陳榮建,歐靜,王麗娟,龍海燕,熊賢榮,熊丹
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桃葉杜鵑菌根苗對干旱脅迫的生理響應
陳榮建,歐靜*,王麗娟,龍海燕,熊賢榮,熊丹
(貴州大學林學院,貴州 貴陽 550025)
以桃葉杜鵑為材料,接種4種(TY02、TY21、TY29、TY35)杜鵑花類菌根(ERM)真菌,以不接種處理為對照(CK),進行干旱脅迫,之后再復水,研究接種ERM真菌桃葉杜鵑的葉片相對含水量、滲透調節(jié)物質、SOD活性、MDA含量、光合色素等生理生化指標的變化。結果表明:接種ERM真菌能有效提高桃葉杜鵑葉片相對含水量,降低葉片水分飽和虧缺,在第15天接種TY29處理桃葉杜鵑葉片的含水量較對照增加了91.62%,復水后,接種TY35處理桃葉杜鵑葉片相對含水量最高,較對照提高了154.6%;接種ERM能顯著提高桃葉杜鵑的可溶性糖、可溶蛋白、游離脯氨酸含量;接種ERM真菌能顯著提高桃葉杜鵑的SOD活性,以接種TY35處理在第10天的SOD活性最大,較對照組增加69.4%;接種ERM真菌能顯著降低MDA含量。在干旱脅迫下,接種ERM真菌能提高桃葉杜鵑葉片的相對含水量、可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸含量、SOD活性、光合色素的含量,降低MDA含量,從而提高桃葉杜鵑幼苗的抗旱能力,其中以接種TY29和TY35的效果較好。
桃葉杜鵑;杜鵑花類菌根(ERM);干旱;生理響應
桃葉杜鵑(Franch.)是杜鵑花屬常綠灌木,冠形優(yōu)美,花色豐富,花期集中于5—6月,主要分布于貴州海拔1 800~1 830 m的高山地區(qū),是園林景觀應用潛力較高的觀賞花木。桃葉杜鵑的抗旱性較差,旱害是制約其遷地保育及園林應用的主要限制因子。研究[1–3]表明,杜鵑花類菌根(ericoid mycorrhizas,ERM)在杜鵑花類植物的營養(yǎng)吸收、促進生長、增強逆境適應能力等方面有重要作用。接種ERM真菌能促進云錦杜鵑對硝態(tài)氮和有機氮的吸收[4],對云錦杜鵑[3]、錦繡杜鵑[5]等有明顯的促生效應。本研究中,以桃葉杜鵑為試材,接種不同ERM真菌,研究干旱脅迫下桃葉杜鵑生理指標的變化,現(xiàn)將結果報道如下。
桃葉杜鵑種子采自貴州省百里杜鵑風景區(qū)方家坪,千粒質量為(0.206±0.001) g。育苗基質采自百里杜鵑風景區(qū)桃葉杜鵑林下,為腐殖質土。基質的pH值為4.77,有機質含量為44.15 g/kg,全氮含量為1.56 g/kg,全磷含量為0.16 g/kg,有效磷含量為7.04 mg/kg,堿解氮含量為268.55 mg/kg,速效鉀含量為205.91 mg/kg。珍珠巖購自河南省信陽市中森珍珠巖應用有限公司。菌株培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)。
供試菌株:TY02(AJ279484,sp);TY21 (AB369417,);TY29 (AB158314,);TY35(AB378554,)。這些菌株均從野生桃葉杜鵑根系分離獲得。
將4個供試菌株(TY02、TY21、TY29、TY35)接種到PDA固體培養(yǎng)基,進行平板培養(yǎng)。于25 ℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)2周。待菌絲長滿作為菌劑使用。
播種時進行接種處理,以不接種的桃葉杜鵑為對照。選取籽粒飽滿的桃葉杜鵑種子于0.5% KMnO4溶液中消毒15 min,蒸餾水沖洗至無色,晾干,備用。往消毒后的花盆(上口徑、底徑、高度分別為 21.5、13、16 cm)中裝入滅菌基質(腐殖土和珍珠巖體積比為3∶1),均勻地鋪上長滿菌絲的PDA培養(yǎng)基,覆蓋少量基質,將消毒后的種子均勻播撒其上,用滅菌后的松針均勻覆蓋,于人工氣候箱內恒溫培養(yǎng)(溫度25 ℃、相對濕度85%、光照24 h)。
待幼苗出土90 d后,將其從光照培養(yǎng)箱移栽到已消毒的塑料花盆(上口徑、底徑、高度分別為 11、8.7、10 cm)中。每盆栽1株。每種菌株種植20盆。將盆置于貴州大學林學院苗圃大棚內。重復3次。所用基質同上。放入大棚前,每盆澆水至飽和持水量,之后讓其逐漸自然失水干旱,直至第15 天進行復水。
于苗圃培育的第1、5、10、15、20 天,采集從植株頂部向下第4、第5片成熟功能葉片進行各項指標的測定。其中第15天在澆水前取樣。葉片相對含水量采用飽和含水量法、水分飽和虧缺采用烘干稱量法測定[6],水分飽和虧缺=(1–相對含水量)×100%;可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸、SOD活性、MDA、光合色素含量的測定均參照文獻[7]的方法進行,其中,脯氨酸含量采用茚三酮法、可溶性糖含量采用蒽酮比色法、可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍法、SOD活性用NBT光還原法測定、MDA含量采用硫代巴比妥酸法測定、光合色素含量測定采用95%乙醇浸提法測定。重復3次。結果取平均值。
采用Excel 2010整理數(shù)據(jù);采用SPSS 18.0 進行差異顯著性分析;運用LSD 法進行多重比較。
由表1可見,接種ERM真菌桃葉杜鵑葉片的相對含水量均顯著或極顯著的高于對照,葉片水分飽和虧缺均顯著或極顯著低于對照。第15天時,接種TY29處理的葉片相對含水量最高,比對照組增加91.62%。復水后,接種ERM真菌桃葉杜鵑葉片相對含水量高于對照組,以接種TY35處理的葉片的相對含水量最高,比對照提高了154.6%,且差異達極顯著水平。
表1 干旱脅迫下桃葉杜鵑菌根苗葉片的相對含水量和葉片飽和虧缺
同列不同大、小寫字母表示不同菌種處理間的差異達0.01、0.05水平。
由表2可見,干旱脅迫下,桃葉杜鵑葉片的可溶性糖含量呈先上升后下降的趨勢,在第10天達到最大值。接種ERM真菌能顯著增加桃葉杜鵑可溶性糖含量,以接種TY35處理葉片在第10天的可溶性糖含量最高,比對照增加了125.15%。第20天,以接種TY02處理的可溶性糖含量較高,較第15 天時增加了38.9%,對照組可溶性糖含量下降,較第15 天時降低了13.3%。
干旱脅迫下,桃葉杜鵑葉片可溶性蛋白含量下降,接種ERM真菌桃葉杜鵑的可溶性蛋白含量均高于對照組,且差異達顯著水平。第20天,桃葉杜鵑可溶性蛋白含量增加,其中,接種TY35處理較對照增加了188.2%,接種TY29處理較對照增加了141.2%。
表2 干旱脅迫下桃葉杜鵑菌根苗的可溶性糖和可溶性蛋白含量
同列不同大、小寫字母表示不同菌種處理間的差異達0.01、0.05水平。
由表3可見,干旱脅迫下,對照組桃葉杜鵑葉片脯氨酸含量先上升后下降,接種ERM真菌桃葉杜鵑葉片脯氨酸含量上升。在第10天時,對照組脯氨酸含量達到最大值,顯著高于接種ERM真菌處理。第15天,對照的脯氨酸含量顯著下降,接種TY35處理的脯氨酸含量較對照增加了58.79%。第20天,桃葉杜鵑葉片脯氨酸含量下降,以接種TY35處理的降幅最大,較第15天時降低了56.4%。
表3 干旱脅迫下桃葉杜鵑菌根苗的脯氨酸含量
同列不同大、小寫字母表示不同菌種處理間的差異達0.01、0.05水平。
由表4可見,接種ERM真菌后,桃葉杜鵑葉片的SOD活性顯著上升, MDA含量降低。各接種處理在干旱脅迫第10天的SOD活性較高,且以接種TY35處理的最高,較對照增加了69.4%。各接種處理的MDA含量于第15 天達最高,但均低于對照,其中接種TY35處理的MDA含量較對照降低了46%。第20天,接種ERM真菌桃葉杜鵑葉片SOD活性上升、MDA含量下降,與對照相比,差異達極顯著水平。
表4 干旱脅迫下桃葉杜鵑菌根苗的SOD活性和MDA含量
同列不同大、小寫字母表示不同菌種處理間的差異達0.01、0.05水平。
由表5可見,各接種處理在第5天的總葉綠素及類胡蘿卜素含量最高,其中又以接種TY35處理的最高,總葉綠素含量較對照增加了112.29%,類胡蘿卜素較對照增加了148.1%。至第20天,對照的總葉綠素及類胡蘿卜素含量變化不明顯,接種ERM真菌處理的總葉綠素及類胡蘿卜素含量升高,以接種TY35處理的最高,總葉綠素含量較對照增加了273.9%,類胡蘿卜素較對照增加了209.1%。
表5 干旱脅迫下桃葉杜鵑菌根苗光合色素含量變化
同列不同大、小寫字母表示不同菌種處理間的差異分別達0.01、0.05水平。
本研究結果表明,持續(xù)干旱,桃葉杜鵑葉片的相對含水量持續(xù)降低,葉片水分飽和虧缺增大,SOD活性、MDA含量增加,說明細胞膜脂過氧化反應加重;接種ERM真菌的桃葉杜鵑幼苗葉片的相對含水量、SOD活性高于對照,MDA含量低于對照,表明在相同干旱條件下,接種ERM真菌能維持桃葉杜鵑保水能力,有效降低桃葉杜鵑的膜脂過氧化,提高桃葉杜鵑的抗旱能力。復水后,接種ERM真菌桃葉杜鵑的MDA含量比對照下降速度快,SOD活性和葉片相對含水量增加比對照組快,表明接種ERM真菌能增強桃葉杜鵑干旱脅迫后的修復能力。
滲透調節(jié)是植物抵御干旱的一種重要方式。干旱脅迫時,植物通過主動積累可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸含量等來降低滲透勢,維持細胞滲透平衡[8–12],提高植物的抗旱性。研究[13–14]表明,干旱抑制蛋白質的合成并誘導蛋白降解,從而使植株體內總蛋白含量降低,這種變化可能在抗旱機理上起更大的作用。本研究結果表明,持續(xù)干旱時,接種ERM真菌可通過調節(jié)可溶性糖、脯氨酸、可溶性蛋白含量等提高桃葉杜鵑的滲透平衡,減輕受脅迫程度,這與前人的研究[15–17]結果相似。
干旱脅迫下植物耐旱的生理特點之一是保持較高的光合色素含量[18]。本研究結果表明,干旱脅迫下,接種ERM真菌能顯著提高桃葉杜鵑光合色素含量,這與吳婧舒等[19]對平榛在水分脅迫下的研究結果相似。接種ERM真菌處理的光合色素含量始終高于對照,有利于桃葉杜鵑吸收和傳遞光能,維持桃葉杜鵑的正常生長。
綜合試驗結果,接種ERM真菌能改善桃葉杜鵑生理活動,增強桃葉杜鵑幼苗的抗旱能力及干旱脅迫解除后的恢復能力,其中以接種TY29和TY35的效果較好。
[1] CAIMER J W G,MEHARG A A.Ericoid mycorrhiza:a partnership that exploits harsh edaphic conditions[J]. European Journal of Soil Science,2003,54(4):735–740.
[2] SOKOLOVSKI S G,MEHARG A A,MAATHUIS F J M.root cells show increased capacity for amino acid uptake when colonized with the mycorrhizal fungus[J].New Phytologist,2002,155(3):525–530.
[3] 于芳,張春英,尹麗娟,等.云錦杜鵑菌根真菌接種技術及其效應[J].福建農(nóng)林大學學報(自然科學版),2008,37(3):360–364.
[4] 尹麗娟,張春英,楊兵.云錦杜鵑菌根真菌吸收氮源特性及其接種效應[J].中國農(nóng)業(yè)科學,2010,43(4):868–872.
[5] 陳真,楊兵,張春英,等.錦繡杜鵑菌根真菌rDNAITS序列分析及接種效應研究[J].菌物學報,2011(5):729–737.
[6] 鄒琦.植物生理學實驗指導[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2000.
[7] 李合生.植物生理生化實驗原理和技術[M].北京:高等教育出版社,2002.
[8] 孫彩霞,沈秀瑛,劉志剛.作物抗旱性生理生化機制的研究現(xiàn)狀和進展[J].雜糧作物,2002(5):285–288.
[9] 彭志紅,彭克勤,胡家金,等.滲透脅迫下植物脯氨酸積累的研究進展[J].中國農(nóng)學通報,2002(4):80–83.
[10] 徐啟賀,李壯,徐鍇,等.持續(xù)干旱脅迫及復水對3種蘋果砧木滲透調節(jié)能力的影響[J].中國果樹,2010(3):17–22.
[11] 李州,彭燕,蘇星源.不同葉型白三葉抗氧化保護及滲透調節(jié)生理對干旱脅迫的響應[J].草業(yè)學報,2013(2):257–263.
[12] 杜偉莉,高杰,胡富亮,等.玉米葉片光合作用和滲透調節(jié)對干旱脅迫的響應[J].作物學報,2013(3):530–536.
[13] 史玉煒,王燕凌,李文兵,等.水分脅迫對剛毛檉柳可溶性蛋白、可溶性糖和脯氨酸含量變化的影響[J].新疆農(nóng)業(yè)大學學報,2007(2):5–8.
[14] 孫國榮,張睿,姜麗芬,等.干旱脅迫下白樺實生苗葉片的水分代謝與部分滲透調節(jié)物質的變化[J].植物研究,2001(3):413–415.
[15] 王藝,丁貴杰.馬尾松菌根化苗木對干旱的生理響應及抗旱性評價[J].應用生態(tài)學報,2013,24(3):639–645.
[16] 姚瑞玲,甘春雁,項東云.叢枝菌根化香椿、秋楓幼苗對干旱脅迫生理響應[J].廣西林業(yè)科學,2013,42(4):295–299.
[17] 于晶.土壤干旱脅迫對兩種風箱果生理特性的影響[D].哈爾濱:東北林業(yè)大學,2011.
[18] 李吉躍.植物耐旱性及其機理[J].北京林業(yè)大學學報,1991(3):92–100.
[19] 吳婧舒,周廣柱,周金峰.運用生理生化指標對平榛抗旱性的綜合評價[J].湖北農(nóng)業(yè)科學,2010(1):56–59.
責任編輯:尹小紅
英文編輯:梁 和
Physiological responses of mycorrhizalseedlings to drought stress
CHEN Rongjian,OU Jing*,WANG Lijuan,LONG Haiyan,XIONG Xianrong,XIONG Dan
(College of Forestry, Guizhou University, Guiyang 550025, China)
To research the physiological responses to drought stress of mycorrhizal seedlings ofmycorthiza, its seeds were inoculated with four ERM fungi (TY02, TY21, TY29, TY35) respectively, with non– inoculation as the control,and the relative water content, water saturation deficit, the adjustment of osmotic substances(soluble sugar, soluble protein, proline), the enzymatic activity of SOD, MDA content, the physiologic index and biochemical criterion of photosynthetic pigment ofleaves were measured under drought stress. The results showed that inoculation of ERM fungi could improve leaves relative water content and reduce water saturation deficit. In the 15th day after inoculated with TY29, the relative water content of the leaves was increased by 91.62%; after re–watering, the relative water content of the leaves treated with TY35 was 154.6% higher than that of the control group. Inoculation with ERM fungi could significantly increase the soluble sugar, proline, soluble protein and other osmotic adjustment substances of. Inoculation with ERM fungi could enhance the adaptability ofto drought stress by increasing SOD activity and reducing the MDA content. In the 10th day, SOD activity inoculated with TY35 was the best, it was 69.4% higher than that of control group. In conclusion, the abilities of drought resistance inoculated with TY29 and TY35 were better than those of the others.
; ericoid mycorrhizas (ERM); drought; physiological response
S685.21
A
1007-1032(2017)06-0635-05
2017–04–21
2017–09–28
國家自然科學基金項目(31560223);貴州省科技計劃項目(黔科合支撐[2016]2522號);貴州大學研究生創(chuàng)新基金項目(研農(nóng)2016014)
陳榮建(1989—),男,土家族,貴州鎮(zhèn)遠人,碩士研究生,主要從事園林植物栽培養(yǎng)護與管理研究,te5641331@163.com;
通信作者,歐靜,教授,主要從事園林植物資源利用與規(guī)劃研究,coloroj@126.com
投稿網(wǎng)址:http://xb.hunau.edu.cn