周榮璟 丁金旺 趙海菲 徐益平 徐驍誠(chéng) 吳龍鳳 陳凱 羅定存

甲狀腺良惡性病變中HCK、HBME-1及TPO的表達(dá)及臨床價(jià)值

周榮璟 丁金旺 趙海菲 徐益平 徐驍誠(chéng) 吳龍鳳 陳凱 羅定存

目的 探討高分子量角蛋白（HCK）、人骨髓內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物（HBME-1）及甲狀腺過(guò)氧化物酶（TPO）3個(gè)蛋白標(biāo)記物在甲狀腺良惡性病變中的表達(dá)差異，評(píng)價(jià)其在觀察組甲狀腺乳頭狀癌（PTC）與對(duì)照組甲狀腺良性病變中的臨床診斷價(jià)值。方法 采用免疫組化方法檢測(cè)并比較268例PTC與134例甲狀腺良性病變組織中HCK、HBME-1及TPO的表達(dá)，分析3個(gè)蛋白標(biāo)記物與PTC臨床病理特征的相關(guān)性，并計(jì)算上述指標(biāo)對(duì)PTC的診斷效能。結(jié)果 觀察組中HCK、HBME-1的陽(yáng)性表達(dá)率分別為96.64%（259/268）、95.15%（255/268），TPO的陰性表達(dá)率為88.48%（237/268），與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。不同性別、年齡、病灶數(shù)目、腫瘤大小、被膜是否突破、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、TNM分期及復(fù)發(fā)危險(xiǎn)度PTC患者HCK、HBME-1、TPO表達(dá)的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。HCK、HBME-1及TPO 診斷PTC 的靈敏度分別為96.64%（259/268）、95.15%（255/268）、88.48%（237/268），特異度分別為 91.79%（123/134）、84.33%（113/134）、95.52%（128/134），準(zhǔn)確度分別為 95.02%（382/402）、91.54%（368/402）、90.79%（365/402）。結(jié)論 HCK、HBME-1及TPO在甲狀腺良惡性病變中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其對(duì)鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性質(zhì)具有重要的臨床價(jià)值。

甲狀腺腫瘤 高分子量角蛋白 人骨髓內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物 甲狀腺過(guò)氧化物酶

甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，其中甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是常見(jiàn)的組織學(xué)亞型，約占90%以上。尤其是直徑≤1.0cm的微小乳頭狀癌（papillary thyroid microcarcinoma，PTMC），近年來(lái)發(fā)病率增長(zhǎng)迅速[1]。PTC發(fā)病隱匿，病灶往往較小，部分PTC缺乏典型的鏡下特征，因此容易誤診和漏診[2]。隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用，若干有助于甲狀腺腫瘤臨床診斷的蛋白標(biāo)記物，如高分子量角蛋白（HCK）、人骨髓內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物（HBME-1）及甲狀腺過(guò)氧化物酶（TPO）等日益受到研究者的關(guān)注[2-4]。筆者觀察和分析PTC和良性甲狀腺病變組織中HCK、HBME-1及TPO的表達(dá)狀況，探討其在甲狀腺良惡性病變中的臨床診斷價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 對(duì)象 選擇2014年1月至2015年7月在杭州市腫瘤醫(yī)院外科接受手術(shù)治療的PTC患者268例作為觀察組，其中男68例，女200例，年齡15～75（46.18±11.30）歲；單發(fā)199例、多發(fā)69例，PTC病灶大小0.1～4.0cm，其中PTMC194例，伴有被膜突破并累及周?chē)M織或器官者31例，伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者116例。另取同期甲狀腺良性病變患者134例作為對(duì)照組，其中男25例、女 109 例，年齡 15～70（47.84±10.87）歲，其中結(jié)節(jié)性甲狀腺腫88例、甲狀腺腺瘤25例、橋本甲狀腺炎9例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫合并腺瘤樣結(jié)節(jié)10例，橋本甲狀腺炎合并腺瘤1例，亞急性甲狀腺炎1例。以上兩組患者均有完整的臨床資料，最終診斷均經(jīng)手術(shù)及病理證實(shí)，術(shù)前均未接受任何治療，且排除甲狀腺外其他臟器的惡性腫瘤病史。本研究獲得患者知情同意和醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。兩組患者性別、年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P＞0.05）。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 鼠抗 HCK、HBME-1、TPO及 En VisionTM試劑盒等均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 兩組患者的手術(shù)標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，常規(guī)行HE染色。免疫組織化學(xué)采用En VisionTM二步染色法，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，梯度乙醇脫水，中性樹(shù)膠封固。每批實(shí)驗(yàn)均設(shè)有陽(yáng)性和陰性對(duì)照，使用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。對(duì)可疑病例進(jìn)行反復(fù)檢測(cè)。本研究以免疫組化HCK和HBME-1陽(yáng)性、TPO陰性作為PTC的判斷依據(jù)，計(jì)算各評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)診斷PTC的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值和準(zhǔn)確度。

1.4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 所有免疫組化結(jié)果均經(jīng)2位主治以上醫(yī)師獨(dú)立閱片和診斷。本實(shí)驗(yàn)HCK、HBME-1及TPO均以甲狀腺腫瘤細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒分布為陽(yáng)性。HCK免疫組化染色主要分布于PTC的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜；HBME-1染色主要見(jiàn)于PTC的細(xì)胞膜，少數(shù)可伴有細(xì)胞質(zhì)著色；TPO染色定位在胞質(zhì)，PTC細(xì)胞為陰性，周?chē)＜谞钕偌?xì)胞呈陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組HCK、HBME-1及TPO表達(dá)的差異 見(jiàn)表1。

表1 兩組HCK、HBME-1及TPO表達(dá)的差異[例（%）]

由表1可見(jiàn)，兩組HCK、HBME-1及TPO陽(yáng)性或陰性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=316.778、262.226、263.365，均P＜0.01）。免疫組化HCK和HBME-1陽(yáng)性、TPO陰性的典型圖例見(jiàn)圖1－3。

圖1 PTC中HCK陽(yáng)性表達(dá)，定位于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)（Envision 法，×200）

圖2 PTC中HBME-1陽(yáng)性表達(dá)，定位于細(xì)胞膜及部分細(xì)胞質(zhì)（Envision 法，×200）

圖3 PTC中TPO表達(dá)陰性，腫瘤細(xì)胞幾乎不見(jiàn)著色，而癌旁正常的濾泡上皮細(xì)胞胞質(zhì)（右上角）則見(jiàn)大量的棕褐色顆粒分布（Envision法，×100）

2.2 HCK、HBME-1及TPO表達(dá)與PTC臨床病理因素 的相關(guān)性 見(jiàn)表2。

表2 HCK、HBME-1及TPO表達(dá)與PTC臨床病理因素的相關(guān)性[例（%）]

由表2可見(jiàn)，PTC患者不同性別、年齡、病灶數(shù)目、腫瘤大小、被膜是否突破、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、TNM分期及復(fù)發(fā)危險(xiǎn)度中的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

2.3 HCK、HBME-1及TPO在PTC與甲狀腺良性病變中的鑒別診斷效能 見(jiàn)表3。

表3 HCK、HBME-1及TPO在PTC與甲狀腺良性病變中的鑒別診斷效能（%）

由表3可見(jiàn)，3個(gè)指標(biāo)中HCK和HBME-1的診斷靈敏度均較高，TPO相對(duì)偏低。特異度上，TPO最高，HBME-1最低。HCK、HBME-1及TPO的準(zhǔn)確度均較理想。

3 討論

HCK的克隆號(hào)為34βE12，是前列腺基底細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，多與p63聯(lián)合顯示前列腺基底細(xì)胞以協(xié)助前列腺良性增生性疾病和前列腺癌的診斷，還可用鑒別乳腺導(dǎo)管及小葉上皮來(lái)源的腫瘤。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，PTC中HCK也呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，而甲狀腺良性病變大部分呈陰性表達(dá)或少數(shù)弱陽(yáng)性表達(dá)[3,5]。HBME-1是間皮瘤相關(guān)抗體，最初在惡性間皮瘤發(fā)現(xiàn)，近來(lái)逐漸被用于甲狀腺惡性病變的診斷，尤其是PTC，Ozolins等[6]發(fā)現(xiàn)96%的PTC表達(dá)HBME-1，但在良性甲狀腺組織無(wú)表達(dá)。Abd-El等[7]也進(jìn)一步證實(shí)HBME-1在PTC（包括經(jīng)典與濾泡亞型）中的表達(dá)顯著高于良性甲狀腺疾病。TPO是一種糖基化血紅蛋白，是合成甲狀腺素的關(guān)鍵酶，在正常甲狀腺和甲狀腺良性病變中均有表達(dá)，但在甲狀腺惡性腫瘤中表達(dá)低下或缺失。林茂華等[8]報(bào)道，PTC中TPO表達(dá)陽(yáng)性率僅為2.33%，而濾泡性腺瘤中的表達(dá)率高達(dá)90.00%，兩者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究顯示，PTC中HCK、HBME-1的陽(yáng)性表達(dá)率分別為96.64%、95.15%，TPO的陰性表達(dá)率為88.48%，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

在HCK、HBME-1及TPO與PTC臨床病理因素關(guān)系的研究中，Tan等[3]最早發(fā)現(xiàn)，HCK在PTC中的表達(dá)與其年齡、性別和病灶大小等因素?zé)o關(guān)，而Cui[2]和Liu[9]的研究結(jié)果均顯示，HBME-1在不同PTC患者的性別、年齡、腫瘤大小、被膜累及情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況中的表達(dá)無(wú)明顯差異。對(duì)于TPO，酈秀芳等[4]認(rèn)為其在PTC中的表達(dá)與患者的臨床病理因素均無(wú)關(guān)。本研究顯示，上述3項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)與PTC患者的不同性別、年齡、病灶數(shù)目、腫瘤大小、被膜是否突破、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、TNM分期及復(fù)發(fā)危險(xiǎn)度等因素之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，支持上述研究結(jié)論。這些研究充分說(shuō)明，HCK、HBME-1及TPO的表達(dá)僅與疾病性質(zhì)（即良惡性）相關(guān)，與PTC的不同臨床、病理特征均無(wú)明顯關(guān)系，因此筆者認(rèn)為這更有利于對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)性質(zhì)的鑒別診斷。

有文獻(xiàn)報(bào)道，HCK（34βE12）在鑒別甲狀腺良惡性結(jié)節(jié)中的診斷靈敏度為94.90%，特異度為88.90%[2]。而1項(xiàng)包含PTMC的研究中，HBME-1對(duì)診斷PTC的靈敏度為86%，特異度為100%，如聯(lián)合其他指標(biāo)則診斷準(zhǔn)確率更高[10]。另有研究表明，TPO也具有較高的臨床診斷價(jià)值，其陰性表達(dá)對(duì)PTC的診斷靈敏度為88.00%，特異度為86.20%[11]。本研究觀察的結(jié)果是HCK、HBME-1及TPO診斷PTC的靈敏度、特異度均較高，其診斷的準(zhǔn)確率均超過(guò)90%，分別為95.02%、91.54%、90.79%；此外還發(fā)現(xiàn)194例PTMC中，HCK、HBME-1及TPO的診斷靈敏度也分別高達(dá)95.36%、94.32%、89.17%，接近于全組PTC及直徑＞1cm的PTC診斷水平，這充分說(shuō)明3個(gè)蛋白指標(biāo)是甲狀腺良惡性病變性質(zhì)判斷的理想標(biāo)記物，具有重要的臨床診斷價(jià)值。

綜上所述，HCK、HBME-1及TPO在甲狀腺良惡性病變中存在差異性表達(dá)，其表達(dá)與PTC的各種臨床病理因素?zé)o關(guān)，在鑒別PTC與甲狀腺良性病變性質(zhì)方面具有較高的輔助診斷價(jià)值，值得臨床推廣應(yīng)用。

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Expression of HCK,HBME-1 and TPO in thyroid neoplasm and their clinical significance

ZHOU Rongjing,DING Jinwang,ZHAO Haifei,et al.Department of Pathology,Hangzhou Cancer Hospital,Hangzhou 310002,China

Objective To investigate the expressions of high molecular weight cytokeratin(HCK),human bone marrow endothelial cell-1(HBME-1)and thyroid peroxidase(TPO)in thyroid neoplasm,and their clinical significance. Methods En VisionTMimmunohistochemical technique was performed to detect the expression of HCK,HBME-1 and TPO in 268 samples of papillary thyroid carcinoma(PTC)and 134 samples benign thyroid nodules.The correlation between expressions of the three markers and clinicpathological characteristics was evaluated. Results The positive rate of HCK,HBME-1 and TPO in PTC was significantly higher than those in benign nodules(all P＜0.01).There was no association between the expression ofthe three protein markers and clinicpathological characteristics of patients,including sex,age,numbers of lesions,tumor size,capsular invasion,lymph node metastasis,TNM staging and recurrence relative risk.The sensitivity of HCK,HBME-1 and TPO for diagnosis of PTC was 96.64%,95.15%and 88.48%,and the specificity was 91.79%,84.33%and 95.52%with a diagnostic accuracy rate of 95.02%,91.54%and 90.79%,respectively. Conclusion The expressions of HCK,HBME-1 and TPO in PTC are higher than those in benign lesions,indicating that these protein markers may have diagnostic value for PTC.

Thyroid neoplasm High molecular weight cytokeratin(HCK) Human bone marrow endothelial cell-1(HBME-1) Thyroid peroxidase(TPO)

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.22.2016-1435

浙江省公益技術(shù)應(yīng)用研究項(xiàng)目（2017C33180）；杭州市重大科技創(chuàng)新專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目（20131813A08）；杭州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（20160533B05）

310002 杭州，杭州市腫瘤醫(yī)院病理科（周榮璟、趙海菲、徐益平），腫瘤外科（吳龍鳳）；杭州市第一人民醫(yī)院（南京醫(yī)科大學(xué)附屬杭州醫(yī)院）腫瘤外科（丁金旺、陳凱、羅定存）；江蘇省蘇州市吳江區(qū)第一人民醫(yī)院甲乳外科（徐驍誠(chéng)）

丁金旺，E-mail：zjlsdjw@163.com

2016-09-18）

楊麗）