胡超群，徐德平

（江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122）

百合助眠活性組分的篩選和分析

胡超群，徐德平*

（江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122）

對百合助眠的活性組分進行篩選并對有效成分進行分析。用直接睡眠實驗和延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗對百合助眠作用的有效成分進行研究；用大孔樹脂、MCI等方法分離具有助眠作用的有效成分；用核磁共振對有效成分進行結(jié)構(gòu)鑒定。百合的正丁醇提取物能顯著增加小鼠睡眠率、睡眠時間，促進小鼠更快進入睡眠。經(jīng)分離，得到的主要物質(zhì)結(jié)構(gòu)為（25R）-3β，17α-二羥基-5α-螺甾烷-6-酮-3-O-α-L-鼠李糖基-（1→2）-β-D-葡萄糖苷和（25R）-3β-羥基-5α-螺甾烷-6-酮-3-O-α-L-鼠李糖基-（1→2）-β-D-葡萄糖苷。百合的正丁醇提取物具有顯著助眠作用，其中具有助眠作用的主要物質(zhì)為甾體皂苷。

百合；助眠；有效成分

百合作為常用中草藥，最早收錄于《神農(nóng)本草經(jīng)》。在我國，百合的食用和藥用歷史非常悠久，早在唐朝就開始了百合的食用、藥用和種植。近年來，國內(nèi)有不少關(guān)于百合助眠作用的報道，特別是李衛(wèi)民等[1]、胡煥萍等[2]通過百合對戊巴比妥鈉小鼠睡眠時間影響的實驗，證明了百合具有較好的鎮(zhèn)靜、催眠作用，但這些報道普遍缺乏對百合有效成分具體結(jié)構(gòu)的研究。因此，作者擬對百合不同提取物的助眠作用進行研究，進一步明確百合助眠作用的有效成分，并對其進行結(jié)構(gòu)鑒定，研究百合助眠作用的構(gòu)效關(guān)系，為百合進一步開發(fā)提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 供試品

百合：宜興市售產(chǎn)品。

1.2 實驗試劑

戊巴比妥鈉：上海將來實業(yè)股份有限公司產(chǎn)品。

1.3 實驗儀器

核磁共振儀 （Brucker Avance 500）：德國Brucker公司產(chǎn)品。

1.4 實驗動物

清潔級昆明小鼠：18～22 g[3]，上海斯萊克實驗動物有限公司，動物許可證號：SCXK（滬）2012-0002。

2 實驗方法

2.1 制備提取物

2.1.1 百合提取物的制備 將8 kg新鮮百合搗碎，放入提取罐，按料液質(zhì)量體積比1 g∶5 mL加入體積分數(shù)70%的乙醇，于45℃下提取5～6 h，過濾取清液，殘渣按上述方法重復(fù)提取兩次。合并3次提取的清液濃縮至無乙醇，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取并濃縮，得到百合的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和萃取剩余相。用水提取剩余殘渣，50℃提取5～6 h，過濾取清液濃縮，得到百合的水提物，將上述不同提取物冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 酸棗仁提取物的制備 按照文獻[4]中所述方法制備酸棗仁提取物。

2.2 百合活性成分的粗分離

將實驗確定的百合具有助眠作用的活性成分提取物用AB-8型大孔樹脂柱進行分離，用體積分數(shù)為50%、70%和95%的乙醇洗脫，分別得到50%乙醇洗脫物（1）、70%乙醇洗脫物（2）和95%乙醇洗脫物（3）3個部分，濃縮并冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 百合活性成分的進一步分離

大孔樹脂粗分離后經(jīng)實驗確定具有活性成分的主要部分用 MCI柱（D 5 cm×100 cm）、ODS 柱（D 4 cm×100 cm）分離其中的單體物質(zhì)。

2.4 百合助眠作用實驗

2.4.1 直接睡眠實驗 取小鼠200只，體質(zhì)量18～22 g，隨機分成10組，每組20只，♀♂各半，分別灌胃給藥。灌胃劑量分別為：百合石油醚萃取物（A組）1 g/kg；百合乙酸乙酯萃取物（B組）1 g/kg；百合正丁醇萃取物（C組）1 g/kg；百合萃取剩余相（D組）1 g/kg；百合水提物（E組）1 g/kg；百合大孔樹脂體積分數(shù)50%乙醇洗脫物（C1組）1 g/kg；百合大孔樹脂體積分數(shù)70%乙醇洗脫物（C2組）1 g/kg；百合大孔樹脂體積分數(shù)95%乙醇洗脫物（C3組）1 g/kg；陽性對照組給酸棗仁提取物1 g/kg；空白對照組給等量生理鹽水。每天1次，連續(xù)給藥1周。1周后用監(jiān)控攝像觀察并記錄：灌胃30 min后各組小鼠的睡眠率[4]；灌胃結(jié)束后12 h內(nèi)各組小鼠的睡眠時間。

2.4.2 延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗 取小鼠200只，體質(zhì)量18～22 g，隨機分成10組，每組20只，♀♂各半，分別灌胃給藥，灌胃劑量、頻率和時間同直接睡眠實驗。最后一次灌胃結(jié)束30 min后，腹腔注射戊巴比妥鈉70 mg/kg，準確觀察并記錄給藥時間和小鼠翻正反射消失時間[2，9]。

2.4.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)用SPSS23.0軟件進行方差分析，測定其顯著差異性。

3 實驗結(jié)果

3.1 百合不同提取物助眠作用

百合不同提取物對小鼠睡眠率影響見表1，對小鼠睡眠時間和延長戊巴比妥鈉睡眠時間影響見表2。

由表1可得出：在百合不同提取物中，C組的小鼠睡眠率最高，達到了80%，最接近陽性對照組90%的睡眠率。表2結(jié)果表明：直接睡眠實驗中，與空白對照組比較，B、C、D和陽性對照組均具有極顯著性差異；與陽性對照組比較，C組無極顯著性差異；延長戊巴比妥鈉小鼠睡眠實驗中，與空白對照組比較，B、C、D和陽性對照組均具有極顯著性差異；與陽性對照組比較，只有C組無極顯著性差異。

綜合表1表2的結(jié)果可以得出：B、C和D組均具有一定助眠作用，但C組助眠效果遠好于B、D組，分析認為B、D組與C組的成分有交叉，因此百合具有助眠作用的有效成分主要在C組，即正丁醇提取物中。

表1 百合不同提取物對小鼠睡眠率的影響Table 1 Effect of different Lily extracts on the sleep rate of mice

表2 百合不同提取物對小鼠睡眠時間及延長戊巴比妥鈉睡眠時間的影響Table 2 Effect of different Lily extracts on sleep time and prolonged pentobarbital sleep time of mice

3.2 大孔樹脂不同分離部分的助眠作用

大孔樹脂的不同分離部分對小鼠睡眠率的影響見表3，對小鼠睡眠時間和延長戊巴比妥鈉睡眠時間的影響見表4。

表3 大孔樹脂不同分離部分對小鼠睡眠率的影響Table 3 Effect of different macroporous resin separation section on the sleep rate of mice

表4 大孔樹脂不同分離部分對小鼠睡眠時間及延長戊巴比妥鈉睡眠時間的影響Table 4 Effect of different macroporous resin separation section on sleep time and prolonged pentobarbital sleep time of mice

由表3可得出：百合的不同分離部分中，C2組的小鼠睡眠率最高，為95%。表4結(jié)果表明：直接睡眠時間實驗中，與空白對照組比較，C1、C2和陽性對照組有顯著差異；與陽性對照組比較，C2組無顯著差異。延長戊巴比妥鈉小鼠睡眠時間實驗中，與空白對照組比較，C1、C2、C3和陽性對照組均有顯著性差異；與陽性對照組比較，只有C2組無顯著性差異。

綜合表3表4結(jié)果可知：C2組助眠效果最好。因此百合具有助眠作用的主要活性成分在C2組即正丁醇提取物經(jīng)大孔樹脂用70%乙醇洗脫分離部分。

3.3 C2組功效成分的分析

從C2組分中分離得到A、B、C 3個單體成分。

3.3.1 A物質(zhì)分析 化合物A為白色無定形粉末，易溶于甲醇、乙醇等溶劑，體積分數(shù)10%濃硫酸乙醇溶液顯紫紅色，Liebermann-Burchard反應(yīng)則顯墨綠色，Molish反應(yīng)成陽性。表明該化合物為甾體皂苷類化合物，其13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）見表 5。

表5 化合物A、B的13C-NMR數(shù)據(jù)Table 5 13C-NMR date of compound A and B

結(jié)合其理化性質(zhì)和13C-NMR解析，并參照文獻[5，11]中的報道， 化合物 A 為：（25R）-3β，17α-二羥基-5α-螺甾烷-6-酮-3-O-α-L-鼠李糖基-（1→2）-β-D-葡萄糖苷，其結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物A、B的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structure of compound A and B

3.3.2 B物質(zhì)分析 化合物B為白色無定形粉末，易溶于甲醇、乙醇等溶劑，體積分數(shù)10%濃硫酸乙醇溶液顯紫紅色，Liebermann-Burchard反應(yīng)則顯墨綠色，Molish反應(yīng)成陽性，表明該化合物為甾體皂苷類化合物，其13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）見表 5。

結(jié)合其理化性質(zhì)和13C-NMR解析，參照文獻[5，11]中的報道，化合物 B 為：（25R）-3β-羥基-5α-螺甾烷-6-酮-3-O-α-L-鼠李糖基-（1→2）-β-D-葡萄糖苷，其結(jié)構(gòu)見圖1。

3.3.3 C物質(zhì)分析 化合物C為油狀液體，易溶于甲醇、乙醇等溶劑，不溶于水，通過分析其理化性質(zhì)和核磁共振碳譜，化合物C為：亞麻酸甘油二酯。

4 結(jié)語

百合既有食用價值又有藥用價值，在清心安神、改善睡眠方面有其獨到作用。我國作為百合屬植物的原產(chǎn)大國，擁有極其豐富的種質(zhì)資源，但對于百合的開發(fā)尚不完全，因此百合具有巨大的開發(fā)潛力。

研究結(jié)果表明，百合的正丁醇提取物具有較好的助眠作用，經(jīng)過進一步分離得到3個化合物，其中兩個為甾體皂苷，一個為甘油二酯，其中甘油二酯不具有活性。通過王旭峰等[6]、陳百泉等[7]、馬進杰等[8]的研究，表明酸棗仁中具有助眠作用的物質(zhì)為四環(huán)三萜類皂苷，通過Wang T等[10]的研究，表明百合中具有助眠作用的物質(zhì)也為皂苷，因此可以確定：百合中具有助眠作用的物質(zhì)為皂苷類化合物且這類皂苷為甾體皂苷。

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Screening and Analyzing of the Hypnotic Active Ingredients of Lilium lancifolium Thunb

HU Chaoqun，XU Deping*
（School of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi 214122，China）

To screen and analyze the hypnotic active ingredients of Lilium lancifolium Thunb.Methods：Direct sleep experiment and prolonged pentobarbital sleeping time experiment are used to study the hypnotic active ingredients of Lilium lancifolium Thunb.The hypnotic active ingredients are separated by separation column like macroporous resin column and MCI column.Magnetic resonance imaging（MRI） is used to identify the structure of active ingredients.The n-butanol extract of Lilium lancifolium Thunb can increase the rate and time of sleep，accelerate the sleep of mice.By separating，the main structure ofthe active ingredients are （25R）-3β，17α-dihydroxy-5αspirostan-6-one-3-O-α-L-Rhamnopyranosyl- （1→2）-β-D-glucopyranoside and（25R）-3β-hydroxy-5α-spirostan-6-one-3-O-zα-L-Rhamnopyranosyl- （1 →2）-β-D-glucopyranoside.The n-butanol extract of Lilium lancifolium Thunb has significant hypnotic effect and the structure of its main ingredients are saponins.

Lilium lancifolium Thunb，hypnotize，active ingredients

R 284.2

A

1673—1689（2017）10—1096—05

2015-09-30

*通信作者：徐德平（1965—），男，安徽宣城人，工學(xué)博士，副教授，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究。E-mail：xdp1219@sina.com

胡超群，徐德平.百合助眠活性組分的篩選和分析[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報，2017，36（10）：1096-1100.