張亞麗 高 簡(jiǎn) 苗祥貞 張 瀟 劉永剛 譚 鵬

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102)

黃連多糖中單糖組成的HPLC-MSn法快速識(shí)別

張亞麗 高 簡(jiǎn) 苗祥貞 張 瀟 劉永剛 譚 鵬

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102)

目的：探討采用HPLC-MSn法快速識(shí)別黃連多糖中的單糖組成。方法：黃連藥材經(jīng)過(guò)提取、分離、除蛋白、除色素，最終得到黃連多糖，用2 mol/L的三氟乙酸水解黃連多糖，以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)作單糖衍生化試劑，利用HPLC-MSn識(shí)別黃連中單糖的組成，并解析其衍生物的裂解規(guī)律。結(jié)果：通過(guò)分析，得到的黃連多糖中含有甘露糖、核糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖/木糖、巖藻糖，其中核糖、巖藻糖為首次在黃連多糖中報(bào)道的單糖。結(jié)論：HPLC-MSn法對(duì)中藥多糖組分中的單糖成分進(jìn)行分析具有重要的指導(dǎo)意義。

黃連多糖；PMP；單糖；HPLC-MSn

黃連來(lái)源于毛茛科植物云連Coptis.teetaWall.、黃連C.chinensisFranch.和三角葉黃連C.deltoideaC.Y.ChengetHsiao的干燥根莖[1]，在中醫(yī)臨床上常用于清熱燥濕，瀉火解毒的病癥[2]。我國(guó)黃連資源豐富，并且其臨床應(yīng)用廣泛，效果顯著，千年來(lái)受到中醫(yī)的青睞，但黃連的化學(xué)成分復(fù)雜，其中許多成分，如小檗堿、黃連堿等具有很強(qiáng)的生理和藥理活性[3-11]。

黃連中含有大量的小檗堿類成分[12]，其化學(xué)和藥理方面是目前研究最為廣泛的一類[13-23]，但對(duì)黃連中的多糖類成分研究甚少[24-29]。呂秀梅等采用Box-Behnken設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)選出黃連中黃連多糖的提取工藝條件；姜爽等[30]探討了黃連多糖的最佳提取工藝及其體外抗氧化作用，證明了黃連多糖對(duì)超氧陰離子自由基、羥自由基和DPPH自由基均有一定的清除作用；吳玉娟等、王偉等[31]對(duì)黃連多糖進(jìn)行提取，并檢測(cè)了黃連多糖的抗氧化活性,均證明了黃連多糖作為抗氧化劑,具有較好的清除自由基的作用；熊雄等分離了黃連多糖成分，并研究黃連多糖及黃連水提液的降糖作用及機(jī)制，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明黃連多糖具有一定的降血糖活性，且其活性較水提液好；尹登科等[32]通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明黃連多糖可通過(guò)抑制RAGE表達(dá)，從而降低AGEs對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的激活作用。

黃連多糖已被證明有較好的活性，且多糖是在自然界中廣泛存在的化合物，其單糖成分的確定是控制多糖標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵。Honda等[33]于1989年首次使用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)對(duì)還原性單糖進(jìn)行LC分析；在此之后Wang等[34]采用PMP-HPLC-MSn，對(duì)鮑魚(yú)性腺多糖中的成分進(jìn)行了分析；Wu等[35]用HPLC/ESI-MS技術(shù)，對(duì)水解后的羊棲菜多糖衍生化反應(yīng)，對(duì)其中的單糖成分的分析也得到了較好的效果。本研究針對(duì)黃連多糖中的單糖類成分進(jìn)行分析，并首次采用HPLC-MSn法，根據(jù)單糖衍生化裂解規(guī)律確定黃連多糖中單糖成分的組成。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Thermo Scientific LTQ-Orbitrap線性離子阱串聯(lián)靜電軌道場(chǎng)高分辨質(zhì)譜，美國(guó)Thermo-Fisher公司；LC-20AT島津高效液相色譜儀，日本島津公司；2862H UV/VIS SPETRO photometer，尤尼科上海儀器有限公司；SHZ-D(III)循環(huán)水式多用真空泵，鞏義市予華儀器有限公司；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；電子天平PL2002，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司。

1.2 試劑 甲醇、乙腈(色譜純)，美國(guó)Fisher Scientific；D-101大孔樹(shù)脂購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司所；1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)、三氟乙酸(TFA)等均為分析純；水為高純水。

1.3 分析樣品 黃連購(gòu)自北京三和藥業(yè)有限公司，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定系教授鑒定為毛茛科植物黃連(RhizomaCoptidis)的干燥根莖，本文中的黃連多糖即用此中藥提取而得；D-半乳糖(Gal，AJ0603LA14)、D-甘露糖(Man，A16O6L4546)、L-鼠李糖(Rha，SJ0715GA13)、D-木糖(Xyl，JA412RA13)、D-葡萄糖(Glu，140648-200602)、D-阿拉伯糖(Ara，AJ0702FA14)、L-巖藻糖(Fuc,TM0312QB14)購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司所。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜條件：Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(250×4.6 mm)；流動(dòng)相：20 mmol/L醋酸銨(每100 mL加入1 mL冰醋酸)-乙腈(85∶15，v/v)；柱溫：室溫；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

質(zhì)譜條件：霧化電壓4.0 kV；管狀透鏡電壓110 V；鞘氣流量30 L/min；毛細(xì)管溫度350 ℃；輔助器流量10 L/min；負(fù)離子模式全掃描。分辨力R設(shè)為30 000，二級(jí)和三級(jí)質(zhì)譜采用數(shù)據(jù)依賴性掃描，選取上一級(jí)豐度最高的3個(gè)峰進(jìn)行CID碎片掃描，以離子阱檢測(cè)碎片離子。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 分別稱取甘露糖、半乳糖、葡萄糖各1.80 mg，鼠李糖、巖藻糖各1.64 mg，阿拉伯糖、木糖各1.50 mg，定容于10 mL氨水中。取氨水溶液500 μL于具塞試管中，加入0.5 mol/L的PMP甲醇溶液500 μL，超聲溶解，置于70 ℃水浴中加熱30 min。取出冷卻至室溫后加入10%的冰醋酸進(jìn)行中和，再加入1 mL的三氯甲烷，充分震搖、靜置，離心，棄去氯仿層，重復(fù)3次以除去未反應(yīng)的衍生化試劑PMP，將所得上清液進(jìn)行HPLC-MSn分析。

2.3 供試品溶液的制備 將干燥的黃連藥材粗粉100 g，先用10倍量的丙酮進(jìn)行脫脂，加熱回流1 h，再用10倍量水煎煮2次，2 h/次，離心10 min(4 000 r/min)，合并濾液，濃縮至200 mL，加入95%乙醇，使乙醇濃度達(dá)到80%，4 ℃靜置24 h，抽濾得草烏粗多糖沉淀，依次用丙酮、乙醇洗滌后得沉淀。

沉淀加適量水復(fù)溶，加入等量的sevage試劑(三氯甲烷：正丁醇4∶1)混合，充分震蕩，離心，取最上層水液，重復(fù)上述步驟數(shù)次，直至離心時(shí)中間層無(wú)蛋白出現(xiàn)，合并水層，同樣的醇沉方法，4 ℃放置24 h后抽濾，得沉淀。取適量用95%乙醇浸泡過(guò)夜的大孔樹(shù)脂裝層析柱，用少量蒸餾水溶解黃連多糖沉淀，蒸餾水洗脫，用α-奈酚反應(yīng)檢測(cè)流出液體至無(wú)紫色環(huán)生成，合并洗脫液用乙醇再次沉淀，抽濾，沉淀放烘箱中烘干。

精密稱取多糖樣品20 mg于具塞中試管中，加入2 mol/L的TFA 2 mL，密封，沸水浴加熱水解8 h后，冷卻至室溫，離心，水浴揮干TFA，然后加入氨水溶解并定容至5 mL容量瓶，取500 μL，按2.2中方法進(jìn)行PMP衍生化操作，得供試品溶液，進(jìn)行HPLC-MSn分析。

2.4 樣品測(cè)定結(jié)果

2.4.1 單糖對(duì)照品衍生化裂解規(guī)律 由圖1的單糖對(duì)照品總離子流圖可以看出利用液相色譜結(jié)合高分辨質(zhì)譜技術(shù)，且在負(fù)離子模式下單糖衍生物能夠獲得較高的響應(yīng)值，說(shuō)明了該方法適合于衍生化后單糖的分析。通過(guò)觀察負(fù)離子模式下PMP標(biāo)記的單糖標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜數(shù)據(jù)(見(jiàn)表1、圖2)發(fā)現(xiàn)單糖衍生物均顯示出強(qiáng)烈的分子離子峰[M-H]-；而二級(jí)碎片離子峰則出現(xiàn)相同的碎片離子[M-PMP-H]-，推斷二級(jí)斷裂應(yīng)為單糖衍生物掉落一分子PMP的結(jié)果；三級(jí)碎片離子均出現(xiàn)了強(qiáng)峰m/z 215，且推斷m/z 215碎片離子的生成可能是C2—C3鍵斷裂的結(jié)果，具有一致的裂解規(guī)律。具體裂解過(guò)程以葡萄糖衍生物為例見(jiàn)圖3。從單糖標(biāo)準(zhǔn)品衍生物總離子流圖可以看出保留時(shí)間為52 min時(shí)，僅有一個(gè)峰，但其峰端并沒(méi)有呈現(xiàn)尖狀，可能是由于阿拉伯糖和木糖極性較為相近，導(dǎo)致2個(gè)單糖衍生物不能很好的分開(kāi)。

2.4.2 黃連多糖的單糖組成 通過(guò)對(duì)酸水解黃連多糖的衍生化產(chǎn)物總離子流圖的各離子峰分析發(fā)現(xiàn)，在不同的保留時(shí)間處，出現(xiàn)了8個(gè)與單糖裂解規(guī)律相同的離子峰(圖4)。根據(jù)各個(gè)離子峰的質(zhì)譜裂解數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)其二、三級(jí)碎片離子均與標(biāo)準(zhǔn)品一致，更加驗(yàn)證了上述推導(dǎo)的單糖裂解規(guī)律，因此可初步判定黃連多糖由8種成分組成。根據(jù)已有標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，可以得出峰1、3、5、6、7、8分別為甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖(Glu)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Ara)/木糖(Xyl)、巖藻糖(Fuc)，進(jìn)一步，依據(jù)現(xiàn)有參考文獻(xiàn)[36-38]及各單糖保留時(shí)間(極性順序)，確定峰2、4分別為核糖(Rib)和半乳糖醛酸(Gal UA)，其中核糖、巖藻糖為首次在黃連多糖中發(fā)現(xiàn)的單糖，葡萄糖為黃連多糖中的主要成分。見(jiàn)表2。

圖1 PMP標(biāo)記的單糖標(biāo)準(zhǔn)品在負(fù)離子模式下的總離子流

No.保留時(shí)間(min)MSMS2MS3分子量單糖(標(biāo)品)126.05509.21335.13215.08180甘露糖232.74493.21319.13215.08164鼠李糖347.40509.21335.13215.08180葡萄糖449.24509.20335.12215.08180半乳糖552.29479.19305.11215.08150阿拉伯糖652.29479.19305.11215.08150木糖756.26493.21319.13215.08164巖藻糖

圖2 負(fù)離子模式下PMP標(biāo)記的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品的MS1-3碎片離子

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用PMP作為單糖的衍生化試劑,借助液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)闡述了單糖與PMP衍生化過(guò)程的反應(yīng)機(jī)理及裂解規(guī)律,從而根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品再依據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)推斷出黃連多糖中的單糖類成分，證明了該方法的可行性，并且首次從黃連多糖中鑒定出了核糖、巖藻糖，表明了糖類衍生物在所建立的質(zhì)譜條件下呈現(xiàn)出專一性，且醛酸類和非醛酸類單糖均符合該裂解途徑，為分析中藥多糖的成分奠定了良好的基礎(chǔ)。

表2 黃連多糖中單糖PMP衍生化產(chǎn)物的識(shí)別

圖3 負(fù)離子模式下PMP標(biāo)記的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品衍生物的質(zhì)譜裂解途徑

圖4 負(fù)離子模式下黃連多糖中單糖衍生物總離子流

通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)及數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品阿拉伯糖和木糖衍生化產(chǎn)物在總離子流圖上不能很好的分開(kāi)，可能是由于二者結(jié)構(gòu)、極性相近導(dǎo)致，黃連多糖樣品成分分析中，發(fā)現(xiàn)在保留時(shí)間50～51 min出現(xiàn)一個(gè)尖峰，但不能確定其為阿拉伯糖或木糖，亦或二者都存在。將多糖酸水解，再對(duì)水解的多糖進(jìn)行衍生化，利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)其衍生化物分析，能夠準(zhǔn)確的辨別其單糖組成，該方法準(zhǔn)確、可靠，在醫(yī)藥、食品、生命科學(xué)等領(lǐng)域也可廣泛應(yīng)用。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).《中華人民共和國(guó)藥典》2010版(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：285.

[2]王強(qiáng).中藥分析[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2005:306.

[3]王舒.中藥黃連研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2015,11(9):44-46.

[4]張?jiān)略?王君明,崔瑛,等.中藥生物堿類成分抗焦慮或抑郁活性及黃連生物堿藥理作用研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥雜志,2015,30(4):1184-1187.

[5]魯周南,包曉霞,薛曉鷗,等.黃連抗腫瘤臨床運(yùn)用及安全性評(píng)估研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2017,19(1):131-133.

[6]陸瑞群,龐雅琴,龐廣福.巖黃連的藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2014,11(5):159-160,165.

[7]徐維相.探討中藥黃連的研究進(jìn)展[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘(連續(xù)型電子期刊),2016,16(22):13,12.

[8]尹麗麗.黃連的藥理作用及現(xiàn)代研究進(jìn)展[J].中醫(yī)臨床研究,2016,8(28):144-145.

[9]曲華,張瑩,冒慧敏,等.黃連及其提取物治療心血管疾病的臨床研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2016,22(6):103-106.

[10]賴先榮,周邦華,杜明勝,等.6種黃連飲片中6種生物堿的RP-HPLC含量測(cè)定及與“治消渴”藥效學(xué)的譜-效關(guān)系分析[J].中國(guó)中藥雜志,2016,42(24):4579-4586.

[11]王婷婷,鐘凌云.姜制黃連炮制近年來(lái)研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2016,27(2):427-429.

[12]卿大雙,羅維早,孫建彬,等.一測(cè)多評(píng)法測(cè)定黃連及其炮制品中6種生物堿[J].中草藥,2016,42(2):324-329.

[13]劉丹,曹廣尚,司席席,等.黃連中生物堿類成分抗心律失常研究概述[J].山東中醫(yī)雜志,2017,36(2):164-166,171.

[14]黃程程,孫磊,張澤輝,等.中藥有效成分對(duì)細(xì)菌溶血素的抑制作用[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2016,43(12):3363-3367.

[15]王利紅,唐文照,辛義周.黃連中生物堿成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015,39(4):389-392.

[16]劉衛(wèi)霞,尤凱,孫燕.黃連解毒湯化學(xué)成分及臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2015,17(2):121-124.

[17]?；?吳效科.黃連素對(duì)PCOS治療作用及相關(guān)機(jī)制研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2017,26(3):235-237.

[18]馬聰穎,陳佳緯,盧長(zhǎng)林.黃連素在心血管疾病應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].中西醫(yī)結(jié)合心血管病(連續(xù)型電子期刊),2016,4(31):37-39.

[19]王維琪.黃連有效成分的藥理研究與進(jìn)展[J].中醫(yī)臨床研究,2016,8(26):147-148.

[20]張青,李琰,陳磊.黃連素對(duì)2型糖尿病及其并發(fā)癥的治療作用及相關(guān)機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志,2015,40(9):1660-1665.

[21]陳瑞,吳云,田維毅.黃連化學(xué)成分及其影響相關(guān)代謝途徑的研究進(jìn)展[J].湖南中醫(yī)雜志,2016,32(4):190-192.

[22]孟芳,譚小武.黃連素誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥雜志,2016,18(4):99-102.

[23]孫寧陽(yáng),張宏川,顧健,等.葛根黃連組分毒理學(xué)研究[J].中藥藥理與臨床,2017,33(1):95-98.

[24]Fan G，Tao LH，Yue QH，et al.Metabolic discrimination of rhizoma coptidis from different species using 1H NMR spectroscopy and principal component analysis[J].Planta Med，2012,78(6):641-648.

[25]Fan G，Zhang MY，Zhou XD，et al.Quality evaluation and species differentiation of Rhizoma coptidis by using proton nuclear magnetic resonance spectroscopy[J].Anal Chim Acta，2012,747:76-83.

[26]霍志鵬,王玉,周水平,等.黃連生物堿成分的HPLCDADMS分析[J].天津藥學(xué),2016,28(2):8-12.

[27]黃濤陽(yáng),王暉,翁燕君,等.電噴霧電離-串聯(lián)質(zhì)譜快速分析黃連解毒湯的化學(xué)成分[J].中藥材,2017,40(1):119-121.

[28]李云,王煒,尹登科,等.黃連多糖不同組分抗氧化活性比較研究[J].安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015,34(1):66-69.

[29]李敏,金晶,葉新,等.黃連多糖抗蛋白質(zhì)非酶糖基化活性初步研究[J].黑龍江大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào),2014,31(2):223-227.

[30]姜爽，李璐，王星云,等.黃連多糖提取工藝的優(yōu)化及其體外抗氧化作用[J].中成藥，2016,38(6):1405-1407.

[31]王偉,劉世軍，安法娥，等.黃連多糖提取、分離純化鑒定及清除羥基自由基能力測(cè)定[J].山東醫(yī)藥,2013，53(10):79-82.

[32]尹登科，楊曄，陳松，等.黃連多糖對(duì)AGEs誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖及其受體表達(dá)的作用研究[J].藥物生物技術(shù)，2012,19(6):476-479.

[33]Honda S，Akao E，Suzuki S，et al.High-performance liquid chromatography of reducing carbohydrates as strongly ultraviolet-absorbing and electrochemically sensitive 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone derivatives[J].Anal Biochem，1989,180(2):351-357.

[34]Wang HX，Zhao J，Li DM，et al.Structural investigation of a uronic acid-containing polysaccharide from abalone by graded acid hydrolysis followed by PMP-HPLC-MSnand NMR analysis[J].Carbohydr Res，2015，402:95-101.

[35]Wu X，Jiang W，Lu J，et al.Analysis of the monosaccharide composition of water-soluble polysaccharides from Sargassum fusiforme by high performance liquid chromatography/electrospray ionisation mass spectrometry[J].Food Chem，2014,145:976-983.

[36]Wang H，Zhao J，Li D，et al.Comparison of polysaccharides of Haliotis discus hannai and Volutharpa ampullacea perryi by PMP-HPLC-MS(n)analysis upon acid hydrolysis[J].Carbohydr Res，2015,415:48-53.

[37]趙宏,柴桂芳,王秋紅,等.一種車(chē)前子多糖的分離純化及單糖組成分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014,20(19):97-100.

[38]呂永磊,卜海博,楊蕾,等.烏頭母根、子根、須根多糖的比較[J].中國(guó)中藥雜志,2011,36(9):1154-1157.

MonosaccharideCompositionAnalysisofPolysaccharidesfromRhizomaCoptidisBasedonHPLC-MSn

Zhang Yali, Gao Jian, Miao Xiangzhen, Zhang Xiao, Liu Yonggang, Tan Peng

(SchoolofChineseMateriaMedica,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)

Objective:To explore a rapid identification of monosaccharide composition of polysaccharide from Rhizoma Coptidis through HPLC-MSn.MethodsAfter being extracted, separated, removed of protein and pigment, Rhizoma Coptidis polysaccharide was obtained from Rhizoma Coptidis. Polysaccharides of Rhizoma Coptidis was hydrolyzed with the TFA of 2 mol.L-1. 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP) was used as derivatization reagent. And high performance liquid chromatography-mass spectrometry (HPLC-MSn) was used to identify the composition of monosaccharide, and the resolve fragmentation regularity of its derivatives was analyzed.ResultsThrough analysis, the monosaccharides of polysaccharides from Rhizoma Coptidis were mannose, ribose, rhamnose, galacturonic acid, glucose, galactose, arabinose/ xylose, fucose, among which ribose and fucose were the first reported monosaccharides that obtained from polysaccharide of Rhizoma Coptidis.ConclusionHPLC-MSnhas a guiding significance in analyzing the monosaccharide composition of polysaccharides from Chinese materia medica.

Rhizoma Coptidis polysaccharide; PMP; Monosaccharide; HPLC-MSn

青年科學(xué)基金項(xiàng)目(81102807)

張亞麗(1993.03—)，女，碩士研究生，中藥炮制學(xué)方向，E-mail:Ali857@163.com

譚鵬(1980.02—)，男，博士，副教授，講師，中藥炮制研究，E-mail:tanpengtcm@163.com；劉永剛(1981.02—)，男，博士，副教授，講師，中藥化學(xué)研究，E-mail:liuyg0228@163.com

R284

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.11.053

(2016-12-28收稿 責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄)