張正貴

（湖北省襄陽(yáng)市第二人民醫(yī)院，湖北 襄陽(yáng) 441001）

痤瘡合劑的制備及其黃芩苷含量測(cè)定

張正貴

（湖北省襄陽(yáng)市第二人民醫(yī)院，湖北 襄陽(yáng) 441001）

目的制備痤瘡合劑并測(cè)定方中黃芩苷的含量。方法 采用煎煮法制備痤瘡合劑，采用三波長(zhǎng)紫外分光光度法測(cè)定合劑中黃芩苷的含量。結(jié)果黃芩苷質(zhì)量濃度在3．872～48．530 g／m L范圍內(nèi)與吸光度值線性關(guān)系良好，r＝0．9946(n＝7)，平均加樣回收率為97．40%，RSD＝1．76%（n＝5）。結(jié)論痤瘡合劑的制備方法簡(jiǎn)便易行，質(zhì)量可控。

痤瘡合劑；三波長(zhǎng)紫外分光光度法；黃芩苷；質(zhì)量控制

痤瘡合劑由黃芩、枇杷葉、桑白皮、地骨皮、山楂等中藥組方，具有清熱利濕、解毒瀉火及活血涼血的功效，主治痤瘡、粉刺、丘疹、膿皰、結(jié)節(jié)囊腫及皮脂腺炎等癥，是我院皮膚科臨床驗(yàn)方，應(yīng)用近6年，臨床療效滿意，辨證防治有效率為 92．66%[1]。本研究中制備了痤瘡合劑，并以主藥黃芩所含成分黃芩苷作為含量測(cè)定指標(biāo)，采用三波長(zhǎng)紫外分光光度法測(cè)定含量，為建立該合劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

UV－2401PC型紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；53WBⅡ型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海光學(xué)儀器廠）；ES－E120型電子分析天平（上海信衡電子科技有限公司）；恒溫箱（武漢電器儀器廠）。

1．2 試藥

黃芩苷對(duì)照品（湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，批號(hào)為 110765－201614）；痤瘡合劑（湖北省襄陽(yáng)市第二人民醫(yī)院制劑室自制，批號(hào)分別為20160208，20160609，20161015）；其他試劑均為分析純；試驗(yàn)所用中藥材均購(gòu)自襄陽(yáng)九州通醫(yī)藥有限公司，由湖北省襄陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所張勤主任藥師鑒定均為正品，符合《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。

2 方法與結(jié)果

2．1 處方

黃芩 7．2 kg，枇杷葉 7．2 kg，桑白皮 7．2 kg，地骨皮7．2 kg，山楂 7．2 kg，茵陳 7．2 kg，梔子 4．8 kg，大黃 1．4 kg，石膏14 kg，白花蛇舌草14 kg。

2．2 樣品制備

按處方比例稱取2．1項(xiàng)下10味藥材，置傾斜式夾層煎煮鍋中，加水浸泡約1 h，煎煮2次，煎煮時(shí)間分別為2 h和1．5 h，合并2次煎煮濾液，置濃縮鍋中常壓濃縮，于60～70℃測(cè)定濃縮液的相對(duì)密度，超過(guò)1．04即合格，再將合格的濃縮液靜置、過(guò)濾、分裝、消毒，貼標(biāo)簽，即得樣品[2]。

2．3 黃芩苷含量測(cè)定（三波長(zhǎng)紫外分光光度法）

2．3．1溶液制備

對(duì)照品溶液：稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的黃芩苷對(duì)照品25．1mg，精密稱定，置50m L容量瓶中，用40%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為0．502 g／L的溶液，即得。

供試品溶液：準(zhǔn)確吸取2．2項(xiàng)下方法制備的痤瘡合劑上清液7mL，置分液漏斗中，并連續(xù)用乙酸乙酯萃取6次，每次10mL，合并萃取液，置蒸發(fā)皿中水浴濃縮至無(wú)溶劑[3]，再用40%乙醇溶解，轉(zhuǎn)入100m L容量瓶中，冷卻至室溫，用40%乙醇定容至刻度，搖勻，即得。

陰性對(duì)照品溶液：稱取除外黃芩、與痤瘡合劑處方同比例的中藥材，按2．2項(xiàng)下方法制備 1000 m L陰性樣品合劑。取陰性樣品合劑，按供試品溶液制備方法制成相當(dāng)于生藥含量為48．08 g／L的溶液，即得。

混合對(duì)照品溶液：分別用移液管精密吸取上述對(duì)照品溶液2m L和陰性對(duì)照品溶液10m L，置100m L容量瓶中，用40%乙醇定容至刻度，搖勻，制成含黃芩苷對(duì)照品 10．04μg／m L 和生藥 4808μg／m L的溶液，即得。

2．3．2測(cè)定波長(zhǎng)選擇

吸收曲線：取2．3．1項(xiàng)下對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照品溶液，分別以40%乙醇稀釋50倍和10倍，制成質(zhì)量濃度為 10．04，4808μg／m L的稀釋溶液。取 2種稀釋溶液及2．3．1項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，分別以UV－2401PC型紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)在200～350 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。以40%乙醇為空白，繪制各溶液的紫外吸收曲線，詳見(jiàn)圖1。

圖1 黃芩苷紫外吸收光譜圖

測(cè)定波長(zhǎng)：根據(jù)圖1，按作圖法及計(jì)算法[4－6]任選陰性對(duì)照品溶液（干擾組分）的最大吸收波長(zhǎng)258．0 nm為λ1，黃芩苷對(duì)照品溶液的最大吸收波長(zhǎng) 278．3 nm為λ2，求得大概波長(zhǎng) λ3為 302．0 nm，按 ΔA＝ A2－[（λ3－λ2） A1＋ （λ2－λ1） A3] ／[（λ3－λ2） ＋ （λ2－λ1）]，求得使干擾組分 ΔA值為 0的 A3對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng) λ3。取 2．3．1項(xiàng)下對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照品溶液，分別以40%乙醇稀釋 50倍和 10倍，制成質(zhì)量濃度分別為 10．04，4808μg／m L的稀釋溶液，以 UV－2401PC型紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)在200～350 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，測(cè)定吸光度，結(jié)果見(jiàn)表 1，可知，λ3確定為 303．0 nm。

2．3．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取0．502 g／L的黃芩苷對(duì)照品溶液 0．4，0．5，0．8，1．0，2．0，4．0，5．0 mL，分別置50 mL容量瓶中，加40%乙醇稀釋至刻度，搖勻，以40% 乙醇為空白，分別于 258．0，278．3，303．0 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以ΔA值對(duì)質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 ΔA＝0．03053C－0．001574，r＝0．9946（n＝7）。結(jié)果表明，黃芩苷質(zhì)量濃度在 3．872 ～48．530μg／m L范圍內(nèi)與 ΔA線性關(guān)系良好[7]。

精密度試驗(yàn)：精密吸對(duì)照品貯備液20μL，照線性關(guān)系考察方法重復(fù)測(cè)定吸光度5次，記錄ΔA值。結(jié)果的 RSD為1．15%(n＝52)，表明儀器精密度良好。

表1 計(jì)算法選擇測(cè)定波長(zhǎng) 3結(jié)果

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，2，6，10，16 h時(shí)測(cè)得 ΔA值。結(jié)果的 RSD 為 1．09(n＝5)，表明供試品溶液在16 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品合劑（批號(hào)為20161015）適量，依法制備供試品溶液，平行測(cè)定吸光度5次。結(jié)果的RSD為1．05%（n＝5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)[8]：準(zhǔn)確吸取已知黃芩苷質(zhì)量濃度的樣品7 mL，共5份，分別置分液漏斗中，分別加入一定量的黃芩苷對(duì)照品溶液，搖勻，依法制備供試品溶液。再用40%乙醇稀釋10倍，以40%乙醇為空白，測(cè)定其在258．0，278．3，303．0 nm 波長(zhǎng)處的吸光度，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

2．3．4樣品含量測(cè)定

準(zhǔn)確量取3批痤瘡合劑上清液，依法制備供試品溶液。以 40%乙醇為空白溶液，依法測(cè)定在 258．0，278．3，303．0 nm波長(zhǎng)處的吸光度，計(jì)算ΔA，代入回歸方程，求得供試品溶液中黃芩苷的質(zhì)量濃度（μg／m L），并換算成合劑中黃芩苷的質(zhì)量濃度（g／L）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）

表3 樣品中黃芩苷含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

痤瘡合劑是我院皮膚科療效確切的中藥制劑，已應(yīng)用近20年，已取得當(dāng)?shù)刂苿┥a(chǎn)批號(hào)（鄂藥制字Z20081773），該制劑中黃芩具有清熱解毒、澡濕瀉火的功效，是方中君藥[9－10]，由于黃芩苷的含量檢測(cè)比較成熟，關(guān)于黃芩苷的檢測(cè)手段也比較多，但大多數(shù)報(bào)道均采用高效液相色譜法[11]，對(duì)于基層醫(yī)院，受無(wú)高效液相色譜儀的條件限制，故本研究中采用三波長(zhǎng)分光光度法對(duì)黃芩苷進(jìn)行含量檢測(cè)，所采用的紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)成本較低，在基層醫(yī)院也較普及，方法重復(fù)性也很好。

中醫(yī)認(rèn)為，痤瘡病多因濕熱蘊(yùn)結(jié)而起，故以清熱利濕、解毒瀉火及活血涼血功效來(lái)組方[12－14]。在測(cè)定該合劑的黃芩苷成分時(shí)，單用單一波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定，由于陰性干擾，無(wú)法測(cè)定，故采用三波長(zhǎng)方法測(cè)定，可有效消除陰性干擾。從3種組分的紫外圖譜可以看出，混合組分的最大吸收波長(zhǎng)與標(biāo)準(zhǔn)品的最大吸收波長(zhǎng)相同，均在278．3 nm 波長(zhǎng)處。

痤瘡合劑所含成分較多，制劑原料及制備工藝均直接影響制劑療效[15]，方中黃芩為君藥，對(duì)本制劑的療效有一定代表性，選其作為檢測(cè)對(duì)象。由測(cè)定結(jié)果可見(jiàn)，痤瘡合劑中黃芩苷的含量在 0．335～0．349 g／L 內(nèi)。本法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，可作為該合劑質(zhì)量控制中的定量方法。但本方法也存在一定不足，如對(duì)于合劑檢測(cè)前的預(yù)處理較繁雜，不符合現(xiàn)代快檢的要求，有待今后改進(jìn)。

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Preparation of Acne Mixture and Content Determination of Baicalin

Zhang Zhenggui

（ The Second People′s Hospital of Xiangyang City， Xiangyang， Hubei， China 441001）

Objective To prepare Acne Mixture and determine the content of baicalin in Acne Mixture．Methods Decoction method was used for production of Acne Mixture and the content of baicalin in the Acne Mixture was determined by three－wavelength ultraviolet spectrophotometry．Results The mass concentration of baicalin had a good linear relationship with the absorbance value in the range of 3．872－48．530 μg／mL（r＝0．9946，n＝7），the average recovery was 97．40% ，and the RSD was 1．76% （n＝5）．Conclusion The preparation method of Acne Mixture is simple，and the quality is controllable．

Acne Mixture；three－wavelength ultraviolet spectrophotometry；baicalin；quality control

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2017)24－0025－03

10．3969 ／j．issn．1006－4931．2017．24．008

張正貴（1962－），男，大學(xué)本科，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┑难邪l(fā)，（電子信箱）1160725705＠qq．com。

2017－07－04；

2017－09－17)