李歐

【摘要】中藥化學(xué)成分組成復(fù)雜，分析中存在諸多問題，超高效液相色譜、質(zhì)譜技術(shù)在中藥化學(xué)成分分析中的大量應(yīng)用，使在分析速度、分離度及靈敏度方面有了顯著的提高。

【關(guān)鍵詞】中藥成分分析；超高效液相色譜；質(zhì)譜

1前言

中醫(yī)藥是我國勞動人民幾千年來，與疾病斗爭積累下的寶貴財富。中藥所含化學(xué)成分群是其防治疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)，但中藥組成十分復(fù)雜，化學(xué)成分種類多，部分成分化學(xué)結(jié)構(gòu)、性質(zhì)相近、有效成分不明確、含量低近痕量等復(fù)雜性存在。因此中藥成分分析存在諸多問題，如分離難度大、分析時間長、檢測限不夠靈敏等困難。這些問題在中藥成分分析中是普遍存在，對中藥成分有重要影響。這些問題是中藥成分分析要解決的關(guān)鍵問題，也是未來發(fā)展的一個方向。

2 UPLO在中藥化學(xué)成分的分析

隨著超高效液相色譜（ultraperformance liquid chromatography，UPLC）儀在2004年的出現(xiàn)，以及隨之而來的快速高效液相色譜分離技術(shù)的發(fā)展與成熟，有效地克服了傳統(tǒng)的高效液相色譜（HPLC）在分析過程中存在的劣勢，使得中藥化學(xué)成分分析迎來了高效、高通量的發(fā)展階段，在分析速度、分離度及靈敏度方面有了顯著的提高。

UPLC的分離原理與傳統(tǒng)的HPLC相同，色譜分離度隨色譜柱填料顆粒粒徑的降低而提高。當(dāng)固定相的粒徑為亞2μm填料時，一條幾乎平行于橫軸的板高一流速（H-μ）線，可以認(rèn)為流速與板高幾乎無關(guān)。UPLC正是用1.7μm填料顆粒來改善柱效，使得不損失高分離度又能優(yōu)化流速、提高分析速度成為可能。與傳統(tǒng)高效液相色譜相比較，超高壓液相色譜亞2gm粒徑填料提供的柱效比5μm粒徑填料提高3倍。

金高娃等使用HPLC分析樣品，在40min完成分析，共35個峰，而采用UPLC分析時，樣品在20min內(nèi)就完成分析，共39個峰。如果僅考慮與HPLC相同的分離效果，UPLC的分析時間還能進(jìn)一步縮短，通過提高流速來實現(xiàn)。Nguyen等檢測4種尼泊金酯類同系物，采用UPLC（1.71ttm固定相色譜柱）其分析速度比同樣性質(zhì)，而粒徑為5um的色譜柱提高了8倍，且是保持分離度不變的情況。

超高壓液相色譜增大了比表面積的方式，是使用亞2pm多孔微球填料。而峰容量隨著填料顆粒的比表面積的增大而增大，分離能力也隨之提高，能分辨出更多的色譜峰，得到的樣品信息量也更多。另外，由于亞2pm粒徑填料的色譜柱有更高的柱效，得出的色譜峰寬更窄，峰高增加，靈敏度也隨之提高。UPLC在獲得了更高的柱效與更快的分離速度時，靈敏度也提高。

金高娃等使用HPLC分析樣品，8min到10min只有9個色譜峰，而采用UPLC分析時，8min到10min共23個色譜峰。此外UPLC進(jìn)樣量為3pL時，最高峰的吸收值為3.5AU，而HPLC進(jìn)樣量10pL時，與UPLC中對應(yīng)峰的吸收值為1.7AU，經(jīng)過換算，UPLC的靈敏度是HPLC的7倍左右。UPLC的高靈敏度優(yōu)勢，就HPLC檢測不到或吸收值很小的峰來說更加明顯。如Yμ等檢測大鼠血漿中所含混合藥物采用UPLC/MS/MS進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)靈敏度提高了5～10倍。

UPLC對樣品高靈敏度的檢測限，依賴于一個高靈敏度的檢測器。質(zhì)譜分析能得到物質(zhì)的化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)的相關(guān)信息，通過測定樣品離子的質(zhì)量和強度實現(xiàn)的一種分析方法。具有高分離能力、高靈度、和極強的專屬性等特點。

Liu等為測定、鑒定丹參中的酚酸，建立了LC-DAD/ESI-MSn方法，采用負(fù)模式推斷了丹參樣品中的原兒茶酸、丹參素、咖啡酸、紫草酸等酚酸的碎裂機理；共鑒定出42種酚酸成分，其中包括首次報道的16種低豐度組分。李坤平等利用UPLC/ESI-TOF-MS/MS分析蛇床子提取物中香豆素類化合物進(jìn)行快速分析與鑒定，最終推斷出歐前胡素、佛手苷內(nèi)酯、蛇床子素、花椒毒酚和花椒毒素5種香豆素類成分。張維冰等利用超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法測定亳菊、滁菊、貢菊和杭菊中多酚類化合物，鑒定出了10種咖啡?；鼘幩犷惢衔铩?2種黃酮類化合物。4種菊花中多酚類化合物的含量合格，多酚類化合物總量貢菊>杭菊>滁菊>毫菊。各種類咖啡?；鼘幩峒包S酮化合物的組成和含量差異顯著。王菲等利用超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）同時測定甘草、西洋參、三七、人參、丹參5種中藥材中25種農(nóng)藥和3種有毒代謝物殘留物，方法簡單、快速、靈敏，為快速篩查中藥材中三唑類殺菌劑和三嗪類除草劑的農(nóng)藥殘留量提供了依據(jù)。

氣相色譜法檢測揮發(fā)性成分氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)更是對揮發(fā)性成分的重要表征和鑒定的有效手段，具有速度快，靈敏度高的優(yōu)勢。萬益群等利用氣相色譜一質(zhì)譜法測定中藥中殘留的13種有機磷和有機氮類農(nóng)藥，為同時分析中藥中多種類型農(nóng)藥提供了新方法。華永麗等利用GC-MS建立當(dāng)歸及其不同炮制品揮發(fā)油化學(xué)指紋圖譜，篩選出當(dāng)歸及其不同炮制品的12個潛在標(biāo)志物，并且鑒定出11個化合物。劉文涵等采用頂空液液萃取/氣相色譜一質(zhì)譜（HS-LP-LPE/GC-MS）聯(lián)用法，鑒定出中藥白術(shù)中33個揮發(fā)性成分。

3結(jié)語

UPLC因其進(jìn)樣體積小，分離速度快，靈敏度高等優(yōu)點，近幾年在藥物分析領(lǐng)域中的快速應(yīng)用和推廣，展現(xiàn)出其廣闊的應(yīng)用前景。中藥快速定性定量分析提供了一種高效、準(zhǔn)確的分析技術(shù)。隨著色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的日益成熟，質(zhì)譜技術(shù)會越來越多地應(yīng)用到相關(guān)領(lǐng)域當(dāng)中，實現(xiàn)中藥分析的高靈敏度。