王瀅秀，李金濤，張作山，劉欽勝，孫梅心，江忠萍

(山東省化學(xué)農(nóng)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院，山東 濟(jì)南 250100)

反,反-2, 4-己二烯乙酸酯高效液相色譜分析方法研究

王瀅秀，李金濤，張作山，劉欽勝，孫梅心，江忠萍*

(山東省化學(xué)農(nóng)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院，山東 濟(jì)南 250100)

建立了一種用高效液相色譜測(cè)定反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的定量分析方法。采用WondaSil C18色譜柱，以甲醇-磷酸水溶液(體積比為80:20)為流動(dòng)相，流量為0.8 mL/min，柱溫為25 ℃，選擇220 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，該分析方法的線性相關(guān)系數(shù)為0.9991，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0019，平均回收率為99.04 %。該方法快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高、定量準(zhǔn)確、結(jié)果穩(wěn)定。

反,反-2,4-己二烯乙酸酯；高效液相色譜；分析

反,反-2, 4-己二烯乙酸酯英文名稱：trans, trans-2,4-Hexadienyl acetate，CAS號(hào)：1516-17-2，分子式：C8H12O2，中文別名：反,反-2, 4-己二烯醛醋酸酯。反,反-2, 4-己二烯乙酸酯是人工合成蘋果蠹蛾性信息素反,反-8, 10-十二碳二烯-1-醇的重要中間體[1-2]，也是人工合成大豆食心蟲(chóng)性信息素反,反-8, 10-十二碳二烯-1-醇乙酸酯的重要中間體[3]，同時(shí)也是其他殺蟲(chóng)劑和活性物質(zhì)的關(guān)鍵中間體[4]。

反,反-2, 4-己二烯乙酸酯結(jié)構(gòu)式

目前，尚未見(jiàn)公開(kāi)報(bào)道有關(guān)反,反-2, 4-己二烯乙酸酯含量的分析方法。本文建立了利用高效液相色譜法(HPLC)，對(duì)反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的定量分析方法，填補(bǔ)相關(guān)檢測(cè)空白。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，分離效果好，穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，而且精密度和準(zhǔn)確度均能達(dá)到定量分析的要求，可以作為企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制和質(zhì)檢機(jī)構(gòu)質(zhì)量檢測(cè)的參考方法。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑和溶液

甲醇：色譜純；磷酸：分析純；水：二次蒸餾水；磷酸水溶液：V(H2O) : V (H3PO4) = 1000:1；反,反-2,4-己二烯乙酸酯標(biāo)樣：97.0% (購(gòu)于Alfa Aesar)；反,反-2, 4-己二烯乙酸酯試樣(本實(shí)驗(yàn)室提供)。

1.2 儀器

高效液相色譜儀：島津LC-20AT，具有紫外檢測(cè)器；島津LC solution色譜工作站；色譜柱：WondaSil C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)。

1.3 液相色譜操作條件

流動(dòng)相：V (甲醇) : V (磷酸水溶液) = 80:20；流量：0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣體積：5 μL；反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的保留時(shí)間約6.9 min。以上選用的高效液相色譜操作條件為典型操作參數(shù)，實(shí)驗(yàn)者可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)，對(duì)以上操作參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整以期獲得最佳結(jié)果。如圖所示為典型的反,反-2, 4-己二烯乙酸酯標(biāo)樣和試樣的高效液相色譜圖(圖1、2)。

圖1 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯標(biāo)樣色譜圖

圖2 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯試樣色譜圖

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯標(biāo)樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取反,反-2, 4-己二烯乙酸酯標(biāo)樣0.02 g (精確至0.0001)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇超聲溶解，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置備用。

1.4.2 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯試樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取反,反-2, 4-己二烯乙酸酯試樣0.02 g (精確至0.0001) ，置于100 mL容量瓶中， 用甲醇超聲溶解，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置備用。

1.4.3 測(cè)定步驟

在以上操作條件下，待基線穩(wěn)定后，連續(xù)進(jìn)入數(shù)針?lè)?反-2, 4-己二烯乙酸酯標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對(duì)變化<1.0%，而后按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.4.4 結(jié)果計(jì)算

將測(cè)得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中反,反-2, 4-己二烯乙酸酯峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω (%)，按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：A1——標(biāo)樣溶液中反,反-2, 4-己二烯乙酸酯峰面積的平均值；

A2——試樣溶液中反,反-2, 4-己二烯乙酸酯峰面積的平均值；

m1——標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2——試樣的質(zhì)量，g；

P——標(biāo)樣中反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 測(cè)定結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：利用島津高效液相色譜儀中的全波長(zhǎng)掃描功能，得到反,反-2, 4-己二烯乙酸酯在190 nm～370 nm范圍內(nèi)的紫外波長(zhǎng)掃描圖(圖3)。如圖所示反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的最大吸收波長(zhǎng)在226 nm附近。鑒于此處溶劑干擾較小，故選用220 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖3 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯

流動(dòng)相的選擇：根據(jù)反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的理化性質(zhì)，我們選擇常用的C18色譜柱，甲醇作為樣品溶劑，甲醇和水溶液作為混合流動(dòng)相，為了達(dá)到更好的分離效果和樣品峰形，在1 L水中加入1 mL磷酸。通過(guò)混合不同比例的流動(dòng)相在色譜柱上進(jìn)行試驗(yàn)，確定流動(dòng)相為V (甲醇) : V (磷酸水溶液) = 80 : 20，流速為0.8 mL/min時(shí)，樣品與雜質(zhì)分離效果好，基線平穩(wěn)，樣品色譜峰形對(duì)稱。如圖1、圖2所示，樣品分析時(shí)間較短，12 min左右即可完成檢測(cè)，有效提高了工作效率。

2.2 分析方法的線性相關(guān)性測(cè)定

準(zhǔn)確稱取五個(gè)不同質(zhì)量的標(biāo)樣，分別置于100 mL容量瓶中，用甲醇超聲溶解，冷至室溫后稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜操作條件下進(jìn)行測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(表1、圖4)。圖中橫坐標(biāo)為標(biāo)樣的質(zhì)量，縱坐標(biāo)為峰面積，得到線性方程為y=5.8035×108x+148472，其線性相關(guān)系數(shù)為0.9991。結(jié)果表明在測(cè)試范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果

2.3 分析方法的精密度測(cè)定

在同一樣品中準(zhǔn)確稱取五個(gè)試樣，在上述所選色譜操作條件下進(jìn)行測(cè)定。分析結(jié)果表明該方法測(cè)得反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0019，變異系數(shù)為0.19% (表2)。

圖4 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯線性相關(guān)性圖

編號(hào)12345平均值/%標(biāo)準(zhǔn)偏差變異系數(shù)/%反，反-2，4-己二烯乙酸酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%97．5497．7697．7497．3097．5397．570．00190．19

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度測(cè)定

準(zhǔn)確稱取五個(gè)一定量的試樣(已知質(zhì)量分?jǐn)?shù))，再分別準(zhǔn)確加入一定量的反,反-2, 4-己二烯乙酸酯標(biāo)樣。 而后在上述選用的色譜操作條件下進(jìn)行HPLC測(cè)定，測(cè)得反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的平均回收率為99.04% ,見(jiàn)表3。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本文建立了一種利用高效液相色譜法測(cè)定反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的定量分析方法。采用WondaSil C18色譜柱，0.8 mL/min的流速，以V (甲醇) : V (磷酸水溶液) = 80 : 20為流動(dòng)相，25 ℃柱溫， 220 nm波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果顯示該方法的線性相關(guān)系數(shù)為0.9991，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0019，平均回收率為99.04%。綜上所述，該分析方法準(zhǔn)確度高、精密度高、具有良好的線性關(guān)系，具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，是反,反-2, 4-己二烯乙酸酯質(zhì)量控制和應(yīng)用研究中切實(shí)可行、較為理想的分析方法。

[1] Wendell R, André C, Ada H, et al. Sex attractant of the codling moth: characterization with electroantennogram technique[J]. Science, 1971, 174: 297-299．

[2] 張 濤,蔡崇林,馮俊濤,等.蘋果蠹蛾性信息素的合成及活性測(cè)試[J].農(nóng)藥，2011, 50 (8): 561-563.

[3] 胡代花，楊曉偉，馮俊濤， 等.大豆食心蟲(chóng)性信息素的研究及應(yīng)用進(jìn)展[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2014, 16 (3): 235-244.

[4] 劉紅梅,姜笑寒,叢振娜. 反,反-2, 4-己二烯醛醋酸酯的合成[J]. 廣州化工, 2012, 40 (2): 93-94.

DeterminationofTrans,Trans-2, 4-HexadienylAcetatebyHPLC

WangYingxiu,LiJintao,ZhangZuoshan,LiuQinsheng,ShunMeixin,JiangZhongping*

(Shandong Province Key Laboratory of Chemical Pesticide, Shandong Academy of Pesticide Sciences,Jinan 250100, China)

A method of HPLC was developed for the quantitative determination of trans, trans-2, 4-Hexadienyl acetate. The mobile phase was a 80:20 mixture of methanol and phosphoric acid aqueous solution, flow rate was 0.8 mL/min, and a WondaSil C18 chromatographic column was used with column temperature at 25℃ and the detection wave length was 220 nm. The results showed that the linear correlation coefficient was 0.9991, the standard deviation was 0.0019 and the average recovery was 99.04%. The method is found to be rapid, simple, high sensitivity, accurate quantitative, and the results are stable.

trans；trans-2, 4-Hexadienyl acetate;HPLC;analysis

2017-09-21

山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(CXGC2016B12)，2016年山東省農(nóng)業(yè)重大應(yīng)用技術(shù)創(chuàng)新項(xiàng)目

王瀅秀(1986—)，女，山東泰安人，工程師，碩士，主要從事農(nóng)藥分析工作；通訊作者：江忠萍(1982—)，江西吉安人，高級(jí)工程師，博士，主要從事農(nóng)藥、化工合成和分析，昆蟲(chóng)信息素制備及應(yīng)用推廣研究。

O657.7+2

A

1008-021X(2017)22-0066-03

(本文文獻(xiàn)格式：王瀅秀，李金濤，張作山，等.反,反-2, 4-己二烯乙酸酯高效液相色譜分析方法研究[J].山東化工，2017，46(22)：66-68.)