齊光照,薄 惠,王維杰(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部,鄭州 45005;黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院;鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝膽胰外科;通訊作者,E-mail:cyp4509@6.com)

中原地區(qū)漢族和回族中國(guó)人群CYP2C9*3、VKORC1-1639G>A和CYP4F2*3的遺傳多態(tài)性

齊光照1,薄 惠2,王維杰3*
(1鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部,鄭州 450052;2黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院;3鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝膽胰外科;*通訊作者,E-mail:cyp450239@126.com)

目的 探討參與華法林藥物反應(yīng)的功能性變異體CYP2C9*3、VKORC1-1639G>A和CYP4F2*3在中原地區(qū)漢族和回族中國(guó)人群的遺傳多態(tài)性。 方法 提取285例無(wú)血緣關(guān)系的健康中國(guó)志愿者(包括175例漢族和110例回族)外周血DNA進(jìn)行基因型分析。CYP2C9*3和VKORC1-1639G>A的基因型頻率通過(guò)多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性的方法檢測(cè),而CYP4F2*3的基因型通過(guò)多聚酶鏈反應(yīng)-Sanger測(cè)序的方法檢測(cè)。將中原地區(qū)漢族和回族CYP2C9*3、VKORC1-1639G>A和CYP4F2*3的等位基因頻率與文獻(xiàn)已報(bào)道的高加索人和非洲人頻率進(jìn)行比較。 結(jié)果 漢族和回族的CYP2C9*3等位基因頻率分別為3.7%和5.5%。回族CYP2C9*3等位基因頻率顯著高于已報(bào)道的非裔美國(guó)人頻率(2.0%,P<0.05)。漢族和回族VKORC1-1639A等位基因頻率分別為90.3%和87.3%。漢族和回族VKORC1-1639A等位基因頻率都顯著高于已報(bào)道的非裔美國(guó)人頻率(10.8%,P<0.05)和高加索人頻率(40.6%,P<0.05)。漢族和回族CYP4F2*3等位基因頻率分別為26.3%和22.3%。漢族和回族CYP4F2*3等位基因頻率都顯著高于已報(bào)道的非裔美國(guó)人頻率(11.7%,P<0.05),但顯著低于已報(bào)道的高加索人頻率(34.2%,P<0.05)。 結(jié)論 中原地區(qū)漢族和回族中國(guó)人群具有相似的CYP2C9*3、VKORC1-1639G>A和CYP4F2*3的遺傳多態(tài)性頻率,但與文獻(xiàn)已報(bào)道的非洲人和高加索人頻率存在顯著差異。

CYP2C9; CYP4F2; VKORC1; 回族; 漢族; 遺傳多態(tài)性

香豆素類抗凝劑如華法林廣泛應(yīng)用于肺栓塞、深靜脈血栓形成、心臟瓣膜手術(shù)、中風(fēng)和房顫等患者[1]。但是華法林治療窗較窄,在其抗凝治療期間常發(fā)生嚴(yán)重的藥物不良反應(yīng)如出血,因此為了治療的安全性和有效性確定一個(gè)合適的華法林維持劑量顯得尤為重要。細(xì)胞色素酶P450 2C9(cytochrome P450 2C9,CYP2C9)以及維生素K環(huán)氧化物還原酶復(fù)合體亞基1(vitamin K epoxide reductase complex subunit 1,VKORC1)和CYP4F2參與華法林的藥效學(xué)和藥動(dòng)學(xué)過(guò)程(見(jiàn)圖1),多項(xiàng)候選基因研究[2-4]和全基因組關(guān)聯(lián)研究[5-9]發(fā)現(xiàn)這3個(gè)基因的遺傳多態(tài)性與華法林治療反應(yīng)的個(gè)體間和群體間差異相關(guān)?；刈迨俏覈?guó)人口較多的一個(gè)少數(shù)民族[10],2010年第六次人口普查全國(guó)有10 586 087人,其中河南省有957 964人。本研究考察了中原地區(qū)漢族和回族中國(guó)人群CYP2C9*3、VKORC1-1639G>A和CYP4F2*3的遺傳多態(tài)性,并與已報(bào)道的其他世界人群進(jìn)行了比較,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

CYP2C9是華法林的代謝酶,催化華法林代謝為無(wú)活性代謝產(chǎn)物;VKORC1是華法林的藥物作用靶點(diǎn),催化環(huán)氧型維生素K(KO)還原為氫醌型維生素K(KH2);CYP4F2是氫醌型維生素K的代謝酶,催化氫醌型維生素K代謝為羥基化維生素K圖1 華法林作用通路中CYP2C9、VKORC1和CYP4F2的作用Figure 1 Role of CYP2C9, VKORC1 and CYP4F2 in the pharmacokinetics and pharmacodynamics procedure of S-warfarin

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集285例無(wú)血緣關(guān)系的健康中國(guó)志愿者(包括175例漢族和110例回族)外周血DNA進(jìn)行基因型分析。每個(gè)受試者至少三代都是同一民族,即其父母及祖父母和外祖父母皆為同一民族。本研究符合《赫爾辛基宣言》相關(guān)倫理規(guī)定并得到鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。受試者均簽署書(shū)面知情同意書(shū)。

1.2 基因型分析

利用DNA提取試劑盒QIAamp DNA Blood Mini Kits(Qiagen Inc.,Valencia,CA,USA)從乙二胺四乙酸(EDTA)處理的外周血提取基因組DNA。CYP2C9*3和VKORC1-1639G>A的基因型通過(guò)多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性的方法確定[11-14],而CYP4F2*3的基因型通過(guò)多聚酶鏈反應(yīng)-Sanger測(cè)序的方法確定[15]。PCR條件及基因型分析的相關(guān)信息見(jiàn)表1。CYP2C9*3和VKORC1-1639G>A基因型分析的電泳圖分別見(jiàn)圖2和圖3,CYP4F2*3的測(cè)序峰圖見(jiàn)圖4。

表1PCR擴(kuò)增引物和基因型分析條件

Table1SelectedprimersandconditionsforPCRamplificationandgenotypeanalysisofCYP2C9*3,VKORC1-1639G>AandCYP4F2*3

單核苷酸多態(tài)性引物序列 退火溫度/延伸時(shí)間(℃/s)PCR產(chǎn)物(bp)檢測(cè)方法凝膠電泳片段長(zhǎng)度(bp)CYP2C9?3F：AGGAAGAGATTGAACGTGTGAR：GGCAGGCTGGTGGGGAGAAGGCCAA58/30130多聚酶鏈反應(yīng)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性?1：130?3：104，26VKORC1?1639G>AF：ATCCCTCTGGGAAGTCAAGCR：CACCTTCAACCTCTCCATCC58/35636多聚酶鏈反應(yīng)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性G：472，115，49A：521，115CYP4F2?3F：GTGTCTTTGCTCCCTTGAR：CTGGAACTTGGACCATCTAC60/45701PCR?Sanger測(cè)序無(wú)

F:上游引物;R:下游引物

M. 50 bp DNA分子量標(biāo)準(zhǔn);1,3-9.野生型純合子CYP2C9*1/*1;2.雜合子CYP2C9*1/*3圖2 多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性的方法對(duì)CYP2C9*3基因型分析的電泳圖Figure 2 Electrophoresis of CYP2C9*3 genotyping by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism analysis(3% agarose)

M.50 bp DNA分子量標(biāo)準(zhǔn);10.野生型純合子VKORC1-1639GG;1,2,4-6,8,9,11.突變純合子VKORC1-1639AA;3,7.雜合子VKORC1-1639GA圖3 多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性的方法對(duì)VKORC1-1639G>A基因型分析電泳圖Figure 3 Electrophoresis of VKORC1-1639G>A genotyping by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism analysis (3% agarose)

1.3 單核苷酸多態(tài)性數(shù)據(jù)庫(kù)等位基因頻率資料的收集

從兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)(國(guó)際HapMap工程和千人基因組工程)收集了CYP2C9*3、VKORC1-1639G>A和CYP4F2*3等位基因頻率的資料。國(guó)際HapMap工程包括12個(gè)人群:歐裔美國(guó)人(CEU)、北京漢族中國(guó)人(CHB)、無(wú)血緣關(guān)系漢族中國(guó)人(HCB)、美國(guó)華裔(CHD)、日本人(JPT)、非裔美國(guó)人(ASW)、印第安人(GIH)、肯尼亞非洲人(LWK)、墨西哥人(MEX)、肯尼亞馬賽人(MKK)、意大利人(TSI)、尼日利亞人(YRI)。千人基因組工程包括5個(gè)人群:非洲人(AFR)、美洲人(AMR)、東亞人(EAS)、歐洲人(EUR)和南亞人(SAS)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

基因型的Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)采用HAP-LOVIEW 4.1(http://broad.mit.edu/mpg/haploview)軟件,利用Fisher精確檢驗(yàn)比較不同人群的基因型和等位基因頻率。利用R相關(guān)軟件包進(jìn)行主成分分析(PCA)以分析人群之間的關(guān)系。相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析在R中進(jìn)行。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖4 CYP4F2第11外顯子堿基17981-18001共21個(gè)堿基的測(cè)序峰圖Figure 4 Sequencing graph of nucleotides 17981 to 18001 in exon 11 of CYP4F2

2 結(jié)果

本研究漢族和回族中國(guó)人群CYP2C9*3、VKORC1-1639G>A和CYP4F2*3的基因型頻率符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05,見(jiàn)表2),說(shuō)明其為遺傳平衡群體。漢族和回族中國(guó)人群CYP2C9*3、VKORC1-1639G>A和CYP4F2*3的基因型及等位基因頻率與已報(bào)道非裔美國(guó)人和高加索人的比較[16]見(jiàn)表2。

2.1 漢族和回族CYP2C9*3頻率及與已報(bào)道世界其他人群的比較

CYP2C9*3突變純合子和變異等位基因頻率在漢族(0.6%和3.7%)、回族(0.9%和5.5%)和整體中國(guó)人(合并本研究漢族和回族所得,0.7%和4.4%)無(wú)顯著差異(P>0.05)。但是回族CYP2C9*3/*3基因型頻率顯著高于非裔美國(guó)人(0,P<0.05),并且回族和整體中國(guó)人CYP2C9*3等位基因頻率皆顯著高于非裔美國(guó)人(2.0%,P<0.05)。這些結(jié)果說(shuō)明對(duì)于中國(guó)人檢測(cè)CYP2C9*3的基因與漢族比較,*P<0.05;與回族比較,#P<0.05;與整體中國(guó)人比較,&P<0.05;整體中國(guó)人為合并本研究漢族和回族所得;HWE:Hardy-Weinberg平衡型更重要,而其他變異體如CYP2C9*2在高加索人頻率較高而在東亞人中比較罕見(jiàn)。在世界各個(gè)人群中[16-25],羅姆人(吉普賽人)CYP2C9*3的等位基因頻率最高(15.5%),而美洲土著和尼日利亞人最低(皆為0)。整體來(lái)看,CYP2C9*3等位基因頻率在人群的分布如下:高加索人(5.7%)>中國(guó)人(4.4%)>非裔美國(guó)人(2.0%)(見(jiàn)表3)。

表2本研究基因多態(tài)性頻率及其與已報(bào)道非裔美國(guó)人和高加索人的比較%(例)

Table2ComparisonofgeneticpolymorphismsbetweenthepresentstudyandthosereportedpreviouslyinAfrican-AmericanandCaucasian%(cases)

多態(tài)性位點(diǎn) 基因型頻率野生型純合子雜合子突變型純合子HWE檢驗(yàn)P值等位基因頻率野生型突變型CYP2C9?3?1/?1?1/?3?3/?3?1?3 漢族 93 1(163) 6 3(11)0 6(1)0 10996 3(337)3 7(13) 回族90 0(99) 9 1(10)0 9(1)0 21494 5(208)5 5(12) 整體中國(guó)人 91 9(262) 7 4(21)0 7(2)0 04095 6(545)4 4(25) 非裔美國(guó)人[16] 96 0(288)# 4 0(12)# 0 0(0)#0 724 98 0(588)#，& 2 0(12)#，& 高加索人[16]88 7(94)11 3(12)0 0(0)0 53794 3(200)5 7(12)VKORC1?1639G>AGGGAAAGA 漢族0 0(0)19 4(34) 80 6(141)0 5729 7(34)90 3(316) 回族2 7(3)20 0(22)77 3(85)0 29612 7(28) 87 3(192) 整體中國(guó)人1 1(3)19 6(56) 79 3(226)0 82010 9(62) 89 1(508) 非裔美國(guó)人[16] 80 3(241)?#& 17 7(53)?#& 2 0(6)?#&0 138 89 2(535)?#& 10 8(65)?#& 高加索人[16] 36 8(39)?#& 45 3(48)?#& 17 9(19)?#&0 531 59 4(126)?#& 40 6(86)?#&CYP4F2?3?1/?1?1/?3?3/?3?1?3 漢族52 6(92)42 3(74)5 1(9)0 22873 7(258)26 3(92) 回族57 3(63)40 9(45)1 8(2)0 05777 7(171)22 3(49) 整體中國(guó)人 54 4(155) 41 7(119) 3 9(11)0 04075 3(429)24 7(141) 非裔美國(guó)人[16] 78 0(234)?#& 20 7(62)?#& 1 3(4)?#&0 963 88 3(530)?#& 11 7(70)?#& 高加索人[16] 42 7(128)?#& 46 3(139)?#& 11 0(33)?#&0 604 65 8(395)?#& 34 2(205)?#&

2.2 漢族和回族VKORC1-1639G>A頻率及與已報(bào)道世界其他人群的比較

VKORC1-1639G>A突變純合子和變異等位基因頻率在漢族(80.6%和90.3%)、回族(77.3%和87.3%)和整體中國(guó)人(79.3%和89.1%)之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。但是非裔美國(guó)人(2.0%和10.8%)和高加索人(17.9%和40.6%)VKORC1-1639G>A突變純合子和變異等位基因頻率皆顯著低于漢族、回族和整體中國(guó)人(P<0.05)。在世界各個(gè)人群中[16,18-26],CHB的VKORC1-1639A等位基因頻率最高(95.1%),而YRI最低(2.2%)。整體來(lái)看,VKORC1-1639A等位基因頻率在人群的分布如下:中國(guó)人(89.1%)>高加索人(40.6%)>非裔美國(guó)人(10.8%)(見(jiàn)表4)。

2.3 漢族和回族CYP4F2*3頻率及與已報(bào)道世界其他人群的比較

CYP4F2*3突變純合子頻率在漢族(5.1%)和回族(1.8%)之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。CYP4F2*3等位基因頻率在漢族(26.3%)和回族(22.3%)之間亦無(wú)顯著差異(P>0.05)。但是漢族、回族和整體中國(guó)人CYP4F2*3突變純合子和變異等位基因頻率顯著高于非裔美國(guó)人(1.3%和11.7%,P<0.05),但是顯著低于高加索人(11.0%和34.2%,P<0.05)。河南省目前進(jìn)行華法林基因檢測(cè)的醫(yī)院主要檢測(cè)CYP2C9和VKORC1,本研究結(jié)果顯示漢族和回族具有較高的CYP4F2*3頻率,因此將CYP4F2*3納入華法林基因檢測(cè)也是必要的。在世界各個(gè)人群中[16,19-25,27],GIH的CYP4F2*3等位基因頻率最高(43.2%),而美洲土著人最低(4.4%)。整體來(lái)看,CYP4F2*3等位基因頻率在人群的分布如下:高加索人(34.2%)>中國(guó)人(24.7%)>非裔美國(guó)人(11.7%)(見(jiàn)表5)。

2.4 漢族和回族及與其他世界人群的遺傳關(guān)系

通過(guò)主成分分析考察了本研究漢族和回族及其與其他世界人群的遺傳關(guān)系。漢族和回族與東亞人(CHB、CHD、HCB、Bai Chinese、JPT、Tibetan Chinese、Indonesian、Asian、Korean)距離較近,而與其他人群距離較遠(yuǎn)(見(jiàn)圖5)。2個(gè)主成分共計(jì)達(dá)到CYP2C9*3、VKORC1-1639G>A和CYP4F2*3遺傳變異的93.2%。主成分分析中所用的等位基因頻率數(shù)據(jù)見(jiàn)表3-5。

表3世界人群中CYP2C9*3的等位基因頻率

Table3CYP2C9*3allelefrequenciesinworldwidepopulations

人群受試者數(shù)等位基因頻率(%) Roma[17]46515 5 SephardiJewish[18]8014 4 GIHa8813 1 Russian[19]9111 Indians[20]212811 SASb48910 9 Hungarian[17]5358 8 AshkenaziJewish[18]5108 1 AshkenaziJewish[16]5028 3 pooledAshkenaziJewish[16，18]10128 2 Poles[21]4797 8 EURb5037 3 Hispanic[16]1016 4 TSIa886 3 CEUa1135 8 Caucasian[16]1065 7 Brazilian[22]7805 6 MEXa505 AMRb3473 8 CHBa416 1 HuiChinesec1105 5 CHDa855 3 HCBa434 7 BaiChinese[23]1324 5 Korean[24]2504 Asian[16]1023 9 HanChinesec1753 7 EASb5043 4 TibetanChinese[23]1072 8 JPTa862 3 Indonesian[25]1031 9 NativeAmericans[22]1800 ASWa492 African?American[16]3002 Mozambican[22]2061 AFRb6610 2 YRIa600

a國(guó)際HapMap工程;b千人基因組工程;c本研究

表4世界人群中VKORC1-1639A的等位基因頻率

Table4VKORC1-1639Aallelefrequenciesinworldwidepopulations

人群受試者數(shù)等位基因頻率(%) SephardiJewish[18]8050 TSIa8847 7 AshkenaziJewish[18]26046 7 AshkenaziJewish[16]50246 7 pooledAshkenaziJewish[16，18]76246 7 MEXa5046 Hispanic[16]10143 6 AMRb34741 1 Caucasian[16]10640 6 CEUa11339 8 Hungarian[26]51039 EURb50338 8 Russian[19]9136 3 Brazilian[22]78034 7 Poles[21]47934 Roma[26]45129 7 GIHa8819 3 Indians[20]212816 SASb48914 5 CHBa4195 1 HCBa4394 2 CHDa8592 9 BaiChinese[23]13292 8 Korean[24]25091 8 HanChinesec17590 3 TibetanChinese[23]10790 2 JPTa8690 1 EASb50488 5 HuiChinesec11087 3 Indonesian[25]10382 Asian[16]10266 7 NativeAmericans[22]18058 6 MKKa14316 1 African?American[16]30010 8 ASWa4910 2 LWKa906 1 AFRb6615 5 Mozambican[22]2063 5 YRIa592 2

a國(guó)際HapMap工程;b千人基因組工程;c本研究

3 討論

華法林主要經(jīng)肝臟CYP2C9代謝,其編碼基因有60余變異等位基因位點(diǎn)。其中CYP2C9*3(c.1075A>C,rs1057910)是位于第7外顯子的一個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn),突變之后引起第359氨基酸殘基異亮氨酸變?yōu)榱涟彼?使得CYP2C9代謝華法林的酶活性下降。因此,此變異體攜帶者(CYP2C9*1/*3和CYP2C9*3/*3)血漿華法林濃度增加,變得對(duì)華法林敏感從而需要減少其維持劑量[11]。VKORC1通過(guò)將維生素K環(huán)氧化物(KO)還原為還原型維生素K(KH2)而參與體內(nèi)維生素K的循環(huán),華法林結(jié)構(gòu)與維生素K類似可競(jìng)爭(zhēng)性作用于VKORC1,后者因而是華法林的藥物作用靶點(diǎn)[13]。VKORC1基因啟動(dòng)子區(qū)一個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(VKORC1 g.-1639G>A,rs9923231)引起啟動(dòng)子活性下降,因此突變等位基因攜帶者(-1639GA和-1639AA)VKORC1活性下降,需減少華法林維持劑量[12]。本研究結(jié)果顯示CYP2C9*3等位基因頻率在中原地區(qū)漢族和回族之間無(wú)顯著差異,且與高加索人無(wú)顯著差異,但都顯著高于非裔美國(guó)人。而中原地區(qū)漢族和回族VKORC1-1639A等位基因頻率顯著高于高加索人和非裔美國(guó)人,這可以解釋臨床上觀察到的東亞人華法林劑量普遍高于西方人的現(xiàn)象。

表5世界人群中CYP4F2*3的等位基因頻率

Table5CYP4F2*3allelefrequenciesinworldwidepopulations

人群受試者數(shù)等位基因頻率(%) GIHa8843 2 SASb48941 3 Indians[20]212740 TSIa8834 7 Caucasian[16]30034 2 AshkenaziJewish[16]50032 8 Roma[27]48432 2 EURb50329 Poles[21]47928 2 Brazilian[22]78026 Russian[19]9124 8 AMRb34723 8 Hispanic[16]30023 3 CEUa11223 2 Hungarian[27]49322 8 MEXa4922 4 Korean[24]25041 6 Asian[16]30030 5 BaiChinese[23]13228 4 HanChinesec17526 3 HCBa4225 JPTa8523 5 TibetanChinese[23]10722 4 HuiChinesec11022 3 CHDa8521 8 EASb50421 4 Indonesian[25]10320 9 CHBa4120 7 NativeAmericans[22]1804 4 MKKa14320 6 African?American[16]30011 7 LWKa9010 6 ASWa499 2 Mozambican[22]2068 7 AFRb6618 3 YRIa1135 8

a國(guó)際HapMap工程;b千人基因組工程;c本研究

CYP4F2通過(guò)氧化維生素K側(cè)鏈而限制體內(nèi)可利用維生素K的量,其編碼基因一個(gè)變異體(CYP4F2*3,c.1297G>A,rs2108622)引起第433氨基酸殘基纈氨酸突變?yōu)榧琢虬彼?突變之后CYP4F2活性下降使得體內(nèi)可利用維生素K量增加,因此此變異體攜帶者(CYP4F2*1/*3和CYP4F2*3/*3)需增加華法林的維持劑量[15]。本研究結(jié)果顯示中原地區(qū)漢族和回族CYP4F2*3等位基因頻率介于高加索人和非裔美國(guó)人之間,考慮到CYP4F2*3與華法林劑量調(diào)整的相關(guān)性,應(yīng)將其納入華法林藥物基因檢測(cè)。

此外,將本研究結(jié)果與已報(bào)道世界其他人群進(jìn)行了比較,并在世界范圍內(nèi)利用主成分分析確定了中原地區(qū)漢族和回族之間及其與其他人群的遺傳距離。結(jié)果提示中原地區(qū)漢族和回族與東亞人群距離較近。有意思的是,我們的分析還可發(fā)現(xiàn)歐洲的羅姆人(吉普賽人)可能起源于南亞,因其與南亞人群距離較近,這些結(jié)果也與早期文獻(xiàn)報(bào)道一致[28,29]。本研究的分析也發(fā)現(xiàn)美洲土著人與其他人群距離較遠(yuǎn),這可能反應(yīng)了其與歐亞人群分離后的遺傳孤立現(xiàn)象[30,31]。

綜上所述,中原地區(qū)漢族和回族CYP2C9*3、VKORC1-1639G>A和CYP4F2*3遺傳多態(tài)性分布頻率相似但與高加索和非洲人群存在顯著差異。在中國(guó)人群香豆素類抗凝劑藥物基因檢測(cè)中應(yīng)該將CYP2C9*3、VKORC1-1639G>A和CYP4F2*3遺傳多態(tài)性都包含進(jìn)去以利于此類藥物劑量的調(diào)整,促進(jìn)中國(guó)人群抗凝藥物治療的個(gè)體化和精準(zhǔn)化。

利用34個(gè)人群的等位基因頻率進(jìn)行主成分分析,將前2個(gè)主成分即主成分1和主成分2作點(diǎn)圖,其中漢族和回族用紅色實(shí)心圓表示,而其他32個(gè)文獻(xiàn)已報(bào)道的人群用藍(lán)色實(shí)心圓表示圖5 通過(guò)主成分分析對(duì)漢族和回族及其與世界其他人群的遺傳關(guān)系的分析Figure 5 Genetic relationships between the Han and Hui Chinese populations and their genetic relations to 32 other world populations by principal component analysis

[1] Husted SE, Ziegler BK, Kher A. Long-term anticoagulant therapy in patients with coronary artery disease[J]. Eur Heart J, 2006, 27(8): 913-919.

[2] Ghozlan MF, Foad DA, Darwish YW,etal. Impact of CYP2C9 and VKORC1 genetic polymorphisms upon warfarin dose requirements in Egyptian patients with acute coronary syndrome[J]. Blood Coagul Fibrinolysis, 2015,26(5):499-504.

[3] de Oliveira Almeida VC, Ribeiro DD, Gomes KB,etal. Polymorphisms of CYP2C9, VKORC1, MDR1, APOE and UGT1A1 genes and the therapeutic warfarin dose in Brazilian patients with thrombosis: a prospective cohort study[J]. Mol Diagn Ther, 2014,18(6):675-683.

[4] Nahar R,Saxena R,Deb R,etal.CYP2C9,VKORC1,CYP4F2,ABCB1 and F5 variants: influence on quality of long-term anticoagulation[J]. Pharmacol Rep,2014,66(2):243-249.

[5] Perera MA, Cavallari LH, Limdi NA,etal. Genetic variants associated with warfarin dose in African-American individuals: a genome-wide association study[J]. Lancet, 2013,382(9894):790-796.

[6] Cha PC, Mushiroda T, Takahashi A,etal. Genome-wide association study identifies genetic determinants of warfarin responsiveness for Japanese[J]. Hum Mol Genet, 2010,19(23):4735-4744.

[7] Teichert M, Eijgelsheim M, Rivadeneira F,etal. A genome-wide association study of acenocoumarol maintenance dosage[J]. Hum Mol Genet, 2009,18(19):3758-3768.

[8] Takeuchi F, McGinnis R, Bourgeois S,etal. A genome-wide association study confirms VKORC1, CYP2C9, and CYP4F2 as principal genetic determinants of warfarin dose[J]. PLoS Genet, 2009,5(3):e1000433.

[9] Cooper GM, Johnson JA, Langaee TY,etal. A genome-wide scan for common genetic variants with a large influence on warfarin maintenance dose[J]. Blood, 2008,112(4):1022-1027.

[10] Guo H, Yan J, Jiao Z,etal. Genetic polymorphisms for 17 Y-chromosomal STRs haplotypes in Chinese Hui population[J]. Leg Med (Tokyo), 2008,10(3):163-169.

[11] Steward DJ, Haining RL, Henne KR,etal. Genetic association between sensitivity to warfarin and expression of CYP2C9*3[J]. Pharmacogenetics, 1997,7(5):361-367.

[12] Rieder MJ, Reiner AP, Gage BF,etal. Effect of VKORC1 haplotypes on transcriptional regulation and warfarin dose[J]. N Engl J Med, 2005,352(22):2285-2293.

[13] Tie JK, Stafford DW. Structural and functional insights into enzymes of the vitamin K cycle[J]. J Thromb Haemost, 2016,14(2):236-247.

[14] Spreafico M, Lodigiani C, van Leeuwen Y,etal. Effects of CYP2C9 and VKORC1 on INR variations and dose requirements during initial phase of anticoagulant therapy[J]. Pharmacogenomics, 2008,9(9):1237-1250.

[15] Alvarellos ML, Sangkuhl K, Daneshjou R,etal. PharmGKB summary: very important pharmacogene information for CYP4F2[J]. Pharmacogenet Genomics, 2015,25(1):41-47.

[16] Scott SA, Khasawneh R, Peter I,etal. Combined CYP2C9, VKORC1 and CYP4F2 frequencies among racial and ethnic groups[J]. Pharmacogenomics, 2010,11(6):781-791.

[17] Sipeky C, Lakner L, Szabo M,etal. Interethnic differences of CYP2C9 alleles in healthy Hungarian and Roma population samples: relationship to worldwide allelic frequencies[J]. Blood Cells Mol Dis, 2009,43(3):239-242.

[18] Scott SA, Edelmann L, Kornreich R,etal. Warfarin pharmacogenetics: CYP2C9 and VKORC1 genotypes predict different sensitivity and resistance frequencies in the Ashkenazi and Sephardi Jewish populations[J]. Am J Hum Genet, 2008,82(2):495-500.

[19] Ivashchenko D, Rusin I, Sychev D,etal. The frequency of CYP2C9, VKORC1, and CYP4F2 polymorphisms in Russian patients with high thrombotic risk[J]. Medicina (Kaunas), 2013,49(12):517-521.

[20] Giri AK, Khan NM, Grover S,etal. Genetic epidemiology of pharmacogenetic variations in CYP2C9, CYP4F2 and VKORC1 genes associated with warfarin dosage in the Indian population[J]. Pharmacogenomics, 2014,15(10):1337-1354.

[21] Wypasek E, Branicka A, Awsiuk M,etal. Genetic determinants of acenocoumarol and warfarin maintenance dose requirements in Slavic population: a potential role of CYP4F2 and GGCX polymorphisms[J]. Thromb Res, 2014,134(3):604-609.

[22] Vargens DD, Damasceno A, Petzl-Erler ML,etal. Combined CYP2C9, VKORC1 and CYP4F2 frequencies among Amerindians, Mozambicans and Brazilians[J]. Pharmacogenomics, 2011,12(6):769-772.

[23] Zeng WT, Zheng QS, Huang M,etal. Genetic polymorphisms of VKORC1, CYP2C9, CYP4F2 in Bai, Tibetan Chinese[J]. Pharmazie, 2012,67(1):69-73.

[24] Kim KA, Song WG, Lee HM,etal. Multiplex pyrosequencing method to determine CYP2C9*3, VKORC1*2, and CYP4F2*3 polymorphisms simultaneously: its application to a Korean population and comparisons with other ethnic groups[J]. Mol Biol Rep, 2014,41(11):7305-7312.

[25] Rusdiana T, Araki T, Nakamura T,etal. Responsiveness to low-dose warfarin associated with genetic variants of VKORC1, CYP2C9, CYP2C19, and CYP4F2 in an Indonesian population[J]. Eur J Clin Pharmacol, 2013,69(3):395-405.

[26] Sipeky C, Csongei V, Jaromi L,etal. Vitamin K epoxide reductase complex 1 (VKORC1) haplotypes in healthy Hungarian and Roma population samples[J]. Pharmacogenomics, 2009,10(6):1025-1032.

[27] Sipeky C, Weber A, Melegh BI,etal. Interethnic variability of CYP4F2 (V433M) in admixed population of Roma and Hungarians[J]. Environ Toxicol Pharmacol, 2015,40(1):280-283.

[28] Rai N, Chaubey G, Tamang R,etal. The phylogeography of Y-chromosome haplogroup h1a1a-m82 reveals the likely Indian origin of the European Romani populations[J]. PLoS One, 2012,7(11):e48477.

[29] Moorjani P, Patterson N, Loh PR,etal. Reconstructing Roma history from genome-wide data[J]. PLoS One, 2013,8(3):e58633.

[30] Rasmussen M, Sikora M, Albrechtsen A,etal. The ancestry and affiliations of Kennewick Man[J]. Nature, 2015,523(7561):455-458.

[31] Raghavan M, Steinrücken M, Harris K,etal. Genomic evidence for the Pleistocene and recent population history of Native Americans[J]. Science, 2015,349(6250):aab3884.

GeneticpolymorphismsofCYP2C9*3,VKORC1-1639G>AandCYP4F2*3amongHanandHuiChinesepopulationsofcentralChina

QI Guangzhao1,BO Hui2,WANG Weijie3*
(1DepartmentofPharmacy,FirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China;2SchoolofMedicine,HuangheScienceandTechnologyCollege;3DepartmentofHepatobiliaryandPancreaticSurgery,FirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity;*Correspondingauthor,E-mail:cyp450239@126.com)

ObjectiveTo investigate the genetic polymorphisms of CYP2C9*3, VKORC1-1639G>A and CYP4F2*3 among Han and Hui Chinese populations of central China.MethodsTwo hundred and eighty-five unrelated Chinese healthy subjects(175 Han and 110 Hui) were used for genotyping. Frequencies of CYP2C9*3 and VKORC1-1639G>A were determined by the polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP) method and frequencies of CYP4F2*3 were determined by PCR-Sanger’ sequencing. Allele frequencies of CYP2C9*3, VKORC1-1639G>A and CYP4F2*3 in Han and Hui Chinese populations were compared to those published previously in Caucasian and African.ResultsThe allele frequencies of CYP2C9*3 in Han and Hui Chinese were 3.7% and 5.5%, respectively. The allele frequency of CYP2C9*3 in Hui Chinese was significantly higher than that reported previously in African-American(2.0%,P<0.05). The frequencies of VKORC1-1639A in Han and Hui were 90.3% and 87.3%, respectively. The allele frequencies of VKORC1-1639A in both Han and Hui Chinese were significantly higher than those reported previously in African-American(10.8%,P<0.05) and Caucasian (40.6%,P<0.05). The allele frequencies of CYP4F2*3 in Han and Hui Chinese were 26.3% and 22.3% respectively. The allele frequencies of CYP4F2*3 in both Han and Hui Chinese were significantly higher than that reported previously in African-American (11.7%,P<0.05), but lower than that in Caucasian (34.2%,P<0.05).ConclusionThe frequencies of CYP2C9*3, VKORC1-1639G>A and CYP4F2*3 genetic polymorphisms between Han and Hui Chinese populations are similar but significantly different from those in Caucasian and African.

CYP2C9; CYP4F2; VKORC1; Hui nationality; Han nationality; genetic polymorphism

齊光照,男,1987-12生,博士,主管藥師,E-mail:guangzhao-qi@qq.com

2017-07-31

R181

A

1007-6611(2017)12-1265-08

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.12.014