龔文波，杜德燕，邱文英，朱冬梅，鄒智坤，郭建寶

（華派生物工程集團(tuán)有限公司，四川 簡(jiǎn)陽 641400）

豬支原體肺炎疫苗免疫效果評(píng)價(jià)

龔文波，杜德燕，邱文英，朱冬梅，鄒智坤，郭建寶

（華派生物工程集團(tuán)有限公司，四川 簡(jiǎn)陽 641400）

本試驗(yàn)以不同廠家生產(chǎn)的豬支原體肺炎疫苗接種健康仔豬，然后從增重情況、血清抗體效價(jià)、肺部病變?cè)u(píng)分及肺部病變減少率等多個(gè)方面對(duì)疫苗免疫效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，不同廠家生產(chǎn)的豬支原體肺炎疫苗的免疫效果存在較大差異，單一從某方面評(píng)價(jià)免疫效果所得出的結(jié)果可能存在偏差，如咳嗽指數(shù)與肺部評(píng)分就無直接相關(guān)性。

豬支原體肺炎；商品化疫苗；免疫效果；評(píng)價(jià)

豬肺炎支原體（Mhp）可引起豬支原體肺炎（MPS），也稱為豬喘氣病。該病具有高傳染性、高發(fā)病率和低死亡率的特點(diǎn)。豬肺炎支原體長期滯留于豬體內(nèi)且治療效果不佳，造成豬飼料轉(zhuǎn)化率降低，該病的廣泛性流行給養(yǎng)豬業(yè)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。疫苗在預(yù)防豬支原體肺炎中起著至關(guān)重要的作用，如何合理地評(píng)價(jià)疫苗效果從而指導(dǎo)豬場(chǎng)正確選用豬支原體肺炎疫苗對(duì)養(yǎng)豬場(chǎng)戶尤為重要。基于此，本試驗(yàn)從市場(chǎng)上采購了幾種常見的商品化豬支原體肺炎疫苗，以盲樣方式進(jìn)行免疫接種及攻毒，然后進(jìn)行免疫效果比較。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗 選用6個(gè)廠家生產(chǎn)的商品化豬支原體肺炎疫苗，每種疫苗抽取3瓶混合（至少20 mL），記錄疫苗類型、批號(hào)、生產(chǎn)日期等信息，分別標(biāo)記為疫苗A、疫苗B、疫苗C、疫苗 D、疫苗E及疫苗F，將標(biāo)記好的盲樣送往相關(guān)檢驗(yàn)小組進(jìn)行免疫效果評(píng)價(jià)。

1.1.2 主要試劑盒 豬支原體肺炎（ELISA）抗體檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：HK575，購自IDEXX公司；豬支原體肺炎微量間接血凝（IHA）檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：2016003，由華派生物工程集團(tuán)有限公司自制。

1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 14日齡健康仔豬，豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病、豬瘟抗原陰性，豬放射性胸膜肺炎、豬支原體肺炎母源抗體陰性。

1.1.4 攻毒用毒種 豬支原體濟(jì)南系凍干肺組織毒，由華派生物工程集團(tuán)有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 將80頭14日齡健康仔豬隨機(jī)分為8組，每組10頭，分別標(biāo)記為A組、B組、C組、D組、E組、F組、空白對(duì)照組及攻毒對(duì)照組?？瞻讓?duì)照組仔豬在獨(dú)立的環(huán)境中隔離飼養(yǎng)，各組仔豬的環(huán)境條件及飼養(yǎng)管理均保持一致。

1.2.2 免疫 每組仔豬在14日齡接種相同標(biāo)記的豬支原體肺炎疫苗，接種劑量為每頭豬1頭份（2 mL），接種方式按廠家說明書進(jìn)行，攻毒對(duì)照組每頭接種2mL生理鹽水。首免后14 d加強(qiáng)免疫一次，免疫劑量為1頭份/頭，攻毒對(duì)照組每頭接種2mL生理鹽水。

1.2.3 攻毒 加強(qiáng)免疫后4d進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)。疫苗接種組及攻毒對(duì)照組的每頭仔豬經(jīng)氣管內(nèi)接種豬肺炎支原體濟(jì)南系凍干肺組織毒5mL（含100MID），攻毒后連續(xù)觀察25d進(jìn)行剖殺。

1.2.4 免疫效果評(píng)價(jià)指標(biāo)

1.2.4.1 日增重 所有試驗(yàn)豬在免疫當(dāng)天、攻毒當(dāng)天及剖殺當(dāng)天進(jìn)行稱重，計(jì)算各個(gè)階段的日增重情況。

1.2.4.2 免疫接種后臨床癥狀觀察 所有試驗(yàn)豬在免疫后進(jìn)行臨床癥狀觀察，觀察內(nèi)容包括：精神、食欲、注射部位反應(yīng)、全身反應(yīng)等。

1.2.4.3 血清抗體檢測(cè) 于免疫當(dāng)天（未接種前）及首免后14d、28d、42d分別采血，采用IDEXX抗體檢測(cè)試劑盒、自制微量間接血凝檢測(cè)試劑盒進(jìn)行血清抗體檢測(cè)。

1.2.4.4 攻毒后臨床癥狀觀察及咳嗽指數(shù) 所有試驗(yàn)豬在攻毒后連續(xù)觀察25d，每天上午、下午各觀察1次，每次至少觀察15min。檢測(cè)范圍包括總體健康狀況、活動(dòng)情況、精神食欲狀況和咳嗽指數(shù)。咳嗽指數(shù)標(biāo)記如下：0（沒有咳嗽），1（追趕時(shí)輕度咳嗽），2（休息時(shí)輕度咳嗽），3（追趕時(shí)溫和咳嗽），4（休息時(shí)溫和咳嗽），5（追趕時(shí)嚴(yán)重咳嗽），6（休息時(shí)嚴(yán)重咳嗽）。計(jì)算每組每天的平均咳嗽指數(shù)。

1.2.4.5 肺臟病變情況 攻毒后25d剖殺試驗(yàn)豬，采用Goowin氏55分記分法對(duì)肺臟病變情況進(jìn)行評(píng)分，記分標(biāo)準(zhǔn)為：每個(gè)尖葉、心葉滿分各為10分，膈葉的前三分之一滿分為5分，中間葉滿分為5分。病變記分時(shí)，分別對(duì)每個(gè)肺葉進(jìn)行記分，根據(jù)發(fā)生實(shí)質(zhì)病變的肺葉面積占該肺葉的比例進(jìn)行打分，如滿分為10分的肺葉有3/10的面積產(chǎn)生實(shí)質(zhì)化病變則該肺葉打3分，如滿分為5分的肺葉有3/10的面積產(chǎn)生實(shí)質(zhì)化病變則該肺葉打1.5分。記分時(shí)只對(duì)肺葉的一面進(jìn)行記分，如肺葉兩面均有病變，以病變面積大的一面進(jìn)行記分。各個(gè)肺葉打分總和即為該發(fā)病豬的肺部病變得分。分別對(duì)免疫組豬和對(duì)照組豬進(jìn)行記分，按照以下公式計(jì)算各組免疫豬的肺部病變減少率：

肺部病變減少率=（對(duì)照豬肺炎幾何平均分-免疫豬肺炎幾何平均分）/對(duì)照豬肺炎幾何平均分×100%

2 結(jié)果

2.1 平均增重 試驗(yàn)結(jié)果表明，在免疫后至攻毒前，D組、E組試驗(yàn)豬的平均增重及平均日增重優(yōu)于空白對(duì)照組及攻毒對(duì)照組；A組試驗(yàn)豬的平均增重和平均日增重與攻毒組相當(dāng)，略低于空白對(duì)照組；B組、C組及E組試驗(yàn)豬的平均增重、平均日增重相當(dāng)，均明顯低于空白對(duì)照組及攻毒對(duì)照組。在攻毒后，由于各組疫苗免疫效果的差異，試驗(yàn)豬產(chǎn)生的免疫保護(hù)力也有所不同，因此其健康狀況所受影響不同，從而導(dǎo)致各組平均體重存在明顯差異。其中D組和F組的平均增重明顯優(yōu)于其余各疫苗組和空白對(duì)照組，A組、B組及E組的平均增重較低，顯著低于空白對(duì)照組。結(jié)果見表1。

表1 各組試驗(yàn)豬各階段增重情況 kg

2.2 接種后臨床癥狀觀察結(jié)果 除A組試驗(yàn)豬在接種疫苗后有2/10出現(xiàn)精神不振、食欲下降的臨床癥狀外，其余5組試驗(yàn)豬在接種疫苗后均精神食欲正常，注射部位無紅腫炎癥現(xiàn)象，無局部或全身不良反應(yīng)。

2.3 各時(shí)間點(diǎn)血清抗體檢測(cè) 用2種試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示：C、D組和F組在各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的抗體水平均明顯優(yōu)于其余各疫苗組；B組、D組和F組首免后6周抗體水平處于上升趨勢(shì)，而A組、C組及E組抗體水平在首免后第4周達(dá)到高峰，第6周開始呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；空白對(duì)照組及攻毒對(duì)照組抗體水平無明顯變化，均為陰性。綜合各組抗體水平試驗(yàn)結(jié)果，D組及F組抗體水平顯著高于其余疫苗組，且其高抗體水平維持時(shí)間較其余疫苗組長，說明免疫接種疫苗D及疫苗F的免疫豬更有可能獲得更高的免疫保護(hù)力及更長的免疫保護(hù)期（結(jié)果見表2）。

表2 各時(shí)間點(diǎn)血清抗體水平檢測(cè)結(jié)果

對(duì)兩種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)：ELISA方法的抗體水平消長趨勢(shì)與IHA方法基本一致，兩種檢測(cè)方法具有很高的符合率。而采用IHA方法能檢測(cè)出試驗(yàn)豬的具體抗體水平，可以為分析免疫個(gè)體及群體的抗體水平提供可靠依據(jù)。

2.4 攻毒后臨床癥狀觀察及咳嗽指數(shù) 在使用豬肺炎支原體強(qiáng)毒株進(jìn)行攻毒后，發(fā)現(xiàn)D組和F組各有1頭在追趕時(shí)出現(xiàn)輕度咳嗽，D組和F組所有試驗(yàn)豬未出現(xiàn)其他臨床癥狀；其余免疫組的咳嗽頭數(shù)和咳嗽指數(shù)均高于D組和F組；空白對(duì)照組所有試驗(yàn)豬未出現(xiàn)咳嗽、氣喘等臨床癥狀；攻毒對(duì)照組試驗(yàn)豬有10頭出現(xiàn)咳嗽、氣喘、食欲下降等癥狀。攻毒后25d觀察期內(nèi)，最早出現(xiàn)咳嗽癥狀的為攻毒對(duì)照組仔豬，部分試驗(yàn)豬在攻毒后第7d出現(xiàn)咳嗽癥狀，部分免疫豬在攻毒后25d觀察到咳嗽癥狀。

2.5 肺部病變情況 使用豬肺炎支原體強(qiáng)毒進(jìn)行攻毒后，采用Goodwin氏55分法記分，結(jié)果如下：攻毒對(duì)照組的肺部病變?cè)u(píng)分平均為43.75，D組和F組試驗(yàn)豬的肺部病變?cè)u(píng)分最低，肺部病變減少率效果相當(dāng)，表明試驗(yàn)豬接種疫苗D及疫苗F后能有效抵抗豬肺炎支原體強(qiáng)毒的攻擊。A組肺部病變減少率較低，低于60%，B組、C組及E組的肺部病變減少率均在60%～70%之間（結(jié)果見表3）。

表3 各組肺部病變?cè)u(píng)分及肺部病變減少率

2.6 咳嗽指數(shù)與肺部病變減少率的相關(guān)性分析 在70頭攻毒試驗(yàn)豬中，有26頭發(fā)生了咳嗽，其中2頭試驗(yàn)豬的肺部病變減少率大于等于60%，而在未觀察到咳嗽的54頭試驗(yàn)豬中，有16頭試驗(yàn)豬的肺部病變減少率小于60%。結(jié)果表明：咳嗽指數(shù)與肺部病變減少率無直接相關(guān)性，因此咳嗽指數(shù)只能作為豬支原體肺炎疫苗免疫效果評(píng)價(jià)的輔助判定指標(biāo)，不能完全代替肺部病變減少率這一金標(biāo)準(zhǔn)（結(jié)果見表4）。

表4 咳嗽指數(shù)與肺部病變減少率的相關(guān)性 頭

3 小結(jié)與分析

雖然使用豬支原體肺炎疫苗并不能阻止豬群感染該病原[2-3]，但進(jìn)行疫苗免疫接種后能有效減少支原體在呼吸道的定植，同時(shí)降低豬群的感染水平[4]。另有研究報(bào)道，接種疫苗可減少商品豬的臨床癥狀及肺部損傷，降低治療費(fèi)用[5]。本試驗(yàn)采用盲樣法進(jìn)行檢測(cè)，以保證檢驗(yàn)的公正有效性。在免疫效果評(píng)價(jià)過程中，分別以增重情況、免疫接種后的臨床癥狀觀察、血清抗體水平檢測(cè)、攻毒后咳嗽指數(shù)、攻毒后肺部病變?cè)u(píng)分及肺部病變減少率等作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果表明：免疫接種疫苗D（商品名：支肺通）和疫苗F的試驗(yàn)豬在日增重、血清抗體效價(jià)、攻毒后咳嗽指數(shù)、攻毒后的肺部病變減少率等方面均優(yōu)于其余疫苗。

從本次試驗(yàn)可以看出，在豬支原體肺炎滅活疫苗的免疫效果評(píng)價(jià)指標(biāo)中，試驗(yàn)攻毒后的增重、接種后的血清抗體水平、攻毒后的肺部病變減少率存在正相關(guān)性，而咳嗽指數(shù)與肺部病變減少率無直接相關(guān)性。肺炎病變減少率越高，則增重越明顯。有報(bào)道稱，由豬肺炎支原體引起的肺炎每10%的病變區(qū)域可以導(dǎo)致體重少增加23～37 g/d，對(duì)日齡小的豬的影響更大，日齡小的豬感染豬肺炎支原體后，對(duì)體重的影響是終生的，而肺損傷過程有時(shí)并不能觀察到臨床癥狀。因此，養(yǎng)豬場(chǎng)在判定豬只是否感染豬肺炎支原體時(shí)，不能僅根據(jù)豬只是否有咳嗽而判定。在血清抗體效價(jià)檢測(cè)中，ELISA方法的抗體水平消長趨勢(shì)與IHA方法基本一致，兩種檢測(cè)方法具有很高的符合率。采用IHA方法能檢測(cè)出試驗(yàn)豬的具體抗體水平，可以為分析免疫個(gè)體及群體的抗體水平提供可靠依據(jù)，且操作簡(jiǎn)單、成本更加低廉、無需專門的檢測(cè)儀器，因此更適用于基層獸醫(yī)部門及養(yǎng)殖場(chǎng)?！?/p>

[1] Barbara E，Jeffery J，Sylvie D，et al.Diseases of Swine[M].9th Edition.United States：Wiley Blackwell，2006：785-787.

[2] Maes D，Deluyker H，Verdonck M，et al.Effect of vaccination againstMycoplasma hyopneumoniae in pig herds with an all-in/all-out production system[J].Vaccine，1999，17（9-10）：1024-1034.

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Evaluation of Immune Effect on Mycoplasma Hyopneumoniae Vaccine

Gong Wenbo，Du Deyan，Qiu Wenying，et al.

（Sichuan Huapai Bioengineering Group Co.,Ltd.，Sichuan Jianyang 641400，China）

The purpose of this research was to evaluate the immune effect of different commercial Mycoplasma hyopneumoniae vaccine.Firstly，healthy piglets were immunized with vaccines from different manufacturers，then the weight gain，serum antibody titer，lung lesion score and lung lesion reduction rate of pigets were detected to evaluate the effect of vaccine.The results showed that the immune effects of different vaccines had large differences，evaluating the immune effect from single aspect may be a deviation，such as cough index score wasn,t associated with lung lesion score.

Mycoplasma hyopneumoniae；Commercial vaccine；Immune effect；Evaluation

S852.4

B

1001-8964（2017）12-0024-04

2017-08-07

龔文波（1965-），男，重慶墊江人，碩士研究生，高級(jí)工程師，華派生物工程集團(tuán)有限公司總經(jīng)理，主要從事獸用生物制品的研發(fā)及生產(chǎn)管理。