樂 飛 張經(jīng)宇 劉 偉 黃先明 羅文政 張 霞

甲狀腺癌中NF-κB p50、NF-κB p65的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系

樂 飛 張經(jīng)宇 劉 偉 黃先明 羅文政 張 霞

目的探討甲狀腺癌組織中NF-κB p50、NF-κB p65的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系。方法選取73例甲狀腺癌患者作為研究對(duì)象。采用免疫組化SP法檢測(cè)所有患者甲狀腺癌組織的NF-κB p50、NF-κB p65表達(dá)情況，并分析其與臨床特征的關(guān)系。結(jié)果①NF-κB p50表達(dá)陽性組與NF-κB p50表達(dá)陰性組之間性別、年齡、病理類型相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；NF-κB p50表達(dá)陽性組腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著高于NF-κB p50表達(dá)陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②NF-κB p65表達(dá)陽性組與NF-κB p65表達(dá)陰性組之間性別、年齡、病理類型相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；NF-κB p65表達(dá)陽性組腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著高于NF-κB p65表達(dá)陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③甲狀腺癌組織表達(dá)NF-κB p50與NF-κB p65呈顯著正相關(guān)(γs=0.653，P<0.05)。結(jié)論甲狀腺癌組織表達(dá)NF-κB p50、NF-κB p65與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，兩者可能在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮協(xié)同作用。

甲狀腺癌；NF-κB p50；NF-κB p65；免疫組化

甲狀腺癌是目前臨床頭頸部、內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，傳統(tǒng)臨床確診甲狀腺癌主要采用病理形態(tài)學(xué)檢查，但是該方法診斷某些不典型甲狀腺癌或者微小甲狀腺癌有一定的困難[1]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，分子生物學(xué)技術(shù)逐步應(yīng)用于臨床，其可能為甲狀腺癌的分子診斷、療效評(píng)估提供重要依據(jù)[2]。NF-κB是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，目前研究證實(shí)NF-κB失控與惡性腫瘤、炎癥、病毒感染、感染性休克等多種類型疾病有關(guān)，NF-κB家族成員在人體內(nèi)有5個(gè)亞單位，其中以p50、p65最為重要[3]。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2017年3月江西省腫瘤醫(yī)院收治的73例甲狀腺癌患者作為研究對(duì)象，患者均經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)檢查確診，且既往無甲狀腺手術(shù)史。73例甲狀腺癌患者中男性20例、女性53例；年齡18～76歲，平均(44.8±12.7)歲；病理類型：乳頭狀癌42例、濾泡癌14例、髓樣癌17例；腫瘤直徑0.4～3.5 cm，平均(1.7±1.5)cm；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例、無轉(zhuǎn)移36例。

1.2 方法

1.2.1 NF-κB p50以及NF-κB p65表達(dá)的免疫組化檢測(cè) 組織切片60 ℃烘烤30 min → 二甲苯(Ⅰ)脫蠟15 min →二甲苯(Ⅱ)脫蠟15 min → 無水乙醇(Ⅱ)5 min → 無水乙醇(Ⅰ)5 min → 95%乙醇5 min → 85%乙醇5 min → 75%乙醇5 min → 磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次，每次5 min → 在電熱手提式壓力蒸汽滅菌器中用檸檬酸抗原修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù)，當(dāng)有蒸汽冒出2 min后，取出冷卻 → PBS洗滌3次，每次5 min → 去除多余液體，置于濕盒，滴加3%過氧化氫去離子水，孵育10 min → PBS洗滌3次，每次5 min → 去除多余液體，置于濕盒，滴加羊血清工作夜，孵育15 min → 滴加50 μl一抗稀釋液，稀釋劑為PBS，稀釋比例為1∶100，4 ℃冰箱過夜 → 恢復(fù)室溫1 h，PBS洗滌3次，每次5 min → 置于濕盒，滴加生物素化二抗工作液，孵育15 min → PBS洗滌3次，每次5 min → 置于濕盒，滴加辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記鏈霉素液，孵育15 min → PBS洗滌3次，每次5 min → 置于濕盒，滴加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑50 μl，當(dāng)細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色時(shí)將切片浸入自來水中終止顯色，流水沖洗5 min → 蘇木素復(fù)染1 min，流水沖洗5 min → 1%鹽酸乙醇分化數(shù)1～2 s ， 流水洗滌20 min→ 75%乙醇脫水3 min → 95%乙醇脫水3 min → 無水乙醇(Ⅰ)脫水3 min → 無水乙醇(Ⅱ)脫水3 min → 二甲苯(Ⅰ)透明10 min → 二甲苯(Ⅱ)透明10 min → 中性樹膠封片 → 鏡下觀察結(jié)果。

1.2.2 結(jié)果判斷及研究對(duì)象分組 每例標(biāo)本選10個(gè)高倍視野，每次觀察100個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞<5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分；染色程度：細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核基本不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將上述兩項(xiàng)評(píng)分結(jié)果相乘，0～1分為陰性，2～3分為弱陽性，4～6分為陽性，>6分為強(qiáng)陽性[4]。根據(jù)NF-κB p50檢測(cè)結(jié)果將甲狀腺癌患者分為2組，NF-κB p50評(píng)分0～1分為NF-κB p50表達(dá)陰性組，2～9分為NF-κB p50表達(dá)陽性組。NF-κB p65表達(dá)陰性組、NF-κB p65表達(dá)陽性組的判斷及分組方法與NF-κB p50一致。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間性別、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，采用χ2檢驗(yàn)；組間年齡、腫瘤直徑比較，采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NF-κB p50表達(dá)陽性組與NF-κB p50表達(dá)陰性組臨床特征的比較

NF-κB p50表達(dá)陽性組與NF-κB p50表達(dá)陰性組之間性別、年齡、病理類型相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；NF-κB p50表達(dá)陽性組腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著高于NF-κB p50表達(dá)陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 NF-κB p50表達(dá)陽性組與NF-κB p50表達(dá)陰性組臨床特征的比較

2.2 NF-κB p65表達(dá)陽性組與NF-κB p65表達(dá)陰性組臨床特征的比較

NF-κB p65表達(dá)陽性組與NF-κB p65表達(dá)陰性組之間性別、年齡、病理類型相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；NF-κB p65 表達(dá)陽性組腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著高于NF-κB p65表達(dá)陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3 甲狀腺癌組織表達(dá)NF-κB p50與NF-κB p65的相關(guān)性分析

經(jīng)分析，甲狀腺癌組織表達(dá)NF-κB p50與NF-κB p65呈顯著正相關(guān)性(γs=0.653，P<0.05)。

表2 NF-κB p65表達(dá)陽性組與NF-κB p65表達(dá)陰性組臨床特征的比較

3 討論

甲狀腺癌是目前臨床上最常見的甲狀腺惡性腫瘤，約占全身惡性腫瘤的1%，但是近年來其發(fā)病率增長快速，因此在臨床上亦越來越常見[5]。與其他惡性腫瘤一樣，病理形態(tài)學(xué)檢查是甲狀腺癌確診最主要的方法，但該方法不適用于某些不典型甲狀腺癌或者微小甲狀腺癌，此時(shí)分子生物學(xué)技術(shù)被寄予厚望。

NF-κB是一種存在于真核細(xì)胞中的重要的核轉(zhuǎn)錄因子，它通過結(jié)合啟動(dòng)子區(qū)的固定核苷酸序列發(fā)揮啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄作用，因此其在細(xì)胞增殖與分化，腫瘤形成、侵襲、轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮十分重要的功能[6]。此外，NF-κB還參與細(xì)胞對(duì)自由基、紫外線照射、細(xì)胞因子、細(xì)菌或病毒抗原等刺激的反應(yīng)，并且在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)感染的反應(yīng)過程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用[7]。目前臨床亦已經(jīng)形成共識(shí)，就是NF-κB失控與惡性腫瘤、炎癥、病毒感染、感染性休克、等多種類型疾病有關(guān)。進(jìn)一步研究認(rèn)為，NF-κB家族成員在人體內(nèi)有5個(gè)亞單位，分別為Rel、RelB、p50、p52、p65，其中p50是DNA結(jié)合部位，而p65則通過Rel 同源結(jié)構(gòu)域的協(xié)調(diào)作用增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄活性，并促進(jìn) p50與DNA的結(jié)合[8]，因此NF-κB p50、NF-κB p65在NF-κB家族中最為重要。

目前NF-κB p50、NF-κB p65表達(dá)檢測(cè)已廣泛應(yīng)用于乳腺癌、肝癌、食管鱗癌、胃癌等多種惡性腫瘤，但其在甲狀腺癌中表達(dá)的研究報(bào)道較少。Pyo等[9]報(bào)道，74.6%的甲狀腺乳頭狀癌患者表達(dá)NF-κB p65，當(dāng)腫瘤直徑>1 cm時(shí)，NF-κB p65表達(dá)陽性率更高，且NF-κB p65表達(dá)陽性組與NF-κB p65表達(dá)陰性組之間甲狀腺外擴(kuò)散、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、BRAF(V600E)突變差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。秦陽等[10]報(bào)道，甲狀腺癌NF-κB p50、NF-κB p65表達(dá)陽性率分別為73.00%、74.00%，甲狀腺非癌組織NF-κB p50、NF-κB p65陽性率顯著低于癌組織。在本研究中，73例甲狀腺癌患者接受NF-κB p50、NF-κB p65表達(dá)檢測(cè)，結(jié)果顯示甲狀腺癌組織表達(dá)NF-κB p50、NF-κB p65與患者性別、年齡、病理類型無相關(guān)，而與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)性。分析其原因，可能是NF-κB p50、NF-κB p65在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了協(xié)同作用所致，但是兩者之間的具體作用機(jī)制有待臨床進(jìn)一步研究。

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ExpressionofNF-κBp50andNF-κBp65inThyroidCarcinomaandItsRelationshipwithClinicalFeatures

LEFei，ZHANGJingyu，LIUWei,etal.

JiangxiCancerHospital,Nanchang，330029

ObjectiveTo investigate the expression of NF-κB p50 and NF-κB p65 in thyroid carcinoma and its relationship with clinical features.Methods73 cases of thyroid carcinoma were selected,and the expressions of NF-κB p50 and NF-κB p65 in all thyroid cancer tissues were detected by immunohistochemical SP method,and the relationship between expressions of NF-κB p50 and NF-κB p65 and clinical characteristics were analyzed.Results①There were no significant differences in the gender,age and pathological type between NF-κB p50 positive-expression group and NF-κB p50 negative-expression group(P>0.05),the tumor diameter and lymph node metastasis of NF-κB p50 positive-expression group were significantly higher than those of NF-κB p50 negative-expression group,respectively(P<0.05).②There were no significant differences in the gender,age and pathological type between NF-κB p65 positive-expression group and NF-κB p65 negative-expression group(P>0.05),the tumor diameter and lymph node metastasis of NF-κB p65 positive-expression group were significantly higher than those of NF-κB p65 negative-expression group,respectively(P<0.05).③The expression of NF-κB p50 was positively correlated with NF-κB p65 in thyroid carcinoma tissues (γs=0.653,P<0.05).ConclusionThe expression of NF-κB p50 and NF-κB p65 in thyroid cancer tissues is closely related to tumor diameter and lymph node metastasis,and both of them may play a synergistic role in the occurrence and development of thyroid cancer,as well as lymph node metastasis.

Thyroid cancer;NF-κB p50;NF-κB p65;Immunohistochemistry

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1768～1770)

江西省衛(wèi)計(jì)委科技支撐項(xiàng)目(編號(hào)：20165396)

330029 江西省腫瘤醫(yī)院(樂 飛，黃先明，羅文政，張 霞)；330006 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院(張經(jīng)宇)；330006 江西省婦幼保健院(劉 偉)

張 霞

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.008

R736.1

A

1001-5930(2017)11-1768-03

2017-07-18

2017-08-29)

(編輯：甘艷)