calretinin用于間皮細(xì)胞癌等，組合抗體最大優(yōu)點為敏感性和特異性均高，病理診斷結(jié)果客觀、準(zhǔn)確，可靠，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景，但是臨床上還是存在一部分不能診斷的癌癥，需要進(jìn)一步深入研究。

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DiagnosticValueofImmunohistochemistryofCellMassinMetastaticAdenocarcinomaofAscites

LONGZhaobo,TANGXiaomei,SITingting,etal.

BaojiCentralHospital,Baoji,721000

ObjectiveTo evaluate the diagnostic value of immunohistochemistry of cell mass in metastatic adenocarcinoma of thoracic ascites.Methods100 patients with thoracic and ascites were collected.100 ml of ascites specimens,pathology test,given conventional smear and cell block production,were combined with immunohistochemical method,compared the 2 detection methods related protein positive rate,negative rate and uncertainty rate,calculate the positive rate of cells.ResultsThe positive rate of cell block test was 48.0%,higher than routine detection(34.0%),and the uncertainty ratio was 0.0,which was lower than that of routine 22.0% (P<0.05);The 2 methods of benign tissue test results showed:the expression of CK7,MOC-31,CD51,TTF-1,CEA,CA125,Ber EP4,NapsinA and E-cad were low,the level of WT-1,Calretinin and CK5/6 were highly expressed,the results of malignant tissue showed that CK7,MOC-31,CD51,TTF-1,CEA,CA125,Ber EP4,NapsinA and E-cad were highly expressed,and the positive rate of cell mass method was higher than that of conventional smear method (P<0.05),and WT-1,Calretinin and CK5/6 showed low expression;Routine smear on the uncertainty of tissue test results showed:The positive rate of WT-1,Calretinin,CK5/6 were higher,the other were low positive rate,The positive rate of CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4 in metastatic malignancy were higher,and the positive rate of cell mass was higher than that of conventional smear method (P<0.05).ConclusionImmunohistochemistry of cell mass is of great significance in the diagnosis of metastatic adenocarcinoma of thoracic and ascites.The combination of each index can judge the tumor type.

Cell block;Immunohistochemistry;Pleural effusion metastatic adenocarcinoma

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1787～1790)

寶雞市衛(wèi)生局科研項目(編號：2013-32)

721000 陜西省寶雞市人民醫(yī)院

王三喜

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.014

R730.261

A

1001-5930(2017)11-1787-04

2017-04-20

2017-08-28)

(編輯：吳小紅)