康愛(ài)君,李雨薇,王學(xué)文,劉君芳,胡建國(guó),鄭振輝
(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部,北京 100191)
血清放置時(shí)間對(duì)大鼠血生化檢測(cè)的影響
康愛(ài)君,李雨薇,王學(xué)文,劉君芳,胡建國(guó),鄭振輝
(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部,北京 100191)
研究報(bào)告
目的探討大鼠血清放置時(shí)間對(duì)14項(xiàng)血生化檢測(cè)結(jié)果的影響。方法隨機(jī)選取40只成年SD大鼠,空腹采集靜脈血液標(biāo)本,靜置1 h,分離血清并密封分裝,存放于4℃和-20℃冰箱內(nèi),應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀于分離血清后0 h、4 h、24 h、96 h、7 d檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(CREA-J)、尿酸(UA)、尿素氮(UREA)、血糖(GLU)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)等14項(xiàng)血生化指標(biāo),并進(jìn)行比較。結(jié)果雌雄大鼠血生化數(shù)據(jù)變化趨勢(shì)一致。4℃保存時(shí),與0 h相比,ALP在4 h、24 h、96 h、7d均顯著降低(P< 0.05),ALB在96 h和7 d均極顯著升高(P< 0.01),CREA-J在96 h和7 d均顯著升高(P< 0.05),UA在24 h、96 h、7 d均極顯著升高(P< 0.01),其他指標(biāo)差異無(wú)顯著性(P> 0.05)。-20℃保存時(shí),與0 h相比,ALT在7 d顯著升高(P< 0.01),AST在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),TP在4 h和24 h顯著降低(P< 0.05),ALB在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01),CREA-J在24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01),UA在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01),TC在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.05),TG在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),CK在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),LDH在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),其他指標(biāo)差異無(wú)顯著性(P> 0.05)。結(jié)論大鼠血生化測(cè)定盡可能在采集血清后即刻完成,尤其是ALP的測(cè)定,4℃冷藏時(shí),測(cè)定UA不宜超過(guò)4 h,測(cè)定ALB和CREA-J不宜超過(guò)24 h,測(cè)定ALT、AST、TP、UREA、GLU、TC、TG、LDL-C、CK及LDH等指標(biāo)不宜超過(guò)7 d。
大鼠;血清;放置時(shí)間;血生化檢測(cè)
血生化指標(biāo)是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果最常用的指標(biāo)之一,因而血生化檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性直接影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性和可靠性。血清的處理方式是血生化指標(biāo)檢測(cè)過(guò)程中的重要環(huán)節(jié),如果血清處理不當(dāng),可直接影響血生化檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[1,2]。大鼠是醫(yī)學(xué)研究過(guò)程中使用頻率較高的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類,本文選擇了大鼠的14項(xiàng)常規(guī)血生化指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè),觀察4℃和-20℃兩種不同保存溫度下血清分別放置0 h、4 h、24 h、96 h、7 d血生化指標(biāo)的變化,為科研人員在血生化檢測(cè)方面提供技術(shù)指導(dǎo)。
SPF級(jí)SD大鼠,共40只,雌雄各半,8周齡,體重200~220 g,由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供[SCXK(京)2016-0010]。飼養(yǎng)于屏障環(huán)境[SYXK(京)2016-0041],溫度為(24±2)℃,相對(duì)濕度為(55±15)%。并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。
14項(xiàng)血生化檢測(cè)試劑盒(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司);BS-350E 全自動(dòng)生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。
1.3.1 血生化測(cè)定
大鼠禁食12 h,采集靜脈血液標(biāo)本,靜置1 h,分離血清并密封分裝后,分別存放于4℃和-20℃,應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀分別于分離血清后0 h、4 h、24 h、96 h、7 d檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(CREA-J)、尿酸(UA)、尿素氮(UREA)、血糖(GLU)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)等14項(xiàng)血生化指標(biāo)。
與0 h相比,ALP在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著降低(P< 0.05),ALB在96 h和7 d均顯著升高(P< 0.01),CREA-J在96 h顯著升高(P< 0.05),UA在24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01),其他指標(biāo)差異無(wú)顯著性(P> 0.05)。詳見(jiàn)表1。
與0 h相比,ALP在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著降低(P< 0.05),ALB在96 h和7 d均顯著升高(P< 0.05),CREA-J在96 h和7 d均顯著升高(P< 0.05),UA在24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01),其他指標(biāo)差異無(wú)顯著性(P> 0.05)。詳見(jiàn)表2。
與0 h相比,AST在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),TP在4 h和24 h顯著降低(P< 0.05),ALB在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01),CREA-J在24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01),UA在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01),TC在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.05),TG在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),CK在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),LDH在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),其他指標(biāo)差異無(wú)顯著性(P> 0.05)。詳見(jiàn)表3。
與0 h相比,ALT在7 d顯著升高(P< 0.01),AST在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),TP在4 h和24 h顯著降低(P< 0.01),ALB在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01),CREA-J在96 h和7 d均顯著升高(P< 0.01),UA在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01),TC在4 h、24 h、96 h、7 d均顯著升高(P< 0.01),TG在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),CK在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),LDH在96 h和7 d顯著升高(P< 0.05),其他指標(biāo)差異無(wú)顯著性(P> 0.05)。詳見(jiàn)表4。
表1 雌性SD大鼠血清放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化℃)Tab.1 Changes of blood biochemical indexes in sera of female SD rats stored at different times
注:與0 h組比較,*P< 0.05,**P< 0.01。
Note.Compare with the 0 h gruop,*P< 0.05,**P< 0.01.
表2 雄性SD大鼠血清放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化℃)Tab.2 Changes of blood biochemical indexes in the sera of male SD rats stored at different times
注:與0 h組比較,*P< 0.05,**P< 0.01。
Note.Compared with the 0 h gruop,*P< 0.05,**P< 0.01.
表3 雌性SD大鼠血清放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化℃)Tab.3 Changes of blood biochemical indexes in the sera of female SD rats stored at different times
注:與0 h組比較,*P< 0.05,**P< 0.01。
Note.Compared with the 0 h gruop,*P< 0.05,**P< 0.01.
表4 雄性SD大鼠血清放置不同時(shí)間血生化指標(biāo)的變化℃)Tab.4 Changes of blood biochemical indexes in the sera of male SD rats stored at different times
注:與0 h組比較,*P< 0.05,**P< 0.01。
Note.Compared with the 0 h gruop,*P< 0.05,**P< 0.01.
為避免由于纖維蛋白未完全收縮造成血清中各成分濃度偏高[3],影響即刻值的準(zhǔn)確性,此次試驗(yàn)是在采集大鼠靜脈血后,先靜置1 h,待血標(biāo)本收縮充分后,再離心、檢測(cè),測(cè)定的數(shù)值做為0 h檢測(cè)數(shù)據(jù)。由于血生化檢測(cè)值受待檢動(dòng)物來(lái)源、年齡、性別、血標(biāo)本采集途徑、分離血清前標(biāo)本靜置時(shí)間、檢測(cè)儀器以及檢測(cè)試劑等多重因素的影響,因此收集了與本研究動(dòng)物來(lái)源、鼠齡、性別相同的SD大鼠內(nèi)部檢測(cè)數(shù)據(jù)作為正常值參考范圍。檢測(cè)結(jié)果顯示,0 h樣本檢測(cè)值均在正常值參考范圍內(nèi)。
本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,血生化檢測(cè)數(shù)據(jù)會(huì)因血清放置溫度和放置時(shí)間的不同而發(fā)生改變。變化的原因是血清放置過(guò)程中標(biāo)本中水分的蒸發(fā)作用、細(xì)胞酸堿度變化以及紅細(xì)胞內(nèi)容物逸出等多方面的作用[3]。
由實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,分離血清后,4℃保存時(shí),放置4 h后ALP指標(biāo)較0 h顯著降低;-20℃保存時(shí),放置7 d ALP指標(biāo)較0 h仍無(wú)變化;由此,當(dāng)需要測(cè)定ALP時(shí),離心后的血清最好即刻檢測(cè)或者-20℃保存一周內(nèi)檢測(cè)。當(dāng)需要測(cè)定UA時(shí),由于采集的血清無(wú)論4℃還是-20℃保存,放置24 h后UA值均顯著或極顯著升高,且放置7 d時(shí)UA檢測(cè)值已經(jīng)超出正常參考值范圍,而4℃放置4 h 則無(wú)顯著變化,所以,離心后的血清最好即刻檢測(cè)UA或者4℃保存4 h內(nèi)必須檢測(cè)UA。當(dāng)需要測(cè)定ALB和CREA-J時(shí),離心后的血清需4℃保存且需24 h內(nèi)檢測(cè)。-20℃保存時(shí),血清放置7 d ALT和AST指標(biāo)較0 h均顯著升高,而4℃保存時(shí),放置7 d 均無(wú)顯著變化;由此,當(dāng)需要測(cè)定ALT和AST時(shí),血清4℃保存一周內(nèi)檢測(cè)即可。-20℃保存時(shí),TP值出現(xiàn)波動(dòng),在4 h和24 h較0 h顯著降低,96 h和7 d較0 h無(wú)差異,在4℃保存時(shí),放置7 d TP值均無(wú)顯著變化,測(cè)定TP宜4℃保存7 d內(nèi)進(jìn)行。當(dāng)測(cè)定TC、TG、LDL-C等血脂指標(biāo)時(shí),由于-20℃保存4 h后較0 h TC和TG均顯著或極顯著升高,而4℃保存時(shí),放置7 d 均無(wú)顯著變化,故宜4℃保存血清并一周內(nèi)檢測(cè)。當(dāng)測(cè)定心肌酶指標(biāo)CK和LDH時(shí),由于-20℃保存96 h后較0 h均顯著升高,而4℃保存時(shí),放置7 d 均無(wú)顯著變化,故4℃保存血清并一周內(nèi)檢測(cè)即可。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,無(wú)論4℃還是-20℃保存標(biāo)本,放置7 d內(nèi)UREA和GLU檢測(cè)值較0 h均無(wú)顯著變化,故7 d內(nèi)檢測(cè)即可。
綜上所述,為了使研究人員更加便于參考,ALT、AST、TP、UREA、GLU、TC、TG、LDL-C、CK及LDH等生化指標(biāo)的檢測(cè),建議4℃保存血清并7 d內(nèi)檢測(cè)即可;ALB和CREA-J指標(biāo)的檢測(cè),建議4℃保存血清并24 h內(nèi)檢測(cè);由于放置時(shí)間和方式對(duì)UA指標(biāo)影響較大,離心后的血清最好即刻檢測(cè)或者4℃保存4 h內(nèi)檢測(cè);對(duì)于ALP的檢測(cè),離心后的血清最好即刻檢測(cè),如做不到,可-20℃保存一周內(nèi)檢測(cè)。
總之,血生化測(cè)定指標(biāo)不同,血清可放置的時(shí)間、放置的方式則不同,為保證血生化檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,實(shí)驗(yàn)人員可根據(jù)所測(cè)指標(biāo)選擇適宜的血清保存方式并及時(shí)送檢,同時(shí),檢測(cè)人員也應(yīng)該對(duì)血清及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。此外,標(biāo)本的采集時(shí)間、采集部位、標(biāo)本是否溶血[4-6]等也都是影響血生化檢測(cè)結(jié)果的重要因素,這些影響因素對(duì)大鼠血生化檢測(cè)結(jié)果的影響情況有待進(jìn)一步探討。
[1] 包玉龍,杜佳林,李顯華,等. 不同存放時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清生化值影響 [J]. 實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2011,25(10): 10-12.
[2] 段世俊. 血液標(biāo)本采集對(duì)生化檢驗(yàn)結(jié)果的影響研究[J]. 中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2014,11(29): 68-69.
[3] 陳中平.血標(biāo)本放置時(shí)間與方式對(duì)10項(xiàng)血生化檢測(cè)的影響[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2006,3(9): 443-444.
[4] 李詠梅. 正確的血液標(biāo)本采集是檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量保證的重要環(huán)節(jié)[J]. 中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2014,8(18): 258-259.
[5] 陳志杭.標(biāo)本采集誤差對(duì)血生化檢驗(yàn)的影響 [J]. 中外醫(yī)學(xué)研究,2016, 14(7): 57-58.
[6] 劉金華,簡(jiǎn)慶佳,符傳東,等. 標(biāo)本溶血對(duì)生化檢驗(yàn)結(jié)果影響的研究與探討 [J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2017, 24(9): 138-140.
Effectofstoragetimeonserumbiochemicaltestofrats
KANG Ai-jun, LI Yu-wei, WANG Xue-wen, LIU Jun-fang, HU Jian-guo, ZHENG Zhen-hui
(Department of Laboratory Animal Science,Health Science Center,Peking University, Beijing 100191,China)
ObjectiveTo observe the effect of different storage time on 14 blood biochemical indexes in rats.MethodsRandomly selected 40 adult SD rats were included in this study. Fasting venous blood samples were collected, serum was separated, sealed, and stored in the refrigerator (4℃ and -20℃). The serum parameters were detected at 0 h,4 h,24 h,96 h and 7 d, respectively, using an automatic biochemical analyzer.A total of 14 blood biochemical indexes were detected, including alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (ALP), total protein (TP), albumin (ALB), creatinine (CREA-J), uric acid (UA), urea nitrogen (UREA), blood glucose (GLU), total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C), creatine kinase (CK) and lactate dehydrogenase (LDH). The effects of serum storage time on blood biochemical results were compared.ResultsThe trends of blood biochemical data in male and female rats were consistent. Compared with the indexes of serum preserved at 4℃ for 0 h, the ALP was significantly reduced after storage for 4 h, 24 h, 96 h, and 7 d (P< 0.05), ALB were significantly increased after 96 h and 7 d (P< 0.01), CREA-J was significantly increased after 96 h, 7 d (P< 0.05), UA was significantly increased after 24 h, 9 h, and 7 d (P< 0.01), and no significant changes in other indicators (P> 0.05). Compared with the values of 0 h serum, the serum preserved at -20℃ showed that ALT was significantly increased after 7 d (P< 0.01), AST significantly increased after 96 h and 7 d (P< 0.05), TP significantly decreased after 4 h and 24 h (P< 0.05), ALB significantly increased after 4 h, 24 h, 96 h, and 7 d (P< 0.01), CREA-J significantly increased after 24 h, 96 h, and 7 d (P< 0.01), UA significantly increased after 4 h, 24 h, 96 h, and 7 d (P< 0.01), TC significantly increased after 4 h, 24 h, 96 h, and 7 d (P< 0.01), TG significantly increased after 96 h and 7 d (P< 0.05), CK significantly increased after 96 h and 7 d (P< 0.05), LDH significantly increased after 96 h and 7 d (P< 0.05), and no significant changes in other indicators (P> 0.05).ConclusionsThe biochemical tests of rat serum should be immediately performed as they were collected, especially for ALP test. For the sera stored at 4℃, the test should be finished in different times: UA test in 4 hours, ALB and CREA-J test in 24 hours, and ALT, AST, TP, UREA, GLU, TC, TG, LDL-C, CK, and LDH test in 7 days.
Rat; Serum; Storage time; Blood biochemical test
2017-05-24
國(guó)家自然科學(xué)基金(81401341)。
康愛(ài)君(1971-),女,副主任技師,研究方向:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。E-mail: kangaijun1028@163.com
R-33
A
1671-7856(2017) 12-0016-05
10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.12.003
〔收稿日期〕2017-06-05