樊丹君 王晏雯 陳進(jìn) 呂遠(yuǎn)棟 李晨怡 葉子青 陳童

杭州地區(qū)老年漢族人群CYP2C19基因多態(tài)性分析

樊丹君 王晏雯 陳進(jìn) 呂遠(yuǎn)棟 李晨怡 葉子青 陳童

目的 探討杭州地區(qū)老年漢族人群CYP2C19基因多態(tài)性分布，從而為臨床制定個體化用藥方案提供參考。方法選取杭州地區(qū)老年漢族人群764名，采用基因芯片技術(shù)檢測CYP2C19基因。結(jié)果 共檢測到6個基因型，CYP2C19*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3、*3/*3，基因頻數(shù)分別為 45.03%、33.51%、8.11%、8.77%、4.32%、0.26%。快代謝型（CYP2C19*1*1）占 45.03%，中間代謝型（CYP2C19*1*2、*1*3）占41.62%，慢代謝型（CYP2C19*2*2、*2*3、*3*3）占13.35%。該結(jié)果與國內(nèi)其他地區(qū)漢族人群差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），且不同性別的各代謝型基因型頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 杭州地區(qū)老年漢族人群CYP2C19基因分布與國內(nèi)其他地區(qū)漢族人群類似，性別與CYP2C19基因遺傳多態(tài)性無相關(guān)性。

CYP2C19 基因多態(tài)性 老年人

細(xì)胞色素p450（cytochrome p450）是一種以血紅素為輔基的b族細(xì)胞色素家族蛋白酶，因與一氧化碳的結(jié)合物在波長450nm處有一最大吸收峰而得名。在p450家族中，其中3種酶作用最強(qiáng)，分別是CYP1、CYP2、CYP3。CYP2亞家族CYP2C19亞型對藥物代謝起著關(guān)鍵性作用，其基因遺傳多態(tài)性導(dǎo)致不同地區(qū)、不同人種、不同個體之間編碼的CYP2C19酶代謝能力的差異。根據(jù)藥物代謝能力可分為快代謝型（CYP2C19*1*1）、中間代謝型（CYP2C19*1*2、*1*3）、慢代謝型（CYP2C19*2*2、*2*3、*3*3）。本文通過對杭州地區(qū)老年漢族人群CYP2C19基因型的檢測，了解該基因多態(tài)性分布情況，進(jìn)而判斷患者藥物代謝類型，從而為杭州地區(qū)老年漢族人群臨床制定個體化用藥方案提供參考，減少不良事件的發(fā)生。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2016年1月在本院行CYP2C19基因檢測且年齡＞65歲的漢族人群764名，其中男 542 名，女 222 名，年齡 65～102（83.75±5.12）歲。均為杭州當(dāng)?shù)鼐用?，無血緣關(guān)系。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器 采用上海百傲科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒 [包括樣本DNA的制備、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

（PCR）擴(kuò)增、雜交顯色]，儀器：Baio BR-526-24 全自動雜交儀、Baio生物芯片識讀儀、PCR擴(kuò)增儀C1000 ThermalCycler、EppendorfCentrifuge5418、Eppendorf Centrifuge 5415R。

1.2.2 樣本采集和DNA提取 采取研究對象外周靜脈血2ml，EDTA抗凝，按血液基因組DNA提取試劑盒使用說明書提取和純化DNA。

1.2.3 PCR擴(kuò)增 將CYP2C19擴(kuò)增液1、2分別分裝到無菌的 0.2ml薄壁管中，每管 19μl，分別加1μl反應(yīng)液A、5μl提取好的樣本DNA溶液，混勻瞬時離心，將各管放入PCR擴(kuò)增儀中，按下列條件擴(kuò)增：50℃、5min，94℃、5min，94℃、25s，48℃、40s，72℃、30s，35 個循環(huán)；72℃、5min。4℃保存。

1.2.4 雜交顯色 取出Baio雜交顯示試劑盒，將反應(yīng)試管條拿出（其中預(yù)雜交液、洗液1、洗液2、洗液3已經(jīng)預(yù)加在反應(yīng)試管條的各自試管杯中），反應(yīng)液B低速離心，吸取10μl加入雜交緩沖瓶混勻；吸取180μl雜交緩沖液，加入10μl PCR擴(kuò)增產(chǎn)物1和10μl擴(kuò)增產(chǎn)物2混勻，加入到反應(yīng)試管條的預(yù)雜交液試管中；取出抗體，按1:1管的比例，加抗體稀釋劑，振蕩混勻，制成抗體使用液，吸取200μl的抗體使用液到反應(yīng)試管條的抗體試管杯中，再加200μl顯色液到反應(yīng)試管條的顯色試管杯中。將反應(yīng)試管條放入雜交儀中，運(yùn)行雜交程序。反應(yīng)結(jié)束，取出基因芯片。將芯片放入生物芯片識讀儀，用Baio基因芯片圖像分析軟件V2.0進(jìn)行圖像掃描和數(shù)據(jù)分析，輸出檢測結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件。按Hardy-Weinberg平衡定律計算各等位基因頻率，并將所獲數(shù)據(jù)作擬優(yōu)合度的χ2檢驗，驗證數(shù)據(jù)的可靠性。計量資料以表示；計數(shù)資料以百分率表示，不同人群間的比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 杭州地區(qū)老年漢族人群CYP2C19基因型頻數(shù)分布 杭州地區(qū)漢族老年人群CYP2C19基因型頻率符合Hardy-Weinberg平衡（χ2=5.282，P ＞0.05），提示入選對象具有群體代表性。其中男性CYP2C19*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3、*3/*3 分 別 為 45.20% 、33.03% 、8.67%、8.12%、4.61%、0.37%，女性各基因型則為44.60%、34.68%、6.76%、10.36%、3.60%、0。不同性別基因型頻數(shù)雖有差別，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=2.947，P＞0.05）。詳見表1。

表1 杭州地區(qū)老年漢族人群CYP2C19基因型頻數(shù)分布[例（%）]

2.2 杭州地區(qū)老年漢族人群CYP2C19代謝型結(jié)果杭州地區(qū)老年漢族男性快代謝型、中間代謝型、慢代謝型分別為45.20%、41.70%、13.10%，女性則為44.60%、41.44%、13.96%。不同性別間基因代謝型的構(gòu)成比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.104，P＞0.05）。詳見表2。

表2 杭州地區(qū)老年漢族人群CYP2C19代謝型結(jié)果[例（%）]

2.3 不同地區(qū)漢族人群CYP2C19代謝型結(jié)果 杭州地區(qū)老年漢族人群CYP2C19代謝型構(gòu)成比與文獻(xiàn)報道的我國其他地區(qū)漢族人群類似[1-2]（χ2=2.437，P＞0.05）。詳見表3。

表3 不同地區(qū)漢族人群CYP2C19代謝型結(jié)果[例（%）]

3 討論

藥物基因組學(xué)是從基因水平研究基因序列的多態(tài)性與藥物效應(yīng)多樣性之間的關(guān)系，研究基因突變及其突變體對不同個體藥物作用效應(yīng)差異的影響，并以此指導(dǎo)藥物研發(fā)和合理用藥，而藥物基因組、蛋白組學(xué)的發(fā)展，有利于推動現(xiàn)代醫(yī)學(xué)從循證醫(yī)學(xué)時代進(jìn)入精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)時代[3]。

CYP2C19基因是近幾年研究比較熱門的藥物基因之一，定位于人類10號染色體q24，1-q24.3區(qū)，包含9個外顯子和5個內(nèi)含子，其編碼的490個氨基酸位于肝臟微粒體中。CYP2C19參與多種外源性物質(zhì)的代謝，如藥物、乙醇、環(huán)境污染物等，藥物譜大致可分為氯吡格雷、第一代質(zhì)子泵抑制劑、三環(huán)類抗抑郁藥、抗癲癇藥、伏立康唑等。CYP2C19基因突變多樣性決定表型多樣性。等位基因突變使酶活性降低，對藥物的代謝能力有所下降，從而影響治療效果。

目前已有不少文獻(xiàn)報道不同國家、不同種族、不同地區(qū)的CYP2C19基因多態(tài)性分布，但關(guān)于杭州地區(qū)老年漢族人群的研究不多。本研究中764名杭州地區(qū)老年漢族受試者，共檢測六個基因型CYP2C19*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3、*3/*3， 分 別 為 45.03% 、33.51% 、8.11%、8.77%、4.32%、0.26%，與周健等[2]報道的北京地區(qū)漢族人群一致。本研究中，男性CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因頻率為26.94%和7.01%，女性CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因頻率為29.50%和5.18%，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義；且無論是快代謝型、中間代謝型、慢代謝型，男性（45.20%、41.70%、13.10%）與女性（44.60%、41.44%、13.96%）的差異均不明顯，表明性別對杭州地區(qū)老年漢族人群CYP2C19遺傳多態(tài)性影響無差異，與胡祥鵬等[4]報道類似。本研究還提示，杭州老年漢族快代謝型45.03%略高于重慶（37.6%）和北京（42.40%），中間代謝型低于重慶（46.58%）和北京（45.23%）[1-2]，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，說明中國漢族人群CYP2C19基因多態(tài)性在各地區(qū)差異不明顯。

老年人是心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等疾病的高發(fā)人群。多項研究表明，CYP2C19基因多態(tài)性與冠心病常用藥物氯吡格雷的代謝密切相關(guān)，攜帶CYP2C19*2和（或）CYP2C19*3的人群肝臟代謝氯吡格雷的能力減弱，血中有效代謝產(chǎn)物的濃度較非攜帶者低1/3，因此臨床上發(fā)現(xiàn)攜帶CYP2C19*2和（或）CYP2C19*3的冠心病患者在接受氯吡格雷期間較快代謝型更易出現(xiàn)卒中、心肌梗死及死亡風(fēng)險[5-8]。2010年美國食品藥品管理局發(fā)出警告，要求對需氯吡格雷治療的患者進(jìn)行基因檢測，對于攜帶CYP2C19*2和（或）*3的患者，建議服用其它抗血小板藥物或加大氯吡格雷的劑量。張鵬博等[9]給予急性冠狀動脈綜合征PCI術(shù)后中間代謝型患者氯吡格雷治療，常規(guī)劑量組再發(fā)心絞痛及總的主要不良心血管事件發(fā)生率均高于對照組，而雙倍劑量組與對照組相仿，對于中間代謝型，加大氯吡格雷劑量其血小板抑制水平與快代謝型相當(dāng)，同時不增加出血風(fēng)險。CYP2C19基因多態(tài)性亦影響質(zhì)子泵抑制劑如奧美拉唑的代謝。奧美拉唑體內(nèi)依賴p450酶代謝，CYP2C19基因快代謝者血藥濃度較低，達(dá)不到預(yù)期效果，因此對于快代謝者可選用其它質(zhì)子泵抑制劑或加大奧美拉唑的劑量[10]。如果條件允許，臨床上可通過基因芯片檢測CYP2C19基因型，參考檢測結(jié)果進(jìn)行治療用藥的選擇和劑量的增減，有利于提高用藥的安全性與有效性，避免不良反應(yīng)，減少藥物治療的費(fèi)用和風(fēng)險，為實現(xiàn)個體化醫(yī)療提供技術(shù)支持。

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Analysis of CYP2C19 genetic polymorphisms in elderly Han population from Hangzhou region

FAN Danjun,WANG Yanwen,CHEN Jin,et al.Department of Medical Care for Cadres,Zhejiang Hospital,Hangzhou 310013,China

Objective To investigate the CYP2C19 polymorphisms in elderly Han population from Hangzhou region.Methods The CYP2C19 genotypes were detected by using gene chip in 764 elderly Han people from Hangzhou region. Results The frequencies of CYP2C19*1/*1,*1/*2,*1/*3,*2/*2,*2/*3 and*3/*3 were 45.03%,33.51%,8.11%,8.77%,4.32%and 0.26%,respectively.According to the metabolic phenotype,the frequencies of extensive metabolizer genotype (CYP2C19*1*1),intermediate metabolizer genotype (CYP2C19*1*2 and*1*3)and poor metabolizer genotype(CYP2C19*2*2,*2*3 and*3*3)were 45.03%,41.62%and 13.35%,respectively.The distribution of metabolic genotypes in Han Chinese revealed in this study were similar to those in other regions in China(P＞0.05).There was no significant difference in CYP2C19 gene polymorphisms between males and females(P＞0.05). Conclusion There was no significant difference in CYP2C19 genetic polymorphisms between Han Chinese population in Hangzhou and other regions,and also no difference between different genders.

CYP2C19 Genetic polymorphism Aged

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.22.2016-2047

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技項目（2012KYB002）

310013 杭州，浙江醫(yī)院干部保健科（樊丹君、陳進(jìn)、李晨怡、葉子青、陳童），神經(jīng)內(nèi)科（王晏雯），老年病研究所（呂遠(yuǎn)棟）

樊丹君，E-mail：fandj2008@163.com

2017-04-20）

馬雯娜）