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        TK1、TP在非小細胞肺癌中的表達及相關(guān)性研究

        2017-12-20 10:19:52李樹林熊健憲杜志明
        當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2017年36期
        關(guān)鍵詞:肺癌血清差異

        李樹林,熊健憲,杜志明

        TK1、TP在非小細胞肺癌中的表達及相關(guān)性研究

        李樹林,熊健憲,杜志明

        (贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心胸外科,江西 贛州 341000)

        目的 分析非小細胞肺癌肺癌組織、癌旁正常肺組織組織、正常肺組織及炎性肺組織血清胸苷激酶(TK1)、胸苷磷酸化酶(TP)表達水平,并探討分期與表達之間的關(guān)系。方法 本研究于2014年7月~2016年7月共完成研究75例非小細胞肺癌,納入病例組,同時根據(jù)年齡、性別校正,入選50例良性肺疾病患者,納入良性組,進行組織胸苷激酶(TK1)、胸苷磷酸化酶(TP)檢測,進行對比,評價TK1、TP在非小細胞肺癌診斷、分期、療效預(yù)測中的價值。結(jié)果 肺癌組織TK1陽性率、TP陽性率高于癌旁正常肺組織組織、正常肺組織及炎性肺組織,癌旁正常肺組織組織與炎性肺組織高于正常肺組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。非小細胞肺癌各臨床分期與TK1以及TP表達水平,TK1隨著分期的上升,表達水平也隨之上升,TP隨著分期上升表達水平也隨之上升,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。有淋巴轉(zhuǎn)移的患者TK1、TP表達水平高于無轉(zhuǎn)移者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。非小細胞肺癌TK1以及TP表達存在顯著相關(guān)性,隨著分期的上升,相關(guān)系數(shù)r絕對值呈下降趨勢,未見高度相關(guān)性(P<0.05)。近期治療,有效對象治療前TK1表達水平3(1~8)%低于無效者(53.46±12.56)%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 TK1、TP在非小細胞肺癌中的表達與分期有關(guān),TK1表達可以預(yù)測預(yù)后,兩者表達存在相關(guān)性。

        非小細胞肺癌;胸苷激酶;胸苷磷酸化酶;相關(guān)性;腫瘤分期;預(yù)后

        我國已成為世界惡性腫瘤發(fā)生率最高的國家,肺癌是最常見的惡性腫瘤,發(fā)生率32~35/10萬,因居民平均年齡增長、吸煙人數(shù)居高不下、城市空氣質(zhì)量的惡化,肺癌的發(fā)病率仍逐年上升[1]。肺癌的診斷主要依賴于血清標(biāo)志物、影像學(xué)檢查,肺部結(jié)節(jié)小劑量CT篩查診斷技術(shù)尚未成熟,血清標(biāo)志物檢查的靈敏度欠佳[2]。對于肺癌的診斷需要尋找更多、靈敏度更高的篩查診斷指標(biāo)。本次研究采用對比分析,共研究75例非小細胞肺癌,納入病例組,同時根據(jù)年齡、性別校正,入選50例良性肺疾病患者,納入良性組,進行血清胸苷激酶(TK1)、胸苷磷酸化酶(TP)檢測,分析良性肺部疾病、非小細胞肺癌患者的血清TK1、TP表達水平,并探討分期與表達之間的關(guān)系。

        1 資料與方法

        1.1 臨床資料 2014年7月~2016年7月,篩查非小細胞肺癌的患者入組。納入標(biāo)準(zhǔn):①擬診為非小細胞肺癌,經(jīng)CT分期,或活檢穿刺;②知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn):①拒絕參與研究;②轉(zhuǎn)其他醫(yī)院診治。退出標(biāo)準(zhǔn):①誤漏診;②臨床資料不完整。截共取得活檢樣本75例,納入病例組,其中男50例、女25例,年齡34~81歲,平均(61.5±5.7)歲。腫瘤部位:右肺部27例、右肺下葉19例、左肺上葉18例、左肺下葉10例、右肺中葉1例。最終診斷為:腺癌39例、鱗癌29例、其他7例。術(shù)后TNM分期:ⅠA期26例、ⅠB期18例、ⅡA期12例、ⅡB期7例、ⅢA期10例、ⅢB期2例。肺癌的國際TNM分期采用AJCC2009版本標(biāo)準(zhǔn)。同時根據(jù)年齡、性別校正,入選50例良性肺疾病患者,納入良性組,其中男31例、女12例,年齡(60.5±9.5)歲。兩組對象(年齡、性別)臨床資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

        1.2 方法 手術(shù)獲得的組織病理樣本,均采用甲醛固定、石蠟包埋,4μm厚度,免疫組織化學(xué)技術(shù)(Immunohistochemistry,IHC)檢測。主要步驟包括:①切片復(fù)水,切片二甲苯Ⅰ浸泡10 min,二甲苯Ⅱ浸泡10 min,100%乙醇Ⅰ浸泡5 min,95%乙醇Ⅰ浸泡2 min,95%乙醇Ⅱ浸泡2 min,80%乙醇浸泡1 min,70%乙醇浸泡1 min,自來水浸泡2 min,蒸餾水浸泡2 min;②抗原修復(fù),抗原修復(fù)液浸泡,92℃以上煮15 min,室內(nèi)下冷卻;③封閉:山羊血清PBS稀釋,稀釋比例1∶20,封閉1 h;④封一抗,分別采用鼠抗人TK1、TP,稀釋比例1∶100,室溫1 h孵育;⑤PBS浸泡:浸泡3次,每次5 min;⑥D(zhuǎn)AB顯色:蘇木素復(fù)染;⑦中性樹脂封片;⑧最終在顯微鏡下觀察采集照片。

        1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 2名10年以上工齡高年資病理醫(yī)師采用雙盲法進行判讀,每張切片于40×10倍顯微鏡下任意觀察10個高倍鏡視野,計算陽性標(biāo)記細胞百分率。無陽性細胞(-)、陽性細胞率1%~25%(+)、陽性細胞率26%~50%(++)、陽性細胞率 50%~75%(+++)、陽性細胞率76%~100%(++++),+及以上均為陽性。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用Image Pro Plus統(tǒng)計軟件6.0進行統(tǒng)計學(xué)計算,陽性標(biāo)記細胞百分率表達水平服從正態(tài)分布采用“x±s”表示,比較采用t檢驗或配對t檢驗,非正態(tài)分布或方差不齊時,采用中位數(shù)與四分位距M(P25-P75)表示,非參數(shù)檢驗,靈敏度等診斷效率指標(biāo)采用率表示,采用χ2檢驗組間比較,相關(guān)性分析Spareman相關(guān)性分析,以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 肺癌組織、癌旁正常肺組織組織、正常肺組織及炎性肺組織TK1以及TP表達水平對比 肺癌組織TK1陽性率、TP陽性率高于癌旁正常肺組織組織、正常肺組織及炎性肺組織,癌旁正常肺組織組織與炎性肺組織高于正常肺組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

        表1 不同病理以及正常肺組織TK1以及TP表達水平對比[n(%)]Table 1 Comparison of the expression levels of TK1 and TP in different pathological and normal lung tissues[n(%)]

        2.2 不同分期表達水平 非小細胞肺癌各臨床分期與TK1以及TP表達水平,TK1隨著分期的上升,表達水平也隨之上升,TP隨著分期上升表達水平也隨之上升,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。有淋巴轉(zhuǎn)移的患者TK1、TP表達水平高于無轉(zhuǎn)移者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

        2.3 非小細胞肺癌TK1以及TP表達相關(guān)性分析 非小細胞肺癌TK1以及TP表達存在顯著相關(guān)性,隨著分期的上升,相關(guān)系數(shù)r絕對值呈下降趨勢,未見高度相關(guān)性(P<0.05),見表3。

        2.4 預(yù)后相關(guān)性 因TP在鑒別診斷中的價值較低,不進行預(yù)后的相關(guān)性。近期治療,有效對象治療前TK1表達水平3(1~8)%低于無效者(53.46±12.56)%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

        表2 病例組與良性組TK1以及TP水平對比[(x±s),M(P 25-P 75)]Table 2 Comparison of TK1 and TP levels between case group and benign group[(x±s),M(P 25-P 75)]

        表3 非小細胞肺癌TK1以及TP表達相關(guān)性分析Table 3 Correlation analysis of TK1 and TP expression in non-small cell lung cancer

        3 討論

        本次研究顯示,非小細胞肺癌各臨床分期與正常肺組織及炎性肺組織組織TK1以及TP表達水平存在差異,同時與分期有關(guān)(P<0.05)。與絕大多數(shù)的研究相同,TK1是常用的腫瘤標(biāo)志物,反映細胞的增殖程度,被用于早期癌癥的篩查,腫瘤分期越高,細胞的增殖越活躍,則TK1水平越高。TP是核苷補救途徑的一種酶,主要作用是催化胸腺嘧啶核苷,參與氟尿嘧啶類藥物的活化。不同學(xué)者調(diào)查,非小細胞肺癌的患者的組織TK1、TP表達存在差異,這與納入對象的臨床分期等個體病情差異有關(guān),有報道顯示年齡、KPS評分等都是兩者的影響因素[3-4]。研究顯示,TK1、TP近年來還被用于腫瘤的診斷,一項Meta分析顯示血清TK1診斷肺癌的敏感度為0.508、0.973。Meta分析中的輔助診斷主要為篩查診斷,惡性腫瘤的比重較低,同時診斷標(biāo)準(zhǔn)也存在差異[5]。限制KT1、TP診斷非小細胞肺癌的主要原因為診斷參考值的確立,目前尚缺乏公認(rèn)的非小細胞肺癌診斷參考區(qū)間,當(dāng)然這也從側(cè)面反應(yīng)血清TK1、TP容易其他因素影響,從而干擾了診斷[6]。

        從分期來看,隨著分期的上升,非小細胞肺癌各臨床分期與TK1以及TP表達水平也隨之上升,有淋巴轉(zhuǎn)移的患者TK1、TP表達水平高于無轉(zhuǎn)移者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示TK1、TP一定程度上可作為分期的證據(jù),表達越高,分期越高,這可能是其可影響預(yù)后的原因。他們與分期有關(guān)于與其獨特的生物學(xué)特性有關(guān),特別是TK1是腫瘤增殖的特異性標(biāo)志物,可作為腫瘤篩查、分期的依據(jù)。從相關(guān)性分析來看,非小細胞肺癌TK1以及TP表達存相關(guān)系數(shù)r絕對值呈下降趨勢,且未見高度相關(guān)性(P<0.05),反映TK1、TP水平影響因素較多,兩者關(guān)系密切,但有受到其他因素的干擾。

        從預(yù)后來看,研究顯示TK1是預(yù)后的影響因素,較高水平的TK1近期療效為有效的可能性較低。目前關(guān)于TK1表達與肺癌預(yù)后的影響因素研究并不多見,主要集中在組織表達上,如一項研究顯示TK1組織表達與TNM分期有關(guān),從而影響NSCLC患者的預(yù)后[7]。TK1是細胞通路代謝關(guān)鍵酶,參與到DNA合成,是獨立的細胞周期標(biāo)志物,有報道顯示其升高是預(yù)后不佳的危險因素,提示患者的細胞增殖未能得到遏制,提示治療失敗[8-9]。TP的敏感性較差,相同分期患者TP也可能存在較大的差異,影響因素多,TP對預(yù)后的預(yù)測,還受TS表達影響[10]。

        綜上所述,TK1、TP在非小細胞肺癌中的表達與分期有關(guān),TK1在鑒別診斷中的價值相對較高,可以預(yù)測預(yù)后,兩者表達存在負相關(guān)性。

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        The study about expression and correlation of the role of TK1 and TP in non-small cell lung cancer

        Li Shu-lin,Xiong Jian-xian,Du Zhi-ming
        (Department of Cardiothoracic Surgery,FirstAffiliated Hospital of Gannan Medical College,Ganzhou,Jiangxi,341000,China)

        Objective To analysis of non small cell lung cancer lung cancer tissue,adjacent normal lung tissue,serum thymidine kinase in normal lung tissue and inflammatory lung tissue(TK1),thymidine phosphorylase(TP)expression,and to explore the relationship between stage and expression.Methods From July 2014 to July 2016,the 75 cases of non-small cell lung cancer were included in the case group,at the same time,accordied to age,gender correction,selected the 50 benign lung disease patients into the benign group,the organization of thymidine kinase(TK1),thymidine phosphorylase(TP)detection,comparison,evaluation of TK1,TP in the diagnosis.Non small cell lung cancer staging,curative effect of the predictive value.Results The positive rate of TK1 in lung cancer tissue,the positive rate of TP was higher than that of adjacent normal lung tissue,normal lung tissue and inflammatory lung tissue,adjacent normal lung tissue and inflammatory lung tissue than that in normal lung tissue,the difference was statistically significant(P<0.05).The clinical staging of non-small cell lung cancer and the expression of TP and TK1 the level of TK1 with the stage increased,the expression level of TP also increased,with the rising stage expression level also increased,the difference was statistically significant(P<0.05).There is lymph node metastasis in patients with TK1,the expression level of TP was higher than that without metastasis,the difference was statistically significant(P<0.05).There was significant correlation between the expression of TK1 in non-small cell lung cancer and TP staging,along with the rise,correlation coefficient of the absolute value of R decreased,there was no high correlation(P<0.05).In the near future,a valid object before treatment the expression level of TK1 3(1-8)%lower than that of ineffective(53.46±12.56)%.The difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion Staging of non small cell lung cancer with TK1,the expression of TP,TK1 expression can predict the prognosis.The correlation between the expression of existence.

        Non-small cell lung cancer;Thymidine kinase;Thymidine phosphorylase;Correlation;Neoplasm Staging;Prognosis

        10.3969/j.issn.1009-4393.2017.36.016

        贛州市指導(dǎo)性科技計劃任務(wù)(合同)書

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