彭 娜， 范紅娜

沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院 麻醉科，遼寧 沈陽(yáng) 110016

·論 著·

氟比洛芬酯預(yù)處理對(duì)腦缺血-再灌注損傷大鼠COX-2表達(dá)影響

彭 娜， 范紅娜

沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院 麻醉科，遼寧 沈陽(yáng) 110016

目的探討氟比洛芬酯(FA)預(yù)處理對(duì)局灶性腦缺血-再灌注(I-R)損傷大鼠的腦保護(hù)效應(yīng)及其對(duì)大腦皮質(zhì)中環(huán)氧合酶2(COX-2)表達(dá)的影響。方法將32只雄性SD大鼠隨機(jī)分為I-R組、預(yù)處理1 d組、預(yù)處理3 d組和預(yù)處理5 d組，每組各8只。進(jìn)行預(yù)處理的3組大鼠在腦缺血前分別經(jīng)尾靜脈給予FA 20 mg/kg于1、3、5 d預(yù)處理，建立大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型，觀察各組大鼠I-R損傷后24 h神經(jīng)缺陷評(píng)估(NDS)；2，3，5-氯化三苯四氮唑染色計(jì)算腦梗死容積百分率(BIVP)。將20只雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(CON組)、單純FA給藥組(FA20′組)、I-R組和FA 20 mg/kg 預(yù)處理組(FA20組)每組各5只。FA20′組為經(jīng)靜脈單次給予FA 20 mg/kg而不建立MCAO模型；FA20組為在腦缺血前6 h，經(jīng)靜脈給予FA 20 mg/kg，然后建立MCAO模型，I-R損傷后24 h制作冰凍切片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。結(jié)果與I-R組比較，預(yù)處理1 d組、預(yù)處理3 d組和預(yù)處理5 d組I-R損傷后24 h的NDS評(píng)分均有明顯改善(P<0.05)，BIVP明顯縮小(P<0.05)；FA重復(fù)3次預(yù)處理的腦保護(hù)效應(yīng)達(dá)峰值，優(yōu)于預(yù)處理1 d組(P<0.05)。I-R組COX-2陽(yáng)性細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度明顯高于CON組和FA20′組(P<0.05)；給予FA預(yù)處理后，F(xiàn)A20組的COX-2免疫反應(yīng)強(qiáng)度明顯減弱，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大幅減少，但與CON組、FA20′組相比較，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)仍然較高(P<0.05)。結(jié)論FA重復(fù)預(yù)處理的腦保護(hù)效應(yīng)要優(yōu)于FA單次預(yù)處理，且重復(fù)3 d預(yù)處理的腦保護(hù)效果達(dá)到峰值；FA預(yù)處理是通過(guò)抑制大腦皮質(zhì)中COX-2的過(guò)度表達(dá)，實(shí)現(xiàn)腦I-R損傷的保護(hù)作用。

氟比洛芬酯； 腦缺血-再灌注損傷； 環(huán)氧合酶2； 腦保護(hù)

隨著世界人口老齡化進(jìn)程的加快，因腦卒中、圍術(shù)期腦血管事件造成的嚴(yán)重神經(jīng)損傷已成為生命科學(xué)研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)之一。近年來(lái)，有研究發(fā)現(xiàn)，在局灶性腦缺血后較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)腦損傷仍呈進(jìn)行性發(fā)展，其根源是由于腦缺血后發(fā)生了中樞炎癥反應(yīng)[1]。如何抑制腦缺血后中樞炎癥反應(yīng)，減輕腦缺血性損傷已成為目前腦部保護(hù)的新研究靶點(diǎn)。其中，與炎癥相關(guān)的酶類(lèi)如環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase，COX-2)在腦缺血性損傷中的作用倍受關(guān)注。氟比洛芬酯(flurbiprofen axetil,FA)為非選擇性COX抑制劑代表藥物之一，其具有明顯抑制局部炎癥反應(yīng)、降低炎性損傷的作用[2]。有研究已證實(shí)，F(xiàn)A單次預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血-再灌注(ischemia-reperfusion，I-R)損傷具有明顯腦保護(hù)作用[3-4]，且時(shí)間窗長(zhǎng)達(dá)48 h[5]。為證實(shí)FA重復(fù)預(yù)處理是否具有加強(qiáng)FA的腦保護(hù)作用，本研究比較觀察FA重復(fù)預(yù)處理與單次預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦I-R損傷的保護(hù)作用，旨在分析其可能的作用機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 清潔級(jí)雄性SD大鼠52只，9～10周齡，體質(zhì)量280～320 g。尼龍線3-0(日本Ethicon公司)；肛溫探頭連接多功能監(jiān)測(cè)儀(美國(guó)Spacelab)；數(shù)碼相機(jī)DC240(美國(guó)KODAK公司)。

1.2 研究方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 本研究包括兩部分：(1)FA重復(fù)預(yù)處理和單次預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦I-R損傷保護(hù)作用的比較；(2)FA的預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦I-R損傷保護(hù)作用的機(jī)制研究。FA重復(fù)和單次預(yù)處理對(duì)腦I-R損傷保護(hù)作用比較：清潔級(jí)雄性SD大鼠32只，隨機(jī)分為I-R組、預(yù)處理1 d組、預(yù)處理3 d組和預(yù)處理5 d組，每組各8只。I-R組不予任何處理，直接建立中動(dòng)脈阻塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型；進(jìn)行預(yù)處理的3組分別經(jīng)大鼠尾靜脈給予20 mg/kg的FA進(jìn)行1 d單次預(yù)處理和3、5 d重復(fù)預(yù)處理后，再建立MCAO模型；I-R后24 h，對(duì)各組進(jìn)行神經(jīng)缺陷評(píng)估(neurologic deficit score，NDS)，測(cè)量腦梗死容積百分率(brain infarction volume percentage,BIVP)。見(jiàn)圖1。FA的預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦I-R損傷后皮質(zhì)COX-2表達(dá)的影響：清潔級(jí)雄性SD大鼠20只，隨機(jī)分為對(duì)照組(CON組)、單純FA 20 mg/kg給藥組(FA20′組)、I-R組和FA 20 mg/kg 預(yù)處理組(FA20組)。FA20組經(jīng)大鼠尾靜脈單次給予FA 20 mg/kg，6 h后建立MCAO模型，24 h后行低溫腦組織切片、免疫組化染色；FA20′組僅經(jīng)大鼠尾靜脈單次給予FA 20 mg/kg，而不建立MCAO模型；I-R組不進(jìn)行任何處理，直接建立MCAO模型；CON組不給予任何處理，也不建立MCAO模型，進(jìn)行預(yù)處理的3組在與FA20組建立MCAO模型24 h相同時(shí)間點(diǎn)，行低溫腦組織切片、免疫組化染色。見(jiàn)圖2。

1.2.2 大鼠局灶性腦缺血模型的建立 局灶性腦I-R損傷模型選擇SD大鼠大腦MCAO模型。大鼠術(shù)前禁食12 h，自由飲水。采用20 g/L戊巴比妥鈉50 mg/kg誘導(dǎo)麻醉(腹腔注射)，保留自主呼吸，面罩吸氧。術(shù)中體溫由肛溫探頭連接多功能監(jiān)測(cè)儀監(jiān)測(cè)，并用烤燈維持溫度(37.0℃～37.5℃)。大鼠MCAO模型根據(jù)Xiong等[6]的研究方法造模，即在大鼠麻醉后取其頸正中切口，顯露右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈及頸內(nèi)動(dòng)脈，結(jié)扎頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈，在頸總動(dòng)脈分叉下方剪一切口，將一末端用酒精燈燒成圓頭的3-0尼龍線，置入頸內(nèi)動(dòng)脈17～18 mm，阻閉大腦中動(dòng)脈，結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈。待達(dá)到預(yù)定缺血時(shí)間后，用4%異氟醚快速麻醉大鼠，抽出尼龍線，恢復(fù)腦內(nèi)血運(yùn)，行再灌注損傷。

圖1 FA重復(fù)預(yù)處理和單次預(yù)處理對(duì)大鼠腦I-R損傷保護(hù)作用研究的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

圖2 FA的預(yù)處理對(duì)大鼠腦I-R損傷后皮質(zhì)中COX-2影響研究的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

1.2.3 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)估 采用Longa氏[7]、Garcia氏[8]兩種評(píng)分方法對(duì)SD大鼠MCAO模型I-R損傷后進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)估。Longa氏評(píng)分法：拔出尼龍線恢復(fù)再灌注前，根據(jù)Longa的6級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，0級(jí)，無(wú)功能障礙；1級(jí)，不能伸展左側(cè)前肢；2級(jí)，向左側(cè)旋轉(zhuǎn)；3級(jí)，向左側(cè)傾倒；4級(jí)，無(wú)自主活動(dòng)伴意識(shí)抑制；5級(jí)，死亡。初步評(píng)定MCAO模型成功與否，將評(píng)分在1～3級(jí)的動(dòng)物納入下一步研究，排除其余動(dòng)物。Garcia氏評(píng)分法：大鼠麻醉蘇醒后，將其放回鼠籠，自由飲食。由一位不了解分組情況的觀察者觀察大鼠的自主運(yùn)動(dòng)、四肢活動(dòng)的對(duì)稱(chēng)性、前肢的對(duì)稱(chēng)性、金屬絲鼠籠中的攀援情況、觸摸雙側(cè)軀干反應(yīng)及觸須反應(yīng)，根據(jù)Garcia評(píng)分法評(píng)估NDS，并記錄，此評(píng)分法最低為3分，最高為18分，3～7分為重度神經(jīng)功能障礙，8～11分為中度神經(jīng)功能障礙，12～18分為輕度神經(jīng)功能障礙，得分越高表明動(dòng)物的神經(jīng)行為學(xué)狀況越好。

1.2.4 BIVP的測(cè)量 對(duì)大鼠MCAO模型I-R損傷24 h進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分后，斷頭處死動(dòng)物，迅速取出鼠腦，置于冰鹽水中10 min，取冠狀面均勻切成2 mm厚腦片，迅速放入10 g/L的2,3,5-氯化三苯四氮唑(triphenyl tetrazolium chloride，TTC)溶液中37℃染色30 min，然后用40 g/L甲醛緩沖液固定。24 h后用數(shù)碼相機(jī)DC240拍照，輸入計(jì)算機(jī)，用圖像處理軟件(ADOBE，PHOTOSHOP 7.0)計(jì)算梗死面積(粉紅色區(qū)為正常腦組織，白色區(qū)為梗死區(qū))。為校正腦水腫帶造成梗死容積的偏差，用占對(duì)側(cè)正常容積的百分率表示梗死容積。

BIVP=(對(duì)側(cè)正常組織容積-同側(cè)正常組織容積)/對(duì)側(cè)正常組織容積×100%。

1.2.5 組織灌注切片 采用60 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射，使SD大鼠深度麻醉，經(jīng)心臟灌流，用80 ml生理鹽水快速?zèng)_洗血液，然后用預(yù)冷的40 g/L多聚甲醛400 ml灌流。灌流完畢取腦，4℃固定6 h，換成200 g/L蔗糖，4℃過(guò)夜。組織沉底后取Bregma點(diǎn)1.80～4.20 mm的組織塊(長(zhǎng)6.00 mm)，用冰凍切片機(jī)CM1900進(jìn)行冠狀切片，腦片厚14 μm，-20℃保存，備用。

1.2.6 免疫組織化學(xué)染色 從-20℃冰箱中取出切片，室溫晾置2 h后，PBS 0.01 mol/L 漂洗3次，每次5 min。浸入甲醇800 ml/L和雙氧水封3 ml/L閉30 min，0.01 mol/L PBS漂洗3次，每次5 min，再用牛血清白蛋白10 g/L、正常羊血清30 ml/L和Triton X-100 3 ml/L封閉1 h，PBS 0.01 mol/L漂洗3次，每次5 min。兔抗大鼠COX-2抗體(1∶100)孵育切片，室溫下孵育24 h，PBS 0.01 mol/L漂洗3次，每次5 min；生物素化的羊抗兔IgG(1∶400)孵育切片，室溫下孵育4 h，PBS 0.01 mol/L漂洗3次，每次5 min；生物素-卵白素-辣根過(guò)氧化物酶(ABC)復(fù)合物(1∶400)孵育切片，室溫下孵育2 h，PBS 0.01 mol/L漂洗3次，每次5 min；DAB反應(yīng)顯色。顯色反應(yīng)終止，經(jīng)脫水透明、封片后，光鏡觀察，Olympus BX-51顯微鏡攝片。部分切片作為免疫組織化學(xué)方法的對(duì)照，一抗用牛血清白蛋白稀釋液替代，二抗、ABC復(fù)合物同其他免疫組織化學(xué)反應(yīng)切片，結(jié)果未見(jiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。

1.2.7 陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù) 每只動(dòng)物取5張相鄰切片，用Image pro plus 6圖像分析軟件計(jì)數(shù)皮質(zhì)中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，取5張切片細(xì)胞計(jì)數(shù)的相加作為該動(dòng)物皮質(zhì)內(nèi)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，并將每組5只動(dòng)物的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)取平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 FA重復(fù)和單次預(yù)處理對(duì)腦I-R損傷保護(hù)作用的比較 MCAO模型建立后24 h，各組NDS結(jié)果顯示：預(yù)處理1 d組、預(yù)處理3 d組和預(yù)處理5 d組再灌注后24 h的NDS分別為9.0、10.0和9.5，與I-R組7.0相比較均有明顯改善(P<0.05)，且以預(yù)處理3 d組NDS評(píng)分值最高，但預(yù)處理1 d組、預(yù)處理3 d組和預(yù)處理5 d組3組之間NDS評(píng)分比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

I-R損傷后24 h，預(yù)處理1 d組、預(yù)處理3 d組和預(yù)處理5 d組的BIVP分別為(24.70%±3.90%)、(14.82%±4.45%)和(15.11%±4.16%)，均較I/R組(46.55%±3.27%)明顯縮小(P<0.05)；當(dāng)FA重復(fù)3次預(yù)處理時(shí)，F(xiàn)A的預(yù)處理對(duì)腦的保護(hù)效應(yīng)達(dá)峰值，優(yōu)于預(yù)處理1 d組的保護(hù)效應(yīng)(P<0.05)，但與預(yù)處理5 d組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，圖3)。

2.2 FA的預(yù)處理對(duì)腦I-R損傷后皮質(zhì)中COX-2表達(dá)的影響 CON組與FA20′組COX-2陽(yáng)性細(xì)胞在皮質(zhì)中均有弱表達(dá)，染色淺淡，但兩組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；I-R組在I-R后24 h，梗塞區(qū)周邊皮質(zhì)中COX-2陽(yáng)性細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)烈、染色加深，且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯高于CON組和FA20′組，與CON組和FA20′組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。然而，經(jīng)FA 20 mg/kg的預(yù)處理后，F(xiàn)A20組I-R 24 h梗塞區(qū)周邊皮質(zhì)COX-2陽(yáng)性細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度明顯減弱，顏色變淺，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少，與CON組、FA20′組相比較，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)仍然較高(P<0.05)。見(jiàn)圖4～5。

圖3 大鼠I-R前不同時(shí)間點(diǎn)FA的預(yù)處理對(duì)BIVP的比較(與I-R組比較，①P<0.05；與預(yù)處理1 d組比較，②P<0.05)

3 討論

本研究以SD大鼠的MCAO模型為研究平臺(tái)，觀察發(fā)現(xiàn)預(yù)處理1 d組、預(yù)處理3 d組和預(yù)處理5 d組再灌注24 h后NDS和BIVP均較I-R組有明顯改善，且預(yù)處理3 d組、預(yù)處理5 d組的神經(jīng)保護(hù)效果優(yōu)于預(yù)處理1 d組，但預(yù)處理3 d組和預(yù)處理5 d組之間無(wú)明顯差異。這表明，F(xiàn)A重復(fù)預(yù)處理具有良好的腦保護(hù)效應(yīng)，其保護(hù)效果要優(yōu)于FA單次預(yù)處理；FA的預(yù)處理在重復(fù)3 d時(shí)，腦保護(hù)效應(yīng)達(dá)達(dá)峰值。這一結(jié)論與Zhang等[9]的報(bào)道一致，即COX-2抑制劑(塞來(lái)考昔)重復(fù)預(yù)處理可對(duì)毛果云香堿所誘導(dǎo)的腦損傷產(chǎn)生優(yōu)于單次預(yù)處理的腦保護(hù)作用致。雖然，預(yù)處理1 d組與預(yù)處理3 d組、預(yù)處理5 d組的BIVP存在顯著差異，但神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分各組組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這再次表明，大鼠腦缺血后神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分并不與其缺血后組織壞死相一致，因?yàn)樯窠?jīng)功能的損傷程度并不能精確地反映出腦損傷的程度，如在中顳葉很小范圍的損傷可能導(dǎo)致很?chē)?yán)重的神經(jīng)功能缺陷，而其他區(qū)域較大的損傷卻僅造成輕微的神經(jīng)功能缺陷[1]。

圖4 各組大鼠腦皮質(zhì)中COX-2的表達(dá)情況比較(a.CON組；b.FA20′組；c.I-R組；d.FA20組)

圖5 各組皮質(zhì)中COX-2的表達(dá)情況比較(與CON組和FA20′組比較，①P<0.05；②P<0.05)

FA的預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦I-R損傷保護(hù)的作用機(jī)制中，觀察皮質(zhì)中COX-2的表達(dá)情況，在CON組和FA20′組的大鼠皮質(zhì)中有少量COX-2表達(dá)，兩組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但在腦I-R損傷后，I-R組梗死灶周?chē)べ|(zhì)中，COX-2陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯高于CON組和FA20′組(P<0.01)；與I-R組相比較，F(xiàn)A20組COX-2的表達(dá)強(qiáng)度明顯減弱，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少(P<0.05)，但與CON組、FA20′組相比較，COX-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)仍然較多。這說(shuō)明FA的預(yù)處理是通過(guò)抑制局灶性腦I-R損傷后COX-2的過(guò)度表達(dá)，減少COX-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，降低中樞炎性反應(yīng)規(guī)模來(lái)實(shí)現(xiàn)腦保護(hù)。

目前，有關(guān)FA的預(yù)處理在腦I-R損傷中保護(hù)作用具體的啟動(dòng)機(jī)制尚不明確，因?yàn)镃OX-2酶系病理性誘導(dǎo)酶，主要在損傷后炎癥部位的病理?xiàng)l件下誘導(dǎo)產(chǎn)生[10-12]，其通過(guò)促進(jìn)花生四烯酸合成前列腺素(PGs)，在炎癥、疼痛、發(fā)熱中發(fā)揮作用，COX-2主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腎等組織中持續(xù)表達(dá)[13-14]。雖然，F(xiàn)A為非選擇性COX抑制劑的代表藥物之一，早已證實(shí)了其可通過(guò)抑制COX-2酶功效，抑制PGs生成，從而發(fā)揮抗炎、止痛作用[15-16]。然而，藥物動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明,大鼠靜脈注射FA，體內(nèi)消除半衰期T1/2β 為5.8 h，主要以PA羥化物和葡萄糖醛酸結(jié)合物的形式經(jīng)腎排泄,用藥后48 h，尿中藥物累積排泄量約為給藥劑量的85%[17]。然而，F(xiàn)A的預(yù)處理后48 h實(shí)施腦I-R損傷，仍表現(xiàn)出明顯的腦保護(hù)效應(yīng)?？梢?jiàn)，單用FA直接作用COX-2酶難以做出合理的解釋[5]。經(jīng)全面分析后，認(rèn)為FA的預(yù)處理對(duì)腦保護(hù)的機(jī)制應(yīng)為，F(xiàn)A的預(yù)處理可通過(guò)抑制COX-2上游物質(zhì)的活性，使梗死灶周?chē)べ|(zhì)中COX-2陽(yáng)性細(xì)胞的過(guò)度表達(dá)降低、減少COX-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，阻止花生四烯酸合成PGs，降低中樞炎性反應(yīng)的規(guī)模，實(shí)現(xiàn)腦保護(hù)的目標(biāo)。

綜上所述，F(xiàn)A的重復(fù)預(yù)處理對(duì)腦保護(hù)效果優(yōu)于單次預(yù)處理的腦保護(hù)效果，且重復(fù)3 d 預(yù)處理的腦保護(hù)效果達(dá)到峰值。同時(shí)，F(xiàn)A的預(yù)處理可通過(guò)抑制大鼠局灶性腦I-R損傷后皮質(zhì)中COX-2的過(guò)渡表達(dá)，減少COX-2的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，降低中樞炎性反應(yīng)規(guī)模，實(shí)現(xiàn)腦保護(hù)效應(yīng)。

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PreconditioningofflurbiprofenaxetilonexpressionofCOX-2inratswithcerebralischemiareperfusioninjury

PENG Na,FAN Hong-na

(Department of Anesthesiology,The General Hospital of Shenyang Military Command,Shenyang 110016,China)

ObjectiveTo investigate the brain protective effect and the expression of cyclooxygenase-2(COX-2)in cerebral cortex of flurbiprofen axetil(FA)preconditioning on focal cerebral ischemical-reperfusion(I-R)injury in rats.MethodsThirty-two male SD rats were randomly divided into 4 groups,which were I-R,PC-1 day,PC-3 days and PC-5 days groups with 8 rats in each group.Intravenous FA 20 mg/kg in the last 3 groups was given for 1 day,3 days and 5 days,respectively,before the establishment of cerebral I-R model by meddle artery occlusion(MAOC).The neurologic deficit score(NDS)was measured by Garcia scoring at 24 hours after I-R.The brain infarct volume percentage(BIVP)was then assessed after 1% TTC staining following the last neurological outcome evaluation.Twenty male SD rats were randomly divided into 4 groups,which were CON,FA 20′,I-R and FA 20 groups with 5 rats in each group.In the FA 20′group,the dose of FA 20 mg/kg was intravenously administered,while MCAO model was not made.In the FA20 group,the dose of FA 20 mg/kg was intravenously administered at 6 hours before cerebral ischemia,MCAO model was made,the frozen section was made at 24 hours after I-R and done for immunohistochemistry stain.ResultsThe NDS in PC-1 day,PC-3 days and PC-5 days groups at 24 h after I-R were not only greatly higher than that in I-R group (P<0.05),BIVP reduced significantly than that in I-R group (P<0.05).Moreover,the brain protective effect by FA repetitional preconditioning in PC-3 days group was better than that in PC-1 day group (P<0.05),and it reached the peak value.The response intensity of COX-2 positive cells in I-R group was significantly higher than that in CON group and FA20′group(P<0.05).The response intensity of COX-2 in FA20 group was significantly weaker,and its number of positive cells was greatly diminished comparing with that in I-R group(P<0.05),while compared with the CON group and FA20′group,the number of positive cells remained high(P<0.05).ConclusionThe brain protective effect by FA repetitional preconditioning is better than that by FA single preconditioning,and it reaches the peak value when repetitional preconditioning is for 3 days;to realize the protection of cerebral ischemia-reperfusion injury by FA repetitional preconditioning would pass through by inhibiting over-expression of COX-2 in cerebral cortex after focal cerebral ischemia-reperfusion injury in rats.

Flurbiprofen axetil; Cerebral ischemia-reperfusion injury; cyclooxygenase-2; Brain protection

彭 娜(1981-)，女，遼寧鐵嶺人，主治醫(yī)師，碩士

范紅娜，E-mail：hongnafan@163.com

2095-5561(2017)06-0354-07DOI∶10.16048/j.issn.2095-5561.2017.06.10

2017-10-18